西安东大医院HBV-DNAPCR检测规程

2021年2月2日发(作者：怎么瘦咬肌)
可编辑


1
目的

规范
LightC ycler
荧光
PCR
检测仪检测乙型肝炎病毒（
HBV-DNA
） 的检验工作，指导检
验人员正确进行乙肝病毒核酸定量的检测，保证检验结果的质量。

2
范围

本规程适用于
LightCycler
荧光PCR
检测仪检测乙型肝炎病毒（
HBV-DNA
）

3
试剂

中山大学达安基因公司
乙肝病毒
(HBV)
核酸扩增荧光检测试剂盒

4
仪器

Roche LightCycler
荧光
PCR
检测仪

高速台式冷冻离心机

微量加样器（覆盖
1-1000
μ
l
）

5
样品处理

样品处理按《
PCR
实验室标本处理规程》进行收集和处 理，具体操作见本规程附录
1
和
附录
2
。

6
测定

6.1 PCR
扩增

6.1.1
打开稳压器电源，再打开计算机电源。

6.1.2
打开扩增仪电源，按仪器操作规程进入扩增循环条件设定。

6.1.3
将循环条件设定为：

程序

1

2

3


6.1.4
检查反应管是否盖紧，以免荧光物质泄漏污染仪器。

6.1.5
将待反应 的
PCR
反应管放入扩增仪中，
并根据实际情况和仪器操作规程在程序中定好
反应孔位置。

循环

1
次

40
次

1
次

温度

93
℃

93
℃

57
℃

40
℃

保持时间

2
分钟

5
秒

45
秒

0
秒

精品

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6.1.6
关闭扩增仪盖，按仪器操作规程开始循环。
精品

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6.1.7
扩增结束后关闭扩增仪电源，取出
PCR
反应管，密封放入垃圾桶。

6.2
产物分析

6.2.1
条件设置：反应结束后自动保存检 测数据文件，调整荧光数值为
F
1
/F
2
。点击
Quant ification
读取结果。

6.2.2
基线的确定：取
3
～
8
个循环的荧光信号。

6.2.3
噪声容限（阈值）
：调节在阴性质控品以上，要求在
Step3
：
Analysis
下相关性
r
值
＜
-0.97< br>，接近
-1.0
。

6.2.4
对照标准：保证阴性质控品 的
Ct
值不出现任何数值（默认为
40
）
。

6.2.5
最后记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（
M
）
，关闭计算机。

7

结果判断

7.1
如果
Ct
值＝
40
，则实验样品的
UU DNA
含 量（基因拷贝数
/ml
）＜
1
×
10
7.2
如果
Ct
值＜
40
，则实验样品的
UU DNA
含量（基因拷贝数
/ml
）＝
M

7.3
检测样本中核酸阳性时，按实际结果报告；对可疑结果应复查，需要时与临床联系。

8
注意事项

8.1
各标本沸水浴时间误差不超过
1
分钟。

8.2
加样时每加完一个要立即盖上封闭好离心管。

9
支持性文件

9.1
《乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测试剂盒操作说明书》

8.2
《临床基因扩增检验实验室工作规范》

10
质量记录

3
。

精品