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重庆曙光医院实验进展汇报

作者:陕西保健网
来源:http://www.xapfxb.com/yuer
更新日期:2021-02-02 18:12

注射隆鼻费用-孕妇能吃苦瓜吗

2021年2月2日发(作者:脂溢性皮炎脱发)
实验进展汇报


一.

实验名称:

军 牧
1
号白猪、杜洛克猪和小型猪核心群氟烷、
LPIN1

H-FA BP
基因的连锁分析

二.

军牧
1
号白猪、杜洛克和小型猪概况

军牧
1
号白 猪由中国人民解放军军需大学
(
现为吉林大学农学部
)1998
年利用杂交育 种原
理,
将比利时施格猪的臀部特别突出性状与三江白猪的繁殖性能好、
适应性强等优 良性状有
机结合,通过继代选育方式,横交固定,自群繁育
5
个世代培育成的。

杜洛克原产于原产于美国东部的新泽西州和纽约州等地,
主要亲本用纽约州的杜
洛 克和新泽西州的泽西红杂交育成,原称杜洛克泽西,后简称杜洛克。

小型猪,
又称< br>minipig

小型猪是生物医学研究中应用最为广泛的非啮齿类大型实
验动 物之一,具有其它实验动物不可替代的优越性,而且作为异种器官移植最可能的
供体成为研究热点。
三.

实验所选的主要基因

3.1
氟烷基因

1974
年,
Christian
报道了用氟烷 麻醉剂可以诱导猪
PSS

因此控制
PSS
的基因称为氟烷基

(Hal)
或兰尼受体基因
(RYR1)

Minkema (1976)

Marry (1981)

Smith(1977)
等提出,氟烷
敏感性状由一对基因
HalN

Haln
控制,N

n
表现为显性。
进一步研究表明,
发现
PSS是因兰
尼受体基因
(Ryanodine, Receptor gene
RYR1)
突变所致,即兰尼定受体
cDNA
中的
C1843-G
突变为
T1843-A
,使受体蛋白第
615
位精氨酸变为半胱氨酸,从而 导致结构和功能的改变。

3.2 LPIN1
基因

脂素基因(LPIN)
是新近发现的双向调控身体脂肪的一个基因家族,
其蛋白产物称为脂素
(lipin). Lpin1
的缺乏会阻止正常的脂肪发育,并显著的减少脂肪团块的出现。而当< br>Lpin1

骨骼肌或脂肪组织中过表达时,会加剧小鼠的肥胖。


LPIN1
基因位于
3q21-27
,其编码区为
2685 bp< br>,编码
894
个氨基酸。人、大鼠、小鼠和
猪这
4
个物种的< br>lipin1
间的两两蛋白质序列相似性为
88.18%~96.43%


LPIN1
基因上已鉴定发现了
17

SNP。其中有
5

SNP
位于内切酶的酶切位点上。

分别是:

位于外显子
2
上的
T60C
,该位点上的
T-C
转换造成了
Taq
I
限制性内切酶酶切位点

T*CGA
)的获得和丢失。与眼肌面积、板油率和肌内脂肪含量存在显著相关。


位于外显子
20
上的
T159A

T-A
碱基转换造成了
Eco
88I
限制性酶切位点(
C*YCGRG< br>)
的丢失和获得。与眼肌宽、眼肌面积、板油率和失水率存在显著相关。


位于外显子
20
上的
C243T

C-T
碱基颠换造成了
Bsh
1236I
限制性酶切位点(
CG*CG< br>)
的获得和丢失。与屠宰率、臀中肌中点背膘宽、
6

7
肋间 膘宽、眼肌高、眼肌宽和板油率存
在显著相关。


位于外显子
20
上的
C2040T

C-T
碱基颠换造成了
Taq
I
限制性酶切位点

T*CGA< br>)
的获
得和丢失。与眼肌高、眼肌面积和滴水损失存在显著相关。


位于外显子
20
上的
G1975A

G-A
碱 基颠换造成了
Pst
I

CTGCA*G

限制性酶切位点 的
获得和丢失。与眼肌高、眼肌宽、眼肌面积、腿臀肉骨率和滴水损失存在显著相关。


本实验将选择位于外显子
20
上的
T159A

Eco
88I
限制性酶切位点和
C243T

Bsh
1236I
限制性酶切位点的多态性进行研究。

3.3 H-FABP
基因

H-FABP
,又称
FABP 3
,是
FABP
家族中最普遍的一种类型,主要在对脂肪酸高度需求
的组织,
如心肌、
骨骼肌和乳腺中表达,
主要作用是协助细胞内脂肪酸转运到特定的细胞器或者细胞膜中,
保护细胞膜和酶,
调整某些酶类的底物浓度,
在心肌和脂肪细胞中 沉积甘油
三酯。
脂肪酸结合蛋白属小分子细胞内蛋白,
参与细胞内脂肪酸运输,
主要功能是将脂肪酸
从细胞膜运送至脂肪酸氧化和甘油三脂及磷脂的合成部位。


H-FABP
基因位于
6
号染色体,由
1.6 kb
的上游调控序列、
0.2 kb

3

-
端非 翻译区、
4

外显子
(
分别编码含
24

58

34

17
个氨基酸的多肽片段
)

3
个内含子
(4.2

2.3

1.5 kb)



。猪
H-FABP
基因存在
Msp
Ⅰ、
Hae
Ⅲ、
Hinf
Ⅰ酶
3
个酶切多态位点, 且
H-FABP
基因的纯
合基因型
aa/ dd/ HH

IMF
含量呈显著正相关,因此可作为
IMF
含量的侯选基因。

先 前马焕的实验证实,在军牧
1
号猪的群体中,未发现有
MspI
酶切位点的多 态性,故本
实验仅对
Hae
Ⅲ、
Hinf
Ⅰ酶切位点的多态性进行检 测。

3.4
酸肉基因

酸肉基因又叫
RN
基因
(Rendement
Napole
gene)
,是
Le
Roy
最先提出的
,
包括突 变的显性
基因
RN
和正常的隐性基因
rn,
位于
15
号染色体的
p2.1

2.2

,
周围有多个微卫星标 记。
RN

点是影响猪肉质加工性状
RTN(“Napole”techno logicalyield)
的主效位点。
RN
基因对肉质有显
著的影响
, RN
可使肌糖原含量升高
70 % ,
而使肌蛋白含量降低。
肌糖原含量较高
,
糖酵解后产
生的乳酸量较多
,
使肌肉的酸度增加。
pH
在下降后接近于肌肉中结构蛋白等电点
,
使肌丝之间
空隙缩小
,
引起较低的系水力和较浅的肉色。

先前马焕的实验证实,在军牧
1
号猪的群体中,酸肉基因全部为
rn
型,故本 实验将不对
酸肉基因进行多态性检测。

四.试验研究的主要内容和方法
< br>1.
选取军牧
1
号白猪、杜洛克和小型猪选种群体,并提取
DNA

2.
军牧
1
号白猪、杜洛克和小型猪氟烷,
LP IN1

H-FABP
基因的多态性分析;

3.
不同多态性基因型与胴体品质和肉品质相关性分析;

4.
不同多态性基因型的基因连锁分析;

5.
分析军牧
1
号白猪优良肉质性状与遗传因素间的统计学联系。


实验动物来源于吉林大学原种猪场。

在军牧
1
号白猪选 种群体和杜洛克、小型猪群体中各选取
50
头选取健康的、
28
日龄断
奶的仔猪,耳静脉采血后,在同一标准下饲养。

进行血液采样,提取血中总
DNA
后,
PCR
扩增氟烷基因、
LPIN1
基因、心脏脂肪酸结
合蛋白基因上特异性位点附近的
DNA
片段后利用酶切对扩增的多态性序列对进行多态性分析。

进行多态性分析后,将基因分型,每一种基因型选取
3
头,待仔猪 成年后,测定其胴
体性状。

将其与军牧
1
号白猪的生长和胴体性状进行相关连锁分析。并对得出的结果进行软件

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