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实验二
病料的采集、保存及送检
一、目的
掌握被检病料的采取、保存、送检的方法。
二、材料
实验动物（鸡）、瓷盘、剪子、镊子、酒精灯、酒精、接种环、载玻片、
火柴棒等。
三、病料的采取
1.
采取病料的基本原则
(1)
采集最适病料
理想的病料，应是无菌采取的含病原微生物量高的血 液、器官组
织或分泌物和排泄物。因此要根据疾病的病性采取合适的病料，如无法估计是何种疾病
时，应根据临床症状和病理变化采集病料或全面采取病料。取材时应注意病原微生物感
染所致疾病的类 型
(
如呼吸道感染疾病、胃肠道感染疾病、皮肤和粘膜性疾病、败血性疾
病等
)
、病原微生物的侵入部位、病原微生物感染的靶器官等。细菌检验病料应当是采自
未经抗菌药 物治疗的患病动物，并且应多做几张涂片。
(2)
适时采集
采 集病料的时间一般在疾病流行早期、典型病急性期，此时病原微生
物的检出率高；后期由于体内免疫力的 产生，病原微生物减少，检测病原微生物比较困
难，同时可能出现交叉感染，增加判断的困难性。在采集 供抗体测定用的血清时，可适
时地采集急性期和恢复期的两份血清样品，一般两份血清的间隔时间为14
～
2ld
。内脏病
料的采取，须于动物死后立即进行；夏季最迟不超 过
4
～
6h
，冬天不超过
24h
，否则时间
过长， 由肠内侵入其他细菌，致使尸体腐败，有碍于病原菌的检出。供做切片的样品采
取后必须立即投入固定液 ，否则时间过长，会使细菌和组织细胞死亡、溶解，影响检验
结果。有条件做现场培养时，剖开尸体后应 进行接种培养，然后采样，最后剖检
。
(3)
无菌操作
采集病料所用的器械及容器要进行严格的消毒：刀、剪、镊子等金属
用具可煮沸消毒
30mi n
，使用前最好用酒精擦拭，并在火焰上烧一下；器皿（玻制、陶制
及珐琅制等）
在高 压灭菌器或干烤箱内灭菌；
软木塞和橡皮塞应高压灭菌；
载玻片用
2%
～5%
碳酸钠煮沸消毒
5
～
10min
，煮沸后用清水冲洗干净， 拭干保存或浸泡于
95%
酒精中以备
使用；注射器和针头放于清洁水中煮沸
3 0min
即可，或用一次性注射器。病料采取过程都
应该无菌操作，尽量避免杂菌污染。采取一 种病料，使用一套器械，或器械酒精擦拭火
焰灭菌后再采取另一种病料；一种病料放入一种容器，不可混 放。
(4)
剖前检查
若有突然死亡或病因不明的尸体，
须先采取末梢血液制成涂片，
镜检，
观察是否有炭疽杆菌存在。若疑似炭疽时，不得进行解剖 ；如需要剖检并获取病料时，
应经上级有关部门同意，选择合适的场地，做好严格的防范工作，剖后要进 行严格的消
毒处理。只有在确定不是炭疽后，方可进行剖检。
2.
病料采集的方法
（
1
）液体材料
一般用灭菌棉拭子采取破溃的脓汁、鼻液、阴道分泌物与排泄物。
未破的脓肿、胸水、腹水在皮肤表面 消毒后，用无菌注射器抽取。
（
2
）血液
无菌采取血 液，供病原培养、抗体检测和血液检查之用。体型较大的单
蹄和偶蹄类动物少量血样可以从耳背静脉采血 ；毛皮动物少量采血可通过耳壳外侧静脉
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采取 ；鼠类可以通过尾尖、耳背静脉、眼窝内血管采血；兔可从耳背静脉、颈静脉、心
脏等处采血；鸟类可以 从肘关节内侧的翅静脉、跖部内静脉或心脏采血。
（
3
）乳汁
乳房先用消毒药水洗净（取乳者的手也应事先消毒），并把乳房附近的
毛刷湿，最初所挤的3
～
4
股乳汁弃去，然后再采集
10ml
左右乳汁于灭菌试管中 。若仅供
显微镜直接染色检查，则可于其中加入
0.5%
的福尔马林液。
（
4
）淋巴结及内脏组织
应在尸体解剖后立即采取。将淋巴结、 肺、肝、脾及肾等
3
有病变的部位各采取
1
～
2cm
的小方 块，分别置于灭菌容器中，并尽可能采取有病变及病
变交界处的部位。
（
5
）胃肠及内容物
可将胃肠剪下，两端扎好，送往实验室。或 用烧红的器具烧烙
表面后穿一小孔，用灭菌棉拭子取其内容物，放入无菌的器皿内或放入装有生理盐水或
PBS
的试管内。
（
6
）脑、脊髓
按病理解剖方法取出脑、脊髓。取一部分放入
10%
福尔马林溶液的
瓶中，供组织学检 查；一部分放入
50%
甘油生理盐水瓶中，供微生物学检查。或者将头部
取下，用塑料 口袋包好直接送检。
（
7
）胆汁
先用烧红刀片或铁片 烧烙胆囊表面，再用灭菌细管或注射器刺入胆囊内
吸取胆汁，置于灭菌试管中。
2
（
8
）皮肤
去大小约
10
×
10cm
的皮肤一块，保存于
30%
甘油缓冲溶液中，或
10%
饱 和
盐水溶液中，或
10%
福尔马林液中。
（
9
）
骨头
需要完整的骨头时，
应将附着的肌 肉和韧带等全部除去，
表面撒上食盐，
然后包于浸过
5%
石炭酸水或
0.1%
升汞液的纱布或麻布中，装于木箱内送到实验室。
(10)
流产胎儿及小动物尸体
将流产胎儿及小动物尸体包入不透水塑料 薄膜、油纸
或油布中，装于木箱内送到实验室。
二、病料的保存
1.
常用保存剂的配制
（
1
）
30%
甘油缓冲溶液
纯中性甘油
30ml
NaCl 0.5g
碱性磷酸钠
1.0g
0.02%
酚红
1.5ml
中性蒸流水加至
100ml
混合分装后，
0.105Mpa
高压灭菌
30min
（
2
）
50%
甘油缓冲盐水溶液
NaCl 2.5g
酸性磷酸钠
0.46g
碱性磷酸钠
10.74g
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纯中性甘油
150ml
中性蒸流水
150ml
混合分装后，
0.105Mpa
高压灭菌
30min
（
3
）
10%
福尔马林溶液
取福尔马林
10ml
加入蒸馏水
90ml
即成。
（
4
）饱和盐水溶液
取一定的蒸馏水加入纯
NaCl< br>，不断搅拌至不能溶解为止（一般
为
38%
～
39%
左右）， 然后用滤纸过滤。
（
5
）鸡蛋生理盐水溶液
先将新鲜 鸡蛋的表面用碘酒消毒，然后打开内容物倾入灭
菌的三角瓶中，加入灭菌盐水（占总量的
10%
），摇匀后，用无菌纱布过滤，然后加热至
56
～
58
℃
3 0min
，第
2d
及第
3d
按上法再加热一次，即可应用。
2.
常用保存方法
（
1
）液体病料
检查抗体用的血液，不加抗凝剂，待凝血后，分离血清放入青霉素
小瓶中。供病原分离培养用的液体病料 ，同容器一起放入有冰的保温瓶或
4
℃冰箱内。
（
2
）供细菌学检验的实质脏器
若
1
～
2d
内能送到实验室，可放在有冰的保温瓶或
冰箱内，也可放入灭菌液体石蜡或
30 %
甘油缓冲盐水内。如无冰，也可在保温瓶内放氯化
铵
500g
加水
1500ml
，使保温瓶内保持
O
℃左右达
24h
。
（
3
）供病毒学检验的实质脏器
应尽快送检，如不能即刻送检而 需要保存时，必须
保持在冷的环境中，
48h
内送到实验室。一般放在
50%
甘油缓冲盐水溶液或鸡蛋生理盐水
溶液中，
4
℃保存最好，
原因是冻 化过程能使病毒破坏。
如需保存较长时间才能进行检查，
最好放在一
20
℃以 下或干冰中保存。
（
4
）
病理组织病料
采取 的病料立即放入
10
倍体积的
10%
福尔马林溶液或
95%
～
100%
酒精中，
如用
10%
福尔马林溶液固定组织时，
经
24h
应重换新鲜液一次。
神经系统组织
（脑、
脊髓等），需固定 于
10%
中性福尔马林溶液内（福尔马林溶液的总容积中加入
5%
～
10%
碳
酸镁）
。
在寒冷季节，
为了避免病料冻结，
在运送 前，
可将预先固定的病料置于含有
30%
～
50%
甘油的
1 0%
福尔马林溶液中。
三、
病料的送检
供细菌检验用 的病料，要防止腐败，必须及时送检。一般可用有
冰块的保温瓶或其他低温条件，以使病料不腐败。最好 由专人送检，并带好送检的有关
病情、病例、剖检等记录，以供检验人员的参考。
为 避免散播病原，盛有病料的容器，瓶口要盖紧，用胶布封好或石蜡封固，并用消
毒液充分擦拭容器的表面 。瓶上加贴标签，注明样品来源、种类、保存方法、采集时间
等。为避免病料外漏，应立放于金属筒内， 填塞防震填充料
(
木屑、纸渣、稻草、塑料泡
沫的渣屑等
)
。
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实验三
免疫接种
一、目的
掌握免疫接种的方法和步骤，熟悉生物制剂的保存、运送和用前检查方
法。
二、内容及方法
（一）免疫接种的方法
按疫苗使用说明的方法接种，常用以下几种方法。
1.
注射免疫
操作简单，剂量准确。
（
1
）皮下注射法
< br>部位：马、牛等大家畜在颈侧，猪在耳根后方，家禽在胸部、大腿内侧。先剪毛，
用酒精或碘酒消 毒，然后注入药液。
优点：操作简单，吸收较皮内快。
缺点：使用剂量多，反应较皮内大。
用途：疫苗和免疫血清。
（
2
）肌肉注射法
部位：马、牛、猪、羊在臀部和颈部，家禽在胸 部。先剪毛，用洒精或碘酒消毒，
然后把针头刺入肌肉，注入药液。
优点：操作简单，吸收快。
缺点：一个部位不能大量注射，臀部接种不当时易引起跛行。
用途：疫苗和血清。
（
3
）皮内注射法
部位：马在颈侧、眼睑，牛羊在颈侧、尾根、肩胛中央，猪在耳根，鸡在肉髯。
优点：用量较少，反应小（副作用小）
，免疫力高（同量与皮下相比）
。
缺点：比较麻烦。
用途：痘苗和诊断液。
（
4
）静脉注射
部位：马牛羊在颈静脉，猪在耳静脉，鸡在翼下静脉。
优点：使用剂量大，见效快，可及时抢救病畜。
缺点：比较麻烦，易引起过敏反应（接种异种动物血清时，即血清病）
。
用途：免疫血清。
2.
皮肤刺种法
鸡新城疫 、
鸡痘疫苗常用此法接种，
选定翅内侧无血管处，
用刺种针
或钢笔尖蘸取疫苗 刺入。
3.
滴鼻或点眼法
用滴管吸取疫苗滴在鼻孔内或眼结膜。
4.
口服法
用法 ：将疫苗混入饮水或拌入饲料通过饮水或采食经口免疫。必须注意，饮水免疫
前要停水
4
～
6h
，
稀释疫苗的水要纯净，
尤其不能用含有消毒剂的水稀释疫苗；用于拌疫
苗的饲料要新鲜，不宜用酸败或发酵饲料，大小动物要分开喂，使其能均匀吃到含疫苗的饲料；口服免疫前后
24h
不得饮用任何消毒药物，用活菌制剂时不能应用抗菌药物。< br>
优点：省时、省力。
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缺点：每头（只）剂量不准。
5.
喷雾法
（
1
）使用仪器
气雾发生器。压力为
2kg/ cm
2
（使
70%
的微粒在
1
～
10um
）
。
（
2
）分类
室内气雾免疫
动物进入室内，关闭门窗，喷头由门窗缝伸入，与动物头部同高，
持续
20
～
30min
。
室外气雾免疫
四周有矮墙的圈内，喷头与动物头同高，人员要走动，站上风，数
分钟。
（
3
）注意
操作者要防护自己，带大而厚的口罩穿工作服，胶靴，如出现症状，及
时就医。
（
4
）影响因素
雾化粒子大小
1
～< br>10um
，如过大被鼻粘膜阻止，过小吸入后被绒毛
运动排除；风力、风速；温度、湿度 。
（
5
）优点
省时、省力。适于大群动物免。
（
6
）缺点
需要的疫苗数量多。
（二）疫苗的保存、运送和用前检查
1.
疫苗的保存
按说明保存。
一般弱毒疫苗保存在—
15
℃以下，
灭活疫苗在
4
～
10
℃。
2.
疫苗的运送
要求包装完善，
防止碰坏瓶子和 散播活的弱毒病原体，
因此，
运送疫
苗，逐瓶包装，然后装箱。弱毒疫苗（活疫苗）一 般要求“冷链”运送，即需要冷藏工
具如冷藏车、冷藏箱、保温瓶等，以免其性能降低或丧失。严防在高 温和日光下运输。
灭活苗运送中也要防止冻结和曝晒。
3.
疫苗的用前检查
玻璃瓶或安瓿应无破损，
瓶塞应密 封；
瓶签上记载的名称、
批号、
有效期、容量、检查号码及使用方法等必须清楚；药品 色泽及其物理性状必须和药品说
明书上记载相符合，否则不得使用。
(
三
)
免疫接种的组织工作
接种时的组织工作 是特别重要的，因为它可以决定全部措施的结果和成效。接种时
组织工作如下：
1.
进行免疫接种时，
应事先取得当地场、
队等领导的支持，
并商请给以人力物力 等保
证。并向有关人员宣传免疫接种的基本知识和注意事项等。
2.
组织好接种人员，准备好场地和保定工具。
3.
编订全部注射家畜的登记表册，进行编号，避免错乱而造成重复注射。
（四）预防接种的注意事项
1.
根据当地传染病的发生和流行情况，选择适合本地的有效疫苗。
2.< br>接种前应对接种畜群进行详细检查和了解，凡体质过于瘦弱、年幼、孕母畜（尤其
是临产母畜）< br>、泌乳期母畜或产卵期家禽及有慢性病的，一般情况下均不应注射。
3.
准备 好各种物品，如疫苗、注射器、针头、酒精、碘酊、脱脂棉、煮沸消毒器、登
记表格等。注射针头尽可能 做到每注射一头动物换一个针头，用完要经消毒后再用。吸
取药品时，先除去封口上的火胶或石蜡，用酒 精棉擦净瓶塞，然后把消过毒的针头插入，
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用 注射器吸取药液。一次不能吸完时，不要把针头拔出，用酒精棉球包裹，以便继续吸
取。不用已注射过的 针头吸取，以免污染。注射工具
(
注射器、针头、镊子等
)
用前要煮沸
消毒。用毕后浸泡于消毒溶液内，时间至少
lh
，洗净揩干用白布分别包好保存。
4.
所用疫苗应按规定的稀释倍数用生理盐水、蒸馏水或瓶签上规定的稀释液进行稀
释 。稀释了的疫苗必须当天用完，否则废弃。
5.
接种弱毒活菌苗前后
5天，停止使用对菌苗菌株敏感的药物。以免影响免疫效果。
6.
要做好预防接种 的详细记录，包括接种日期、动物品种、年龄、数量、所用疫苗的
名称、厂名、批号、生产日期及有效期 、稀释剂及稀释倍数、接种方法、操作人员等。
7.
接种后，要注意观察畜群接种反 应（包括正常的及异常的反应）
，如有不良反应或
发病等情况，应根据具体情况采取适当措施（ 如治疗）
，疫苗接种经过一定时间后，应检
查免疫效果，以便及时发现问题。
8.
工作人员注意自己的防护，
需穿工作服及胶鞋，
必要时戴口罩。
工作前 后均应洗手
消毒，工作中不应吸烟和吃食物。
9.
针筒排气溢出的药液，< br>应吸积于酒精棉花上，
并将其收集于专用瓶内，
用过的酒精
棉或碘酒棉和未使用 完的药液等，应集中后烧毁之。
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本文更新与2021-02-27 13:26，由作者提供，不代表本网站立场，转载请注明出处：http://www.xapfxb.com/yuer/459731.html