湘乡市第二人民医院中医药管理局标书

2021年2月12日发(作者：疣的治疗)
附件
3
：


湖南省中医药科研计划项目申请书

上册（任务书）









课题名称：

二甲双胍联合滋肾活血汤对
2
型糖尿

病大鼠
CRP
、
TNF-a
的影响的实验研究

课题类别：

一般项目

承担单位：

湖南中医药大学

课题负责人：

颜国富

联系手机：

课题申请时间：
2011.4.18



湖南省中医药管理局


填写说明

一、请用
A4
纸打印，页面不敷可另加页。

二、所有栏目应如实填写，确无填写内容请填“无”。

三、课题研究周期一般设计为二年，最长不超过四年。


共同条款

签约各方应共同遵守以下条款：

一、湖南省中医药管理局为甲方，课题牵头单位为乙 方，牵头单位所在市州
卫生行政部门或省部直单位为丙方。

二、任务执行过程中，乙 丙方如需变更任务书内容，应向甲方提出书面说明，
经批准后实施。在未接到正式批准前，乙丙方须按原 任务书履行，否则，后果由
乙丙双方负责。

三、本任务书为下达湖南省中医药管理局 科技计划项目使用，甲丙方对课题
研究有监督权、处置权。乙方因主、客观原因不能按任务书约定内容执 行时，甲
方有权终止任务，乙方应偿还已投入的全部经费。

四、本任务书由签约方各持一份。

一、基本情况

名称

二甲双胍联合滋肾活血汤对
2
型糖尿病大鼠
CRP
、
TNF -a
的影响的实验研究

研

所属学科

生物与医药

研究工作总经费

3
万

究

研究工作起止年月

2011.6
—
2013.6
课

本课题成果预期达到国内领先水平，尤其在糖尿病专业领域采用中药预
题

预期成果

防与治疗糖尿病血管并发症方面起到指导性作用。

序
学
课题中
姓名

身份证号

职称

所在单位

签名

号

历

分工

全面负
责指导
湖南中医药
课题全
颜国
本
1
430016
教授


大学附属岳
过程的
富

科

设计实
阳医院

施


课

具体设
题

计实施
湖南中医药
组

主治
硕
方案与
2
胡仙

431382
大学附属岳

主

医师

士

资料总
阳医院

要

结

成


员

具体设
计实施
湖南中医药
李淑
硕
方案与
3
431546
教授

大学附属岳

君

士

资料总
阳医院

结


湖南中医药
实施设
硕
4
冯佩

430469
医师

大学附属岳
计方案


士

阳医院


5







序
单位名称

承

担

号

湖南中医药大学附属岳阳医院

单

1

位

2
3


二、研究目标

地址及联系电话

岳阳市枫桥湖路
269
号



本研究基于多年临 床经验和前期大量基础研究工作，旨在进一步寻求以中西医结
合为主，具有良好价效比，适合中国国情的 治疗和预防糖尿病血管病变的有效方药。
为了进一步探讨该方的作用机制，特设计此实验以深入研究，也 为其将来的开发提供
科学试验依据。


三、

主要研究内容和技术方案

一．研究内容

1.

糖尿病血管病变早期阶段病理改变的内在机制研究。


2.
中药对于糖尿病血管病变的预防和治疗作用效果评估。


3.
中药对于糖尿病血管病变的预防和治疗作用的机理研究。


4.
中药预防和治疗糖尿病多系统作用途径研究。


5.
评价中药和化学药物对于糖尿病血管病变的早期预防和治疗的效果差异。


6.
中西医结合对于糖尿病血管病变的预防和治疗作用效果评估。


7.
筛选预防和治疗糖尿病血管病变有确切作用效果的中药


二、技术方案

、拟采取的研究方法、技术路线和实验方案

1.
实验对象：


清洁级近交系雌性
Wist er
大鼠
42
只，
6
月龄，重约
150g-200 g
，由湖南省
中医药大学动物实验中心提供。

2.
实验材料饲料及饲养环境：


空白对照组常规饮食，造模组喂给高糖 高脂高胆固醇饲料。此饲料由本院实
验动物中心自配，其中含
10%
蔗糖，
1 0%
猪油，
2.5%
胆固醇。每笼
10
只，自由摄
食、饮水 。室温
18-22
°
C
，空气流通，相对湿度
55-70%
，
12
小时光照维持，昼
夜循环。


药品及试剂：


滋肾活血汤为湖南省中医药大学附属岳阳医院中药房一次性购买。


二甲双胍：北京嘉德制药有限公司生产。


实验试剂

NO
试剂盒

碧云天生物技术研究所

INS
放免试剂盒

TNF-
α
放免试剂盒

ET
放免试剂盒

SABC
免疫组化试剂盒

浓缩型
DAB
显色试剂盒



主要仪器：

北京北方生物技术研究所

北京北方生物技术研究所

北京北方生物技术研究所

博士德生物工程有限公司

博士德生物工程有限公司


BIOMIAS
图像分析系统：

湖南中医药大学基础研究院


日本尼泰克
ACE919
型全自动生化分析仪。


法国
S-500P
半自动生化分析仪。


光镜
:OLYMPUS BX50
日本产


电镜
:
日本
JEM-1010
（
HC
）
100KV高衬度透射电子显微镜

3.
实验方法：


造模方法：造模组高糖高脂高胆固醇饲料喂养
2
个月后，禁食
12
小 时，断尾
取血，血糖值为
16.7mmol/l-25mmol/l
者入选。造模成功 后，各组恢复常规饮
食。

分组方法：动物购回，适应性喂养一周后，随机分成空白对 照组、模型对照
组、中药组、二甲双胍组、中药
+
二甲双胍组（
n=6
）
，除空白对照组外，其他动物
均用于造模。造模后，选择符合模型标准的大鼠分别随机分组 如下：模型对照
组、中药组、二甲双胍组、中药
+
二甲双胍组，各组数量保持相等，每 组均为
6
只。

给药方法：从造模成功后的第一天开始给药，疗程为
8
周。灌胃情况如下：

1
中药组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的
10
倍，即
6ml/ kg
，每日
1
次，
○
共
8
周；

2
二甲双胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的
10
倍，即
6ml/kg
，每日
1
○
次，共
8
周；

3
中 药
+
二甲双胍组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的
10
倍，即
6 ml/kg
，每
○
日
2
次，共
8
周；
< br>4
模型对照组：每日灌胃量相当于临床成人用药量的
10
倍，即
6ml /kg
，每日
1
○
次，共
8
周；

5空白对照组：每日灌相当于临床成人用药量的
10
倍的生理盐水，即
6ml/kg
，
○
每日
1
次，共
8
周；

测试指标及取材


动物给药
8
周后，处死前
12h
禁食，股动脉取血约
4
～
5ml
，其中
1.5ml
于
EDTA+
抑肽酶的抗凝试管内，用做
ET
的检测。余血放置于试 管内，离心取血
清，备做
NO
、
INS
、
TNF-
α
、
TG
、
BUN
、
CREA
、
UA的检测。立即取胰腺、肝脏、肾
脏病理切片：
HE
染色；股动脉、腹主动脉病理切片：
MASSON
染色

4.
统计方法：


所有数据均采用
SPSS
统计软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（
x
±S）表示。两样本均数比较采用成组
t
检验（
One- Sample T Test
）
，多样本均
数的两两比较采用单因素方差分析（
one-way ANOVA
）
。以
P
＜
0.05
作为有显著性
差异 。

5.
技术路线：
（附图于后）


实验 开始前，随机抽取
6
只大鼠作为空白组对照组，并立即断头处死，取血
标本测定生化指 标。然后迅速剥离取出双侧髂股动脉、腹主动脉、胰腺、肾脏用
生理盐水冲洗，
10%
福尔马林原位固定
24h
，常规制片，动脉用
MASSON
染色，内
脏用
HE
染色，做光镜、电镜检查。造模成功后，选取成模大鼠，随机分成模型对
照组 、中药组、二甲双胍组、中药
+
二甲双胍组。除模型对照组外，余组均给药。
治疗8
周后，将全部大鼠处死，收集上述生化、放免及病理切片等各项指标。各
组为
6
只算入统计，认真详细记录所有数据。


















技术路线附图如下：


取血生化指标：
FP G
、
TG
、
HDL
、
取
6
只断头处死

购
入
TC
。

作为空白对照组


清
洁

级
取肝、胰、肾、股动脉、腹主动脉
< br>Wistar
做
病
理
切
片
，
准
备< br>光
镜
和
电
镜
检

大
鼠

34
只大鼠喂高糖
40
8
周后

高
脂高
胆
固
醇
饲
只
，
取
6
只

料
（
10%
蔗
糖
，
大
鼠
做

适
应


10%
猪油，
2.5%

性
喂

上
述
指
胆固醇）
，共
8

养
1
标


周。

周。




模型对照组




用药
8
周后各组分别处
中药组



死，测所有指标。




二甲双胍组



中药
+
二甲双胍组







统
计
指
标
，
评
估
标



本，发表论文，实验

结束。











四、实施计划和考核指标

工作起止年月

2012
年1
月
-2012
年
3
月

2012年
4
月
-2012
年
6
月

2012
年
7
月
-2012
年
9
月

2012
年
10
月
-
2012
年
12
月

2013
年
1
月
-2013
年
3
月

2013
年
4
月
-2013
年
6
月

2013
年
7
月
-2013
年
9
月

2013
年
10
月
-
2013< br>年
12
月

研究内容

检索资料，开题


购买大鼠、联系实验室，准备预试验

统计数据，初评实验

正式实验

扫尾工作，形态学观察。

考核
经费预算
指标

（万元）











相关指标检测

数据收集，汇总分析


统计数据，总结课题，发表文章，申请成果鉴
定。


























其他说明

















注：时间安排以
3
个月为单位填写。








五、经费预算分类细目

科目

细目

规格

实验材料费

试剂药品、
Wistar

动物采购、
大鼠

耗材


小
型
专
用
仪
实验观察和

器设备费

资料收集仪
器购买费用


数量

单价

经费预算（元）

预
实
35
0.9
万


验
10

只
+
正
式
实
验
40
只



0.4
万



备注

业务费


资料查新和

收集





0.1
万


协作费


科研协作

费、设备租
赁使用费





0.4
万


差旅费

管理费


参加会议和

科研协作，

管理和协调





0.2
万


2
万

经费合计







六、签约

一、甲方：湖南省中医药管理局

同意将本课题列为湖南省中医药科研计划项目。

课题资助金额：

万元

课题编号：






科技主管：

湖南省中医药管理局（盖章）


年

月

日

二、乙方：课题牵头单位

匹配研究经费：

万元

课题组第一负责人：

财务负责人：

开户名、行及帐号：


同意按任务书约定内容执行。




科技主管：

单位（盖章）


年

月

日


其他单位科技主管：

单位（盖章）





其他单位科技主管：


单位（盖章）

三、丙方：课题牵头单位所在市州卫生行政部门（或省部直单位等）




同意按要求进行日常管理。





科技主管：

单位（盖章）


年

月

日


注：请在详细了解共同条款之后签署。
















湖南省中医药科研计划项目申请书

下册









课题名称：

二甲双胍联合滋肾活血汤对
2
型糖尿

病大鼠
CRP
、
TNF-a
的影响的实验研究

申请时间：
2011-4-22




湖南省中医药管理局










一、研究本课题的科学依 据（包括本领域研究现状、水平、发展趋势、存在
问题、本课题特色、创新之处等）

随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，糖尿病患病率逐年增加。根
据国际糖尿病联盟
(I nternational DiabetesFederation IDF)
统计，目前全球
有糖尿病患者
2
．
33
亿，预计到
2025
年全球将有< br>3
．
80
亿人罹患糖尿病。糖尿病
可导致多种大血管及微血管病变，其 中心血管疾病、脑血管疾病以及糖尿病肾
病为糖尿病患者的主要死亡原因。近年来，糖尿病与炎症的关系 备受关注，有
学者提出，糖尿病是一种炎症性疾病，诸多炎症因子与糖尿病及糖尿病并发症
发生 与发展密切相关。糖尿病患者在血糖升高的同时，体内炎症因子如
C
一反应
蛋白
(CRP)
、肿瘤坏死因子
-a(TNF
—
a)
、白细胞介素6(IL
一
6)
等也明显升高。

近年研究表明，胰岛素抵抗、 肥胖、高血压患者血清炎症因子包括
C
一反应
蛋白
(CRP)
、肿瘤 坏死因子一
a(TNF--a)
、白细胞介素一
6(IL
一
6)、血浆纤溶酶
原激活物抑制因子一
l(PAJ
一
1)
等升高。炎 症反应与糖尿病的发生发展以及血管
并发症的关系受到关注，目前认为
2
型糖尿病可能 是细胞因子介导的炎症反应，
是一种免疫性疾病，炎症在糖尿病的发病机制中起媒介作用
【1
】
。因此，在控制
糖尿病患者血糖的同时，应该设法减轻患者体内的慢性炎症反 应，尤其需要降
低循环中
CRP
等代表机体炎症反应的指标，以改变糖尿病及其慢性血 管并发症的
进程，延缓动脉粥样硬化的发生与发展。

CRP
是由肝脏产生的 一种急性期反应蛋白。在正常人体含量甚微，急性炎症
阶段可迅速升高，是临床上最有效的炎症标志物。 近年来多项研究结果提示，
体内
CRP
水平升高可能参与了
IR
和胰 岛
β
细胞的损害。
CRP
主要受血循环
IL-6
、
TNF-
α
调节，尤其
IL-6
是促进肝脏合成
CRP
的主 要炎症因子
,
反过来
CRP
也可以刺
激单核细胞释放
IL- 6
、
IL-1
、
TNF-
α
介导内皮细胞产生单核细胞趋化 蛋白
-1
和
内皮细胞黏附分子等
,
发挥致炎作用。

TNF-
α
是一种主要由单核
E
巨噬细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因 子，
可诱导
IL-6
、
IL-1
、
CRP
的合成。
TNF-
α
通过多种途径导致糖尿病的发生：
（
1
）直接作 用于胰岛
β
细胞，生成环磷酸鸟苷，损伤细胞
DNA
；（
2
）与其他细
胞因子协同作用，诱导
NO
的形成
,
并抑制葡萄糖诱导的 胰岛素分泌；（
3
）抑制
胰岛素受体和胰岛素受体底物
1
（
IRS-1
）的酪氨酸残基磷酸化
,
影响胰岛素信号
传导；（
4）抑制葡萄糖转运因子
4
（
GLUT4
）基因转录
,
并 使
GLUT4mRNA
降解加
速；（
5
）激活
IKK
进而促进
TNF-
α
转录，形成低度炎症的正反馈环，加重
IR
；
（
6
）抑制其他脂肪细胞因子如脂联素的合成及增加游离脂肪酸的释放等。

近年来炎症学说备受关注，认为糖尿病是一种自然免疫和低度炎症性疾病，
炎症在
2< br>型糖尿病的发病机制中起媒介作用。炎症反应程度的高低和
2
型糖尿病
中糖、脂 代谢紊乱以及后期各种并发症的出现关系密切。炎症学说的提出为糖
尿病的发病机制、探讨防治的新方法 和开发新药物提供了一个新的研究方向。
英国前瞻性糖尿病研究证实，二甲双胍是唯一能减少糖尿病大血 管并发症的口
服降糖药。二甲双胍抗炎机制可能与下列作用有关：抑制炎症因子的形成：降
低血 浆纤溶酶原激活物抑制物一
1
、
CRP
的水平，减少氧化应激，改善内皮功< br>能，从而延缓动脉粥样硬化的进程。研究发现，二甲双胍能够抑制核因子活
性，进而抑制炎症因子 的形成。

DM
属中医学“消渴”范畴。其发生多由以下病因：①先天禀赋不足。《灵
枢?五变》说“五脏皆柔弱者，善病消瘅。”②长期过食肥甘、醇酒厚味等损