重症心肌炎砒霜治疗肝癌的研究

2021年2月6日发(作者：偏瘫复原丸)
砒霜治疗肝癌的研究

1.
课题的立项依据

肝癌是我国常 见的恶性肿瘤，死亡率高，目前尚缺乏有效的治疗手段，寻找新的治
疗药物和治疗手段具有重要意义。三 氧化二砷
(Asz0
。
)
是中药传统毒药，自从我国学者
首先用Aszos
治疗急性早幼粒细胞性白血病取得显著疗效后，
近年来人们开始研究
A sz0
。
对实体肿瘤的作用和机制，试图扩大其临床应用的范围。相继在抗食管癌、大肠癌、胃
癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、宫颈癌、卵巢肿瘤、前列腺肿瘤等实体瘤的实验和动物研
究取得了 令人瞩目的进展。

砒霜还具有杀伤肿瘤干细胞的作用。肿瘤干细胞，认为是肿瘤生长和耐药的 根源。
传统的化疗药物，往往对处于
G0
期的肿瘤干细胞没有作用。而砒霜不但可以作 用于普
通肿瘤细胞，且同时作用于肿瘤干细胞，诱导两种细胞的凋亡，且对正常细胞基本没有
影 响，副作用小，价格低廉，是目前发现的为数不多的可作用于肿瘤干细胞的药物。

较多的实验研究证明
Asz 03
可以抑制多种肝癌细胞系如
SMMC
一
7721
、
QGY7701
、
QGY
7703
、
HepG2
、
BELr7402
和
HLE
细胞的生长；
As
。
0
。在体外能够抑制肝癌细胞的增
殖，诱导细胞凋亡。
As
：
0
。与化疗有协同作用【
1
】
；能抑制端粒酶的活 性；有可能可
上调抑癌基因
P16
、癌转移相关基因纳米
23
的表达 ；对
CD44
有抑制作用，因而可能有
抑制肿瘤转移的作用口
2 3
；可使肝癌细胞分泌的免疫抑制物减少，
NK
细胞活性提高，
CD4+
含量增 加，巨噬细胞活性增强，从而改善机体的免疫功能【
2
】
；可以明显抑制人肝
癌细胞株
BEL-7402
的
VEGF
基因表达蛋白，可能有抗肝癌血管生成 的作用。自
1992
年
哈尔滨医科大学报道了三氧化二砷

（
以下简称
As203
）
治疗
APL
取得满 意疗效后
【
3
】
，
近年来，
As203
在实体瘤方 面的研究也逐渐增多。我国学者已发现
As203
治疗
APL
的
主要机制是通过诱导细胞凋亡实现的；
同时化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的研究已成为发
现新的 化疗药物的一个重要手段。

陈俊强等【
4
】建立肝癌裸鼠移植瘤模型，应用
TuNEL
法观察不同浓度的
As
：
O
。对
裸鼠移 植瘤凋亡指数
(AI)
的影响；应用免疫组化
sABC
法检测不同浓度的Aszos
对增殖
细胞核抗原阳性细胞指数
(PI)
的影响；
检 测移植瘤裸鼠的
wBC
并进行骨髓涂片检查。结
果经
Asz O
。治 疗的移植瘤裸鼠的骨髓有核细胞增生活跃，粒红比例正常，巨核细胞多
见；低、中浓度
As：
0
。治疗裸鼠移植瘤的
AI
高于对照组
(P．< br>01
和
P．
05)
；高浓
度组
AI与对照组比较无显著性差异
(P>o
．
05)
。
低、
中 浓度组
PI
低于对照组
(P．
01)
；
高浓度 组
PI
与对照组比较无显著性差异
(P>o
．
05)
。表明
Asz0
。
通过抑制肿瘤细胞增殖、
诱导细胞凋亡而达到其抗肝癌的 效果，
As
：
03
对移植瘤裸鼠骨髓无抑制作用。
Xu
等< br>n41
建立肝癌裸鼠移植瘤模型，
用免疫组织化学检测
AFP
浓度，< br>测定肿瘤重量及用电子显微
镜观察等方法，发现
Asz 0s
能够抑制肿瘤生长：
2
．
5 mg
／
kg Asz03
第
10
天的抑制率
为
53
．
42
％；5mg
／
kg
第
5
天为
79
．
28< br>％，第
10
天为
96
．
58
％。电镜发现明显的线粒
体改变及典型的凋亡改变。
张侗等口
5]
以
DEN
灌胃制备 大鼠肝癌模型，
在光镜、
透射电
镜下观察肝癌细胞的形态学改变，采用流式细胞仪，行 碘化丙啶／异硫氰酸荧光素双染
色，定量检测肝癌细胞凋亡。本实验结果发现不同剂量
As。
O
。诱导肝癌细胞凋亡的程
度不同：剂量适中，肝癌细胞凋亡率最高；剂量过高 时，诱导肝癌细胞凋亡作用并非最
强，而且可致细胞毒杀伤作用，可能对正常肝细胞产生细胞毒杀伤作用 。建立小鼠实体
型及
HepA
腹水型肝癌模型，用
Asz0
。处理， 对肝癌荷瘤鼠具有显著的抑瘤和生命延长
作用，未见明显毒副反应，而
5
一
F U
组小鼠出现不同程度的进食下降、活动减少、反
应迟钝、
体重增长缓慢。
这 种效应伴随着细胞在
G2
／
M
期的聚集
(G2
／
M
期限制
)
和
Bcl_2
／
Bax
的下调，并出现< br>Bcl
—
2
／
Bax
最低值和凋亡细胞数量高峰值。镜下观察 癌细胞成
典型的凋亡变化，
AFP
表达率下降。

祖国医学源远流长 ，博大精深，应用中医药治疗恶性肿瘤独具特色，能改善肿瘤病
人的临床症状，提高生存质量，还能在一 定程度上控制或稳定肿瘤，有助于延长生存时
间，
且毒副作用较小，
但传统中药给药途 径往往限于口服或外用，
成分复杂，
机理不明，
客观疗效低，
可重复性差，< br>极大地限制了其临床推广应用。
近年来，
我国学者不断探索，
应用现代化制药技 术从中药中分离提纯抗癌有效成分，应用于临床。综上所述，本课题
拟结合以往研究工作，
我们 希望开展了
As203
诱导肝癌细胞凋亡的研究，
以探讨其在肝
癌化疗中的可行性。

[
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，
18(1)
：
14



2.
研究内容

研究三氧化二砷

（
As203
）

对肝癌细胞株
BeI-7402
的抑制增殖效应及凋亡诱导
作用。

采用
MTT
法检测药物对细胞的抑制作用、

相差显微镜和电镜观察细胞形态变化、

琼脂糖凝胶电泳测定
DNA Ladder
、

流式细胞术检测细胞周期变化。

3.
研究目标

肝癌在我 国发病率高，
死亡率位居恶性肿瘤中前列，
中位生存期短，
由于起病隐袭，
恶 性程度高，手术切除率低，预后极差药物治疗是主要的治疗手段，但由于普遍存在的
多药耐药性和其他耐 药机制，
迄今仍缺乏高效低毒的治疗药物，
导致全身化疗疗效较低，
通过对三氧化二砷 抑制肝癌细胞的研究，寻求治疗肝癌有效药物及治疗方法。

4.
研究方法及技术路线

4.1

缓释制剂的配制

按实验一方法配制

4.2

建立裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型

用含
10%
小牛灭活血清、
100u/ml
青霉素和
100
μ
g/ml
链霉素的

RPMI-1640
培养液，在
37
℃、
5%CO2
条件下培养，消化传代，大量扩增细胞。

调整细胞数后将肿瘤细胞重悬于
PBS
中制成细胞悬液备用。取对数生长期的

hepG2
细胞，经
2.5 g/L
胰蛋白酶消化后，用无血清培养液洗涤，显微镜下

计算活细胞数，调整细胞密度为
1
×
10
7/ml
，将肿瘤细胞重悬于
PBS
中制成

细胞悬液，

在无菌条件下于裸鼠右臀部皮下接种细胞悬液
0.1ml
，

约
2
×
10
6