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基因文库中目的基因的筛选
克隆基因的方法有很多，根据研究基础的不同，可以使用以下的方法克隆目的基因：
1. PCR
或
RT-PCR
法
2.
从基因文库中分离基因
3.
从
cDNA
文库中分离基因
4.
转座子标签法
5.
图位克隆法
6.
差减杂交法、扣除杂交、差异显示法
7.
人工合成法
本章中主要介绍从基因文库中筛选目的基因的几种方法。
获的目的克隆的方法有两种
1
）
目的基因的直接选择
2
）
从基因文库中筛选
称为鸟枪射击法，建立一个包含所有基因或大部分基因的克隆，从中筛选目的克隆。
一、直接选择
直接选择的基因比较少，如抗生素抗性基因。如 克隆一个
kan
抗性基因，在
R6-5
质粒上含
有四种抗性基因：< br>kan,
氯霉素、链霉素、硫胺类药物，
kan
抗性基因存在于
13
个
EcoRI
片段中
的一段中。将
R6-5
的片段插入pBR322
的
EcoRI
位点中，连接混合物中将含有
13
个 不同片段
的大量重组拷贝，其中部分是
kan
抗性的。只有含
kan
的克隆才能在含有
kan
的培养基上正常
生长。
1.1
标记援救可以扩大直接选择的范围
利用
E. coli
的突变系可扩展该项技术。例如要从
E. coli
中克隆
trpA
基因，编码色氨酸合成
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本文更新与2021-02-28 15:59，由作者提供，不代表本网站立场，转载请注明出处：http://www.xapfxb.com/yuer/462431.html