芦笋片-吗啉胍
实验五
DNA
的
Feulgen
染色法
(一)实验目的
学习
DNA
的
Feulgen
染 色法,观察染色结果,了解反应原理。
(二)实验原理
DNA
经弱酸(
1mol/L HCl
)水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间
的键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与
Schiff
试剂( 无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合醌基,
醌基是一个发色基团,所以具有颜色。对照组预先 用热三氯醋酸或
DNA
酶处理,抽提去细胞中的
DNA
而得到阴性反应,从而 证明了
Feulegn
反应的专一性。
(三)实验用品
一、
材料
1.
Carnoy
液固定的蚕豆根尖切片。
二、试剂
1
. Carnoy
固定液:
3
份
95%
酒精加入一份冰醋酸。
2.1mol/L H Cl
:取比重
1.18
的浓
HCl82.5ml
,加水
10 0ml
。
2.
Schiff
试剂
3.
亚硫酸水溶液(漂白液)
10%
偏重偏亚硫酸钠水溶液
5ml
,蒸馏水
100 ml
,
1mol/L HCl 5ml
,
摇匀,塞紧瓶塞。此溶液在使用前配 制,否则会因
SO
2
逸出而失效。
5.
5%
三氯醋酸
6.
0.5%
固绿酒精溶液
(95%
酒精溶液
)
(四)实验方法
70%
酒精
(
2
~
3min
)
↓
对照组
蒸馏水
5%
三氯醋酸,
90
o
C
,
15min
实
↓
验
70%
酒精
(
2
~
3min
)
组
↓
1mol/L HCl
蒸馏水(过一下)
↓
1mol/L HCl
60
o
C,
8
~
15min(
水浴或温箱中
)
↓
Schiff
试剂(或者卡宝品红)
(
60
~
90min
)
↓
亚硫酸水
(
ⅠⅡⅢ
)
(
各
1min)
↓
流水冲洗
(
5
~
15min
)
↓
蒸馏水
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