藿香正气水价格分子生物学实验思考题答案

2021年2月2日发(作者：中山健康网)
分子生物学实验思考题答案

实验一、基因组
DNA
的提取

1
、为什么构建
DNA
文库时，一定要用大分子
DNA?

答、
文库
的大小
(
即数目
)
取决于基因组的大小和 片段的大小，片段大则文库数目小一些也
可以包含
99%
甚至以上的基因组。而文库数 目小则方便研究人员操作和文库的保存。所以
构建文库要用携带能力大的载体
克隆
尽量 大的
DNA
片段
.
2
、如何检测和保证
DNA
的质量？


答、用< br>凝胶电泳
看，有没有质白质和
RNA
等物质的污染，还可以测
OD，用
OD260/280
来判断，

当
OD260/OD280< 1.8
，表示蛋白质含量较高

当
OD260/OD280> 2.0
，表示
RNA
含量较高

当
OD260/OD280 =1.8
～
2.0
，表示
DNA
较纯。

实验二、植物总
RNA
的提取

1
、
RNA
酶的变性和失活剂有哪些？其中在总
RNA
的抽提中主要可用哪几种？


答、
有
DEPC,Trizol
，氧钒核糖核苷复合物，
RNA酶的蛋白抑制剂以及
SDS
，尿素，硅
藻土等；在总
RNA
提取 中用
PEPC,Trizol

2
、怎样从总
RNA
中进 行
mRNA
的分离和纯化。


答、
、利用成熟的
mRNA
的末端具有
polyA
尾的特点合成一段
oligo(dT)
的引物，根据碱
基互补配对原则，可将
mRNA
从总
RNA
中分离 出来

实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备

1
、感受态细胞制备过程中应该注意什么？


答、
A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于
4℃的培养菌，最好从
-
80℃甘 油保
存的菌种中直接转接用于制备
感受态细胞
的菌液。细胞生长密度以刚进入
对数生长期
时为
宜，
可通过监测培养液的
OD600
来控制。DH5
α
菌株的
OD600
为
0.5
时，
细胞 密度在
5×107
个
/mL
左右，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。







B
）所有操作均应在无菌条 件和冰上进行；实验操作时要格外小心，悬浮细胞时要轻
柔，以免造成菌体破裂，影响转化。







C
）
经
C aCl2
处理的细胞，
在低温条件下，
一定的时间内转化率随时间的推移而增加，D
）





化合物及
无机离子< br>的影响：在
Ca2+
的基础上联合其他二价金属离子（如
Mn2+
或< br>
Co2+
）
、
DMSO
或
还原剂
等物质处 理细菌，可使转化效率大大提高（
100-1000
倍）
；








E
）所使用的器皿必须干净 。少量的
去污剂
或其它化学物质的存在可能大大降低细菌
的转化效率；

2
、感受态细胞制备可用在哪些研究和应用领域？


答、
在
基因工程
中将
质粒
导入受体细胞是如果受体细胞是细菌则将它用
C a2+
处理变为
感受
态细胞
质粒进入。

实验五、质粒在大肠杆菌中的转化和鉴定

1
、在热激以后进行活化培养，这时的培养基中为什么不加入抗生素？

< br>答、
活化培养用的一般是
SOC
培养基，这种培养基比
LB
培 养基营养，此时进行的活化培养
只是为了让
大肠杆菌
迅速复苏，
恢复分裂活性 ，
此时的细胞还不具抗性，
加入
抗生素
会细胞
会死亡。
< br>2
、什么是质粒？根据在细菌中的复制，质粒有几种类型？用于基因重组的主要用到哪些质
粒？

24
小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减 少造成的）
；