细菌分离培养

2021年2月27日发(作者：如何减掉腰腹部赘肉)

试验一

细菌分离培养


试验目的
：
1
、掌握培养基的原理、分类及配置方法。

2
、熟悉无菌操作技术、细菌标本的分离、纯化接种方法

3
、熟悉细菌培养所用的基本仪器及使用方法。

试验仪器
：
生物安全柜、
电热恒温培养箱、
电冰箱、
低温冰箱、
蒸汽高压消毒器、超净工作台、电子天平、普通光学显微镜、鼓风干燥箱，电磁炉，微
波炉等

试验材料：

1
、菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌（阴性、阳性各一）。

2
、培养基：普通琼脂培养基（斜面、平板）。

试验步骤：

1
、绪论录象（约
30
分钟）

2
、宣读微生物实验室规则

3
、细菌接种：

①平板倾注，每人倾注一个平板；

②平板划线，四区划线，分离单个菌落。

③细菌斜面接种。

4
、结果报告

5
、讨论













讲述：

一、细菌的人工培养



微生物的生长 ，
除了受本身的遗传特性决定外，
还受到许多外界因素的影响，
如营养物浓度、温度、 水分、气体环境、
pH
等。微生物的种类不同，培养的方
式和所需要的条件也不尽相同 。


（一）影响微生物生长的因素

微生物的生长，
除了 受本身的遗传特性决定外，
还受到外界许多因素的影响。
影响微生物生长的因素很多，简要介绍 如下。

1)
营养物质

细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在 自然界中，它们到处生长，可谓是
无孔不入。然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。 故有的营
养要求相对较高的细菌，培养时需加相应的营养物质，以维持其生长需要。

２）温度



在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温 度
三基点
：最低生
长温度、
最适生长温度和最高生长温度。
在生长温 度三基点内，
微生物都能生长，
但生长速率不一样。
微生物只有处于最适生长温度时，
生长速度才最快，
待时最
短。超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会 死亡。超过最高生
长温度，微生物也要停止生长，温度过高。也会死亡。一般情况下，每种微生物
的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。



根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：



a.
嗜冷微生物：其是适生长温度多数在
-
10
℃－
20
℃之间



b.
中温微生物：其最适生长温度一般在
20
℃－
45
℃之间



c.
嗜热微生物：生长温度在
45
℃以上。

３）湿度



水分是微生物进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发 ，首先需要水分。
微生物是不能脱离水而生存的。
但是微生物只能在水溶液中生长，
而 不能生活在
纯水中
。
各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，
均具有狭 小的适当的水
分活性区域。



４）气体


A
氧气

按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。



a.
需氧微生物



这类微生物需要氧气供呼吸之用。没 有氧气，便不能生长，但是高浓度
的氧气对需氧微生物也是有毒的。
很多需氧微生物不能在氧气 浓度大于大气中氧
气浓度的条件下生长。绝大多数微生物都属于这个类型。



b
.
兼性需氧微生物



这类微生物 在有氧气存在或无氧气存在情况下，都能生长，只不过所进
行的代谢途径不同罢了。
在无氧气存 在的条件下，
它进行发酵作用，
例如酵母菌
的无氧乙醇发酵。




c.
微量需氧微生物



这类菌是 需要氧气的，但只在
0.2
大气压下生长最好。这可能是由一它
们含有在强氧化条件下 失活的酶，因而只有在低压下作用。



d.
耐氧微生物



这类微生物在生长过程中，不需要氧气，但也不怕氧气存在，不会被氧
气所杀死。



c.
厌氧微生物



这类微生物在 生长过程中，不需要分子氧。分子氧存在对它们生长产生
毒害，不是被抑制，就是被杀死。

B
其他气体：

有的细菌生长需要氮气、二氧化碳等气体

物理因素：如射线
----
日光、紫外线、声波；

5
）其他因素：



化学因素：
Ph
、消毒剂、防腐剂等














生物因素：抗生素、细菌素、噬菌体等

（二）培养基


营养成分：水、氮源、碳源、无机盐、生长因子

1
、培养基的主要成分


凝固物质：琼脂、明胶、卵蛋白及血清等


抑制剂：加入某些化学物质（如抗生素等药物），


抑制某些非目的菌生长，有利于目的菌的生长