鼻翼缩小手术多少钱糖尿病模型

2021年2月12日发(作者：紫草)
研究胆固醇影响大鼠脂肪代谢的机制。方法：以添加
1
％胆固醇的
AIN76
合成饲料喂食
Wistar
大鼠
4 w
，对照组不添加胆固醇。分 别测血清甘油三酯（
TG
）、总胆固醇（
TC
）、
磷脂（
P L
）、高密度脂蛋白（
HDL-C
）、血糖、游离脂肪酸（
NEFA
）浓度；测肝脏
TG
、
TC
、
PL
浓度以及苹果酸酶
（
ME
）
、
葡萄糖
6
磷酸脱氢酶
（
G6PDH
）
、
脂肪酸合成酶
（
FA S
）
、
磷脂酸磷酸酶（
PAP
）和肉毒碱棕榈酰转移酶（
C PT
）活性、酰基辅酶
A-
胆固醇酰基转移
酶
（
ACAT< br>）
、
胆固醇
7a-
羟化酶
（
CYP7A
）< br>和羟甲基戊二酸单酰辅酶
A
还原酶
（
HMG-CoA
re ductase
）
mRNA
。结果：胆固醇显著增加大鼠血液
TC
和非
HDL-C
浓度、降低
HDL-C
和
TG
浓度，使肝脏
TC
和
TG
浓度分别提高了
20
和
4
倍。胆固醇组大鼠肝脏
ME
活性降低
40
％、
G6PDH
活性降低
70
％、
FAS
活性降低
50
％，
PAP
活性降低
15
％，CPT
的活性降低
25
％，肝脏
FAS
的
mRNA
量降低
35
％，
CPT1
和
CPT2
的
mRNA
量分别降低
30
％和
50%
。
HMG-CoA
还原酶
mRNA
量降低
25%,
而
CYP7A
和
ACAT mRNA
量分别增加了
6.5
和
1.6
倍。
结论：
高胆固醇饮食引起肝脏
TG
蓄积，
但并不增加肝脏
TG
合成相关酶的活性和基因
表达。


链脲佐菌素
( strep tozotocin, STZ)

2
.
1

对肾上腺素所致小鼠高血糖模型的影响

取雄性小鼠
60
只
,
体重为
19
～
22
g,
随机分为
正常组
,
模型组
,
阳性药达美康组< br>,
苦瓜总皂苷高、
中、
低剂量共
6
组
,
苦瓜 总皂苷分别灌服苦瓜
总皂苷混悬液
(400, 200, 100 mg
·
kg- 1 ) ,
用
015%
羧甲基纤维素钠
(C MC)
配成质量浓度为
20,
10, 5 mg
·
mL - 1 ,
灌胃体积为
0102 mL
·
g - 1 ,
达美康混悬液
( 015% CMC
液
, 80 mg
·
kg- 1 ,
4 mg
·
mL - 1 , 012 mL
·
g- 1 ) ,
模型组和空白组灌服同体积的
015%CMC
液。每天给药
1
次
,
连续给药
7
d
。于最后
1
次禁食
12
h
后灌药
,
灌药后
90
min,
除空白组外每鼠 迅速腹腔注射肾上
腺素
240
μ
g
·
kg- 1 ,
空白组注射同体积生理盐水。
给肾上腺素
30 min
后
,
立即小鼠摘眼球取血
,
分离血清
,
测血糖值。

2
.
2

对四氧嘧啶所致小鼠糖尿病模型血糖的影响

取体重为
20
～
22
g
雄性小鼠
100
只
,
禁食
不禁水
12 h
后
,
每鼠尾静脉注射
80 mg
·
kg- 1
新配制的四氧嘧啶生理盐水液
,
注射后
72 h,
尾部
取血测定血清血糖值
,
选血糖值
> 1111 mmol
·
L - 1
并有明显多饮、
多食、
多尿症状的小鼠
50
只
,
分组及给药同
2
.
1
。另取
10
只未造模小鼠作为空白组。每天给药
1
次
,
连续给药
3 0 d,
每
10 d
称一次体重
,
根据体重调整给药量。分别于第
10, 20, 30
天灌胃
2 h
后
(
禁食
12h)
小鼠尾部取血
,
分离血清
,
测血糖值。

2
.
3

对地塞米松所致小鼠模型胰岛素抵抗糖耐量的影响

取小鼠60
只
,
雌雄各半
,
体重为
19
～
2 2 g,
随机均匀分为
6
组
,
分组与给药同
2
.
1
。除空白组外
,
禁食
12 h
后小鼠每天肌肉注射地
塞米松生理盐水溶液
2 mg
·
kg- 1
造糖耐量降低模型
,
并于造模同时给药
,
每天给药
1
次
,
连续给
药
7 d
。于禁食后
12 h (
末次注射地塞米松
30 min,
灌药后
1 h) ,
取血
,
测空腹血糖值
,
然后灌服葡
萄糖水溶液
5 g
·
kg- 1 ,
分别于灌糖水后
30, 60, 120 min
取血
,
测血清血糖水平。

2
.
4

对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病模型血糖的影响

取
W
istar
雄性大鼠
100
只
,
体重
180
～
200 g,
禁食
12 h
后戊巴比妥钠
25 mg
·
kg- 1
腹腔注射麻醉
,
舌下静脉注射链脲佐菌素
55 mg
·
kg-
1 (
用
pH
为
415
的枸橼酸缓冲液配制
) , 72 h
后尾部取血测血糖值
,
选取血糖值
> 1111 mmol
·
L
-
1
并具有明显的多饮、多食、多尿症状者
50
只
,
按血糖值随机均分为
5
组
,
另设
1
组空白组
(10
只
)
。给药量为
200, 100, 50mg
·
kg- 1 ,
用
015% CMC
配成剂量为
200, 100, 50mg
·
mL - 1 ,
灌胃体积为
0101 mL
·
g- 1 ,
二甲双胍
250 mg
·
kg- 1 ,
用
015%CMC
配成剂量为
250 mg
·
mL -
1 ,
灌胃体积为
0101 mL
·
g-
1
。每天给药
1
次
,
连续给药
30 d
。分别于给药的第
10, 20, 30
天
,
测空腹血糖值。于第
30
天
,
禁食后
12 h,
灌胃后
2 h,
取血
,
分离血清
,
测血糖、胰岛素。

黄酮
2

实验方法

211

正常小鼠的分组及给药

正常小鼠
50
只随机分为对照组、
TFLC
给药组
(100
、
300< br>、
900mgPkg
·
d
-
1
)
及格列本脲给药组
(50mgPkg
·
d
-
1
)
。对照组给予等体积生理盐水
(20mlPkg
·
d - 1 ) ,
均为灌胃给药
,
每天
1
次
,
连续
5
天
,
于末次给药后
3
小时取血测血糖含量。

212

肾上腺素高血糖模型的建立、
分组及给药

正常小鼠
60
只随机分为正常对照组、
高
血糖模型组、
TFLC
给药组
(100
、
300
、
900 mg/ kg
·
d - 1 )
及格列本脲给药组
(50mg/ kg
·
d
- 1 )
。正常对照组及高血糖模型组给予等量生理盐水,
均为灌胃给药
,
每天
1
次
,
连续
5
天
,
于
末次给药后
1
小时
,
正常对照组腹腔注射等体积生理盐水
,
其余
5
组均腹腔注射肾上腺素
300
μ
g
·
kg- 1 ,
诱导肾上腺素性高血糖模型
,
于注射后
30
分钟取血测血糖含量。

213

四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的建立、分组及给药

正常小鼠
60
只
,
除
10
只正常对照组
外
,
其余均尾静脉注射
1
%
四氧嘧啶生理盐水
(100mg/
kg)
制备糖尿病模型
,72
小时后
(
禁食
12
小时
)
尾静脉采血测定空腹血糖值
,
血糖值高于
1617mmol/
L
者纳入实验
,
根据血糖水平
将高血糖小鼠分为
5
组
,
灌胃给药
(TFLC 100
、
300
、
900mg/ kg
·
d - 1 ,
苯乙双胍
100mg/ kg
·
d
-
1
)
或等体积生理盐水
,
每天
1
次
,
连续
5
天
,
于末次给药前禁食
16
小时
,
末次给药后
1
小时
取血测血糖及血清胰岛素含量。

214

链脲佐菌素糖尿病大鼠模型的建立、分组及给药

SD
大鼠禁食
12
小时后腹腔注射
链脲佐菌素
40mg/
kg
,72
小时后
(
禁食
12
小时
)
尾静脉采血测定空腹 血糖值
,
血糖值高于
1617mmol
·
L - 1
者纳入实验
,
根据血糖水平将高血糖大鼠分为糖尿病模型组、
TFLC
给药组
(100
、
200
、
400mg/ kg
·
d - 1 )
及二甲双胍给药组
(200mg/ kg
·
d - 1 ) ,
每组
10
只。
另取
10
只
同批次正常大鼠作为正常对照组。正常对照组及糖 尿病模型组给予等体积生理盐水
,
均为灌
胃给药
,
每天
1
次
,
连续
14
天
,
于末次给药后
30
分钟
,
取血测定血糖及血脂。

215

测定方法

血糖测定
:
采用葡萄糖氧化酶法。
血清
TC
、
TG
测定
:
采用氧化酶法。
血清
LDL - C
、
HDL - C
测定
:
采用直接清除法。血清胰岛素测定
:
采用放射免疫法。



1
1
3

方法

1
1
3
1
2

糖尿病小鼠模型建立〔
3
〕

小鼠禁食
24 h (
自由饮水
)
后称重
,
腹腔注射
200 mg/kg
体
重的四氧嘧啶生理盐水溶液
(
新鲜配制
)
,
3
d
后禁食
3
h,
取尾血测空腹血糖
,
以血糖值大于
1010 mmol/L
的小鼠确定为糖尿病小鼠〔
4
〕。

1
1
3
1
3

动物分组和处理

糖尿病小鼠
48
只按空腹血糖水平随机分为
4
组
,
模型对照 组和豆
豉提取物低、中、高三个剂量组
,
同时正常小鼠
24
只按空腹 血糖水平随机分正常对照组和正
常高剂量组
,
低、中、高剂量组的小鼠分别给予
015
、
110
和
410 g/kg
体重豆豉提取物
,
对照组
给予蒸馏水
,
连续灌胃
30 d
后
,
测定空腹血糖。

1
1
3
1
4

糖尿病小鼠糖耐量实验

糖尿病小鼠禁食
3 h (
自由饮水
) ,
各剂量组给予不同浓度豆
豉提取物
,
模型对照组给予蒸馏水
,
20
min
后各组小鼠灌胃
2
g/kg
体重的葡萄糖溶 液
,
取尾血
测定给葡萄糖后
0
、
015
、
2 h
的血糖值
,
计算血糖曲线下面积。


血糖曲线下面积
= 0125
×
(0 h
血糖值
+ 4
×
015 h
血糖值
+ 3
×
2 h
血糖值
)


1. 2

试验方法

1. 2. 1

糖尿病模型的建立
[4 ]

选取
80
只雄性小鼠在适应性喂养
5
天后禁食
8h ,
腹腔注
射
STZ
120mg/kg
,3
天后
,
禁食
12h
,
静脉取血
,
选取血糖值高于
10mmol/
L
的小鼠纳入实
验。

1. 2. 2

降血糖试验
[5 ]

取正常小鼠
30
只分为正常对照组和正常实验组
,
每组
15
只。糖
尿病小鼠随机分为
3
组
,
即模型对照组、
粗纤维组和
SDC
组
,
每组
15
只。
实验期间给予各组
小鼠普通饲料喂养
,
其中
SDC
组和粗纤维组每天分别灌胃
SDC
水溶液
5g/
kg
和粗纤维水溶
液
10g/
kg
,
正常对照组和模型对照组每天灌胃生理盐水
0.
5ml
,
正常实验组每天灌胃给予
SDC
水溶液
5g/ kg ,
以确定
SDC
是否对正常小鼠血糖值有降低作用。连续喂养
4
周
,
每
2
周
称重一次
,
并观察其饮食状 况
,
实验结束时禁食
12h ,
小鼠眼眶静脉取血。
用酶标仪测定小鼠空
腹血糖值。

1.
2.
3

糖耐量试验

糖耐量实验动物模型分组及各组给予灌胃剂量与
2.
2
项下相同
(
不
含粗纤维组
) ,
连续灌胃
28
天
,
实验结束时禁食
12h ,
以
2. 5 g/kg < br>剂量的葡萄糖灌胃
,
分别测定
小鼠服用葡萄糖后
0h
、
0. 5h
、
2h
的血糖值。
采用
SPSS
软件处理
,
实验数据以
.x
±
s ,
多组间
比较使用方差分析。


1. 4

方法

1. 4. 1

动物模型建立及分组小鼠称重标记后禁食
12 h
。将四氧嘧啶溶解到生理盐水中分别
以
200
mg/kg
腹腔注 射。腹腔注射后
2h
灌胃
50%
葡萄糖液
0.
5
ml .
只。自然状态饲养
3
d
后
,
禁食
12 h
眼眶取血测血糖。血糖浓度高于
11. 1 mmol/L
的为糖尿病小鼠
[ 4 ]
。将造模成功
60
只的小鼠随机分为高剂量组、低剂量组、模型对照组。

1.
4.
2

给药方法正常对照组和模型对照组给予生理盐水
0.
4ml/
只
,
高剂量组给予翻白草黄
酮
216 mg/kg
灌胃
,
低剂量组给予翻白草黄酮
108 mg/kg
。
两周后禁食
12 h
称体重后摘眼球取血
清
,
测血糖、血清胰岛素和胰岛素抗体数值。

1. 4. 3

检测方法血糖采用酶法
,
血清胰岛素和胰岛素抗体采用放射免疫法。


2
1
5

生物化学指标分析

首先测定
3
组小鼠的血糖和糖化血红蛋白
(HbA1c)
的水平
[6 ] .
然后
,
乙醚麻醉小鼠
,
用肝 素
处理的注射器收集腹腔静脉血
,
离心处理血液样品
(1500g
,20min
,4
℃
)
,
收集血浆
.
分析测
定血浆中谷丙转氨酶
(GPT)
、谷草转氨酶
(GOT)
、尿素氮
(BUN)
、甘油三酯
(TG)
、总胆
固醇
(TCHO)
和
1 ,52
脱水葡糖醇
(1 ,52AG)
的水平
.


2

方法

2. 1

实验方法

取正常成年雌性小鼠
60
只
,
禁食
24h (
自由 饮水
)
后随机分为观察组
48
只和对
照组
12
只。 对照组饲喂
BW
0180
g/kg
。观察组每日均尾静脉注射
45
mg/kg
四氧嘧啶建立糖
尿病模型
, 7 d
后禁食
5 h (
自由饮水
) ,
取尾血测定血糖值
> 10 mmol/L
证 实造模成功。将观察
组大鼠随机分为
4
个亚组
,A
、
B、
C
亚组分别按
0113
、
0127
和
018 0 g/kg
饲喂
BW,D
亚组饲喂等
量蒸馏水
,
连续30 d,
禁食
5 h (
自由饮水
) ,
取尾血测定血糖值。血糖下降百分率
= (
实验前血糖
值
-
实验后血糖值
) /
实验前血糖值×
100%
。另取
48< br>只小鼠据上述方法建立糖尿病模型
,
禁食
5 h(
自由饮水
)
后随机分为
1
、
2
、
3
、
4
组各
12
只
, 1
、
2
、
3
组分别饲喂
BW 0113
、
0127
和
0180 g/kg,
4
组饲喂等量蒸馏水
, 20 min
后各组均行负荷糖耐量试验
:
经口给予
2 g/kg
的葡萄糖
,
分别于
0
、
015
、
2
h
测 定血糖值
,
比较各组口服葡萄糖后各时间点血糖曲线下面积变化。血糖曲线下面
积= 0125
×
(0 h
血糖值
+ 4
×
015h
血糖值
+3
×
2 h
血糖值
)
。


1. 4

方法

1. 4. 1

对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响

建立四氧嘧啶所致糖尿病模型
[ 3 ]
。小鼠适应
性饲养
5
天
,
禁食
(
不禁水
)
24
h
后
,
按
200
mg/kg
腹腔注射四氧嘧啶生 理盐水溶液
,
空白对照组
注射等量的生理盐水
,
72
h
后禁食
12
h,
眼眶静脉丛采血
,
用葡萄糖测试盒测定血糖值
,
选血糖