兰州白癜风专科医院实验报告-植物基因组的提取和检测

2021年2月2日发(作者：成都市妇幼)
四川大学实验报告



题目：
植物基因组
DNA
的提取与检测

一、实验目的

1.
了解真核生物基因组
DNA
提取的一般原理；

2.
掌握基因组
DNA
提取的方法和步骤。

二、实验原理

1.
在液氮中对植物组织进行研磨，破碎细胞；
< br>
等离子型表面活性剂能溶解膜蛋白而破坏细胞膜，使核蛋白解聚，从而使
DNA
游
离出来；

3.
苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性，并使抽提液分相， 因核酸水溶性很强，经离
心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质；

4.< br>上清液中加入异丙醇使
DNA
沉淀，沉淀
DNA
溶于
TE缓冲液中，即得植物基因组
DNA
溶；


的琼脂糖凝胶电泳鉴定 ：带电荷的物质，在电场中的趋向运动称为电泳。
DNA
的
琼脂糖凝胶电泳可以分离长 度为
200bp
至近
50kb
的
DNA
分子。
DN A
的迁移率（
U
）的对
数与凝胶浓度（
T
）之间存在反平行 线性关系。因此，要有效地分离不同大小的
DNA
片
段，选用适当的琼脂糖凝胶浓度是 非常重要的。

三、实验材料

1.
设备

移液器，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，
1.5ml
离心管

2.
材料

植物幼嫩叶片

3.
试剂

（
1
）细胞提取液：
100mmol/L
Tris-HCl,
pH8.0,
5mmol/L
EDTA,
500mmol/L
NaCl,
1.25%
SDS
，
1%
β
-
巯基乙醇（去除酚类）

（
2
）氯仿
:
异戊醇（
24:1
）

（
3
）其它试剂：液氮、无水乙醇、
TE
缓冲液、异丙醇、洗涤缓冲液

四、方法和步骤

1
、 取
500
μ
L
细胞提取液于
65
0
C
水浴 （金属浴）中加热备用；

2
、研钵用液氮预冷，新鲜植物叶片（自来水清洗，蒸馏水 冲洗干），去除叶脉，剪成
细条状，置于研钵中研磨成粉末状（越细越好）；

3、取
0.1g
粉末（大约两勺半）转移至
500
μ
L
预 热的细胞提取液中，迅速摇匀，
65
0
C
水浴（金属浴）中保温
30 min
，
10min
左右温和颠倒混匀一次；

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1
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四川大学实验报告


题目：
植物基因组
DNA
的提取与检测

4
、从水 浴（金属浴）中取出离心管，加等体积
(
约
500
μ
L)
氯 仿
/
异戊醇（
24:1
），室温
下
10000rpm
×
10min
；

5.
将上清液转移到另一
1.5mL< br>离心管中（使用的枪头用剪刀剪成大口），加等
2/3
体积
的异丙醇，轻轻混匀 ，静置
1min,
使核酸沉淀下来，
12000r/min
×
5min
，倒掉上清液；

6
、
加入
1ml
洗涤缓 冲液，
轻轻转动离心管使核酸沉淀悬浮起来，
静置
5min,12000r/min< br>×
2min,
去除上清液，再加入
1ml
洗涤缓冲液，轻轻转动离心 管使核酸沉淀悬浮起来，
放置
5min;
7
、
12000r/min
×
10min
后，倒去上清液，用小滤纸条将管壁上多余的水分吸掉，室温
静置干燥；

8
、干燥后，加入
20
μ
LTE
缓冲液，溶解
DN A
，做好标记；

9
、取
5
μ
L
溶液，< br>0.7%
琼脂糖凝胶电泳检测
DNA
大小和质量。
MarkerDNA
为
DL15000
。

五、注意事项

（一）提取
DNA
的过程：


的二级结构和双链易受多种因 素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、
酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，
即“ 变性”
，因此抽提时避免使用变性的条件；

2.
抑制内外源
Dna se
的活力。
Dnase
就像一把刀，它能把大分子的
DNA
切成碎 片，所以
要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：
a.
低温操作；
b .
调节
pH,
使偏碱
（
pH8.0);c.
抽提液中加表明 活性剂；
d.
加螯合剂（
EDTA
）除去酶的辅助因子（
Mg
2+
）
,
使酶活性丧失；

3.
防止物理因素降解。如温 度太高或机械张力剪切等，
DNA
分子特别大，极易被机械张
力拉断，甚至在细管中稍 急一些的流动也会使
DNA
断裂，所以在抽提过程中要特别注意
这一点，操作过程要尽 量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动；

4.
植物的次生代谢物
（ 主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）
对核酸提取有干扰作用。
因此，一般进可能选幼嫩的、 代谢旺盛的新生组织作为提取
DNA
的材料，这是因为幼嫩
的新生组织次生代谢物较少 ，
DNA
含量高，切易于破碎，植物材料最好是新鲜的。

（二）琼脂糖凝胶电泳检测基因组
DNA
：


为诱变剂、致癌物，接触凝胶必须戴手套操作；

2.
将溶液加入样品槽时，勿划破或戳破加样孔，勿带入气泡；

3.
紫外线对眼睛有害，将胶块置于紫外灯下观察时，带上防护镜或眼睛，或隔着玻璃或
有机玻璃观察。< br>
六、实验结果与分析

1.
植物基因组
DNA
提取结果：

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