饮食营养分子生物学实验问答题答案中文名称

2021年2月2日发(作者：治疗近视)
.
中文名称：重组
DNA
技术。

英文名称：
recombinant DNA technique;recombinant DNA technology
定义
1
：用人工手段对
DNA
进行 改造和重新组合的技术。包括对
DNA
分子的精细切割、
部分序列的去除、新序列的加 入和连接、
DNA
分子扩增、转入细胞的复制繁殖、筛选、克
隆、鉴定和序列测定等等 ，是基因工程技术的核心。

重组
DNA
技术（
recombina ntDNAtechnique
）又称遗传工程，在体外重新组合脱氧核
糖核酸（
DN A
）分子，并使它们在适当的细胞中增殖的遗传操作。这种操作可把特定的基
因组合到载体上，
并使之在受体细胞中增殖和表达。
因此它不受亲缘关系限制，
为遗传育种
和分 子遗传学研究开辟了崭新的途径。

2.
列出分子生物学常用仪器的名称，用途。

答：

①恒 温气浴摇床：
常用于液体摇匀以培养微生物、
细菌和细胞等。
注意要依据不同的用途设
置不同的参数。

②超净工作台：
常用于为微生物学实验提供无菌操作环境。
注意操作时关掉紫外灯，
避免给
人类带来伤害。

③低温台式高速离 心机：
常用于分离纯化蛋白、病毒、细胞等。使用时不能随便移动离心机
或打开盖子；离心机运 行时要处于锁定状态；离心管的放置要处于平衡状态。

④微量移液管：
用于计量和转 移微量液体的专用仪器。
操作时注意避免枪头的污染；
调节刻
度时不宜超过最大量程； 使用完后将刻度调到最大收藏。

⑤电泳仪：
可对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组分分析或单个组分的
提取制备。
操作时不可把导线极性接反；
当电泳仪进入工作状态后，
避免人体与其各部分的
接触，
不同介质支持物的电泳不要 同时在同一电泳仪上进行；
若使用时出现异常，
要立刻切
断电源。

⑥
PCR
仪：用于扩增
DNA
片断。操作时应注意盖子要盖紧，按正确步骤进 行。

⑦高压高温灭菌锅：用于杀菌消毒。使用时应严格按照规程操作，避免发生安全事故。

3.
如何正确使用微量移液器。

一、标准操作

适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。

1)
按到第一档，垂直进入液面几毫米。

2)
缓慢松开控制按钮， 否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。

3)
打出液体时 贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿
1s
后，待剩余液体聚集后，再
按到第二 档将剩余液体全部压出。

二、黏稠或易挥发液体的移取

在移取黏稠或易挥 发的液体时，
很容易导致体积误差较大。
为了提高移液准确性，
建议采取
以下 方法：

1)
移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或 排出液体时最
好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体
(
如
1000~1)
，建议将吸头预湿后再移取。

2)
采用反相移液法：吸液时按到第二档，慢 慢松开控制按钮，打液时按到第二档，部分液
体残留在吸头内。

三、常见的错误操作

1)
吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确
(
应该垂直吸液，慢吸慢放
)
。

2)
装配吸头时，用力 过猛，导致吸头难以脱卸
(
无需用力过猛，选择与移液器匹配的吸头
)
。
3)
平放带有残余液体吸头的移液器
(
应将移液器挂在移液器架上)
。

4)
用大量程的移液器移取小体积样品
(
应该选 择合适量程范围的移液器
)
。

5)
直接按到第二档吸液
(
应该按照上述标准方法操作
)
。

6)
使用丙酮或强腐蚀性 的液体清洗移液器
(
应该参照正确清洗方法操作
)
。


1.
感受态细胞在生理上与普通细胞有何差异？

（
1
）细 胞表面暴露出一些可接受外来
DNA
的位点（以溶菌酶处理，可促使受体细胞的接
受位 点充分暴露）
。

（
2
）细胞膜通透性增加（用钙离子处理，可使膜 通透性增加，使
DNA
直接穿过质膜进入
细胞）
.
（
3< br>）受体细胞的修饰酶活性最高，而限制酶活性最低，使转入的
DNA
分子不易被切除或< br>破坏。

（
4
）受体细胞本身处于非生长繁殖阶段（即受体细胞染色体 相对稳定）
。

（
5
）不存在载体的筛选基因，多采用限制酶阴性、 修饰酶阳性的大肠杆菌作为受体细胞

2.
振荡是为了让氧气充分溶于液体，振荡利于大肠杆菌繁殖

3.
防止不受水气之类影响
,
保持培养基干燥，防止外物掉在培养基上

4.
（
1
）如何计算转换率，

转化后在含抗生素的平板上 长出的菌落即为转化子，
根据此皿中的菌落数
（
CFU
）
可计算出< br>转化子总数和转化频率，公式如下：

转化子总数＝菌落数
×
涂板前离心管中菌液体积／涂板时所用菌液体积

转化频率

＝转化子总数／质粒
DNA
加入量
(mg)


转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数

（
2
）影响感受态细胞转化效率的因素及实际操作过程中应注意的事项：


1
．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长 期的细
胞（一般通过检测
OD600
来控制。
DH5α
菌株

OD600
为

0.5
时细胞密度是

5
×

107/ml
）
；

2
．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；

3
．
经

CaCl2
处理的细胞，
在低温条件下，
一定的时间内转化率随时间的推移而增加，

24
小时达到最高，之后转化率 再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）
；

4
．化合物及无机离子的影响：在

Ca2+
的基础上联合其他二价金属离子（如

Mn2+
或

Co2+
）
、

DMSO
或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（

100-1000
倍）
；

5
．所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质 的存在可能大大降低细菌的转化
效率；

6
．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的

DNA
；

7
．一定范围内，转化效率与外源

DNA
的浓度呈正比；

（
3
）细胞生长状态和密度、质粒的质量和密度、 试剂的质量、防止杂菌和杂
DNA
的污染



5.
电转化的原理是？为何转换率高于氯化钙法？

原理：
电转化法 是利用瞬间高压在细胞上打孔，
因而需用冰冷的超纯水多次洗涤处于对数生
长前期的细胞，以使 细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为
109
～
1010
转
化子
/μg DNA
；
??????

1.
碱法提取质粒
DNA
中各溶液的作用是什么？及其注意事项？

答：各溶液的作用如下：

溶液Ⅰ：
葡萄糖增稠，
使悬浮后的大肠杆 菌不会快速沉积到管子的底部；
EDTA
抑制
DNase
的活性。这一步溶 液中还可以加入
RNase
，不受
EDTA
影响，并且可以在后续步骤中被除
去

溶液Ⅱ：

0.2M NaOH / 1% SDS
破细胞的主要是碱，而不是
SDS
，所以才叫碱法抽提。

溶液Ⅲ

：
3M
醋酸钾

/ 2M
醋酸

这一步的
K
置换了
SDS
（十二烷基磺酸钠 ）中的
Na
，得到
PDS
（十二烷基磺酸钾）沉淀；
SDS
易与蛋白质结合，
平均两个氨基酸上结合一个
SDS
分子，
钾钠离子置换所产 生的大量
沉淀自然就将绝大部分蛋白质也沉淀了，同时基因组
DNA
也被
PD S
共沉淀

。

注意事项

1
．收集菌体提质粒前，培养基要去除干净，同时保证菌体在悬浮液中充分悬浮。
< br>2
．在添加溶液Ⅱ与溶液Ⅲ后溶液的混合一定要柔和，采用上下颠倒的方法，千万不能在旋
转器上剧烈振荡。其中加入溶液Ⅱ后，溶液变成澄清，并有黏性；加入溶液Ⅲ后，出现絮状
沉淀。
3
．苯酚具有腐蚀性，能造成皮肤的严重烧伤及衣物损坏，使用时应注意。如不小心皮肤 上
碰到苯酚则应用碱性溶液、肥皂及大量的清水冲洗。

4
．苯酚可以用于抽 提纯化
DNA
，由于苯酚的氧化产物可以使核酸链发生断裂。所使用的