济南美容整形DNA转化实验报告

2021年2月2日发(作者：玻尿酸丰唇多少钱一针)
DNA
转化

【摘要】
：本实验首先通过
CaCl
2
法将大肠杆菌
DH5a
制成感受态细胞，然后将带有氨苄青
霉素抗性基因的
pUC-19
质粒转化进该感受态细胞，
最后将转化后的细胞接种到含氨苄青霉
素的
LB
培养基上培养，没有被转化的菌不能生长，而被转化了的大肠杆菌可以正常生长，< br>形成蓝色菌落。

【关键词】
CaCl
2
法

感受态细胞
DNA
转化

质粒
pUC19 Vector
大肠杆菌
DH5a

DNA Transformation
Liu wang
（
School of Life Science,Lanzhou University
）

Abstract
:
In
this
experiment, we
firstly
made
E. coli
DH5a
into
competent cells
by
the
CaCl
2
method, and then the plasmid with the ampic
illin resistance gene of pUC-19 was transformed into
these
competent
cells,
finally
we
inoculated
the
transformed
cells
on
LB
solid
medium.
The
bacteria that have not been transformed can not grow, but the bacteria have been transformed can
grow into blue colonies.
Key words


CaCl2 method

DNA
transformation


plasmid pUC19 V
ector


DH5α


引言
：
DNA
转化是将外源
DNA< br>分子导入原核细胞的过程。
能够接受外源
DNA
的细胞称为感受
态细胞 ，
一般细菌很难接受外源
DNA
分子，
需用适当的方法处理将受体细菌制成感 受态细胞。
制备感受态细胞最常用的的方法有
CaCl
2
法、电击法、病毒法 等，本实验采用
CaCl
2
法制备
感受态细胞，从而完成
DNA的转化。

实验原理

本实验首先通过
CaCl2
法将 大肠杆菌
DH5a
制成感受态细胞，
然后将带有氨苄青霉素抗
性基因的
pUC-19
质粒转化进该感受态细胞，
pUC-19
质粒带有氨苄青霉素抗性基因 ，而宿
主菌
DH5
α
对氨苄青霉素没有抗性。在用
pUC-19质粒转化
DH5
α

后，涂布到含有氨苄青
霉素的培养基上培养 ，
没有被转化的菌不能生长，
而被转化了的菌可以正常生长，
形成蓝色
菌落。

实验试剂、器材和材料

1
试剂

LB
液体培养基
LB
固体培养基
200mg/mL IPTG
80mg/mL X-gal 50mg/mL
氨苄青霉素
0.1mol/L CaCl
2

2
器材

高压灭菌锅

恒温振荡培养箱

恒温培养箱

台式离心机

超净工作台

3
实验材料

大肠杆菌
DH5
α

质粒
pUC19 Vector
方法和步骤

1.
制作选择平板

按配方配好
LB
固体培养基，经高压灭 菌后，冷却至
50
℃，加入氨苄青霉素使其最终浓度
为
60
μ
g/mL
，倒两个平板。分别在两个平板的培养基的表面涂布
40
μ
l X-gal
贮备液
（
80mg/ml
）和
4
μ
l IPTG
贮备液（
200mg/ml
）
，室温下放置
3
～< br>4h
。

2.
制备感受态细胞