卢湾区中心医院DNA提取中各种实验试剂作用原理

2021年2月2日发(作者：急性阑尾炎治疗)





D
N
A
提
取
中
各
种
实
验
试
剂
作
用
原
理

Company Document number
：
WTUT-WT88Y-W8BBGB- BWYTT-19998


DNA
提取中各种实验试剂作用原理

1
、
STE
是
Tris-Hcl
、
EDTA
、
Nacl
的混合液

。其总体作用是 为
DNA
提供保护
环境，在此环境下
DNA
可以呈稳定态，最少限度 地受到破坏。

提供缓冲体系，
DNA
在这一体系中呈稳定态。
< br>EDTA
：是
DNA
酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后
DNA
酶降解
DNA
。

NaCl
，有利于
DNA
的溶解。

2
、
SDS
的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂
SDS
（十二烷基磺酸钠，
Sodium
dodecyl sulfate
）使
DNA
与蛋白质分离，在高温（
55
～
65
℃）条件下裂解细
胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降 低温度
的方法使蛋白质及多糖杂质沉

淀，离心后除去沉淀，

3< br>、苯酚的作用：使蛋白质变性，同时抑制了
DNase
的降解作用。用苯酚处理匀
浆液时，由于蛋白与
DNA
联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯
酚 相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而
DNA
溶于水相。

使用酚的优点：
1.
有效变性蛋白质；
2.
抑制了
DNase
的降解作用。

缺点：
1.
能 溶解
10-15%
的水，从而溶解一部分
poly
（
A
）< br>RNA
。
2.
不能完全抑
制
RNase
的活性。

Tris
酚的颜色，一般为黄色。如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。

4
、氯仿的作用

克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）


5
、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张
力，从而减少 气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含
DNA
的
水相、中间的变性蛋 白相及下层有机溶剂相维持稳定。

6
、用乙醇沉淀
DNA
时，为什么加入单价的阳离子

用乙醇沉淀
DNA
时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如
NaCl
或
NaAc
，
Na+
中和
DNA
分子上的负电荷 ，减少
DNA
分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚
集沉淀。

7< br>．为什么在保存或抽提
DNA
过程中，一般采用
TE
缓冲液

在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑
DNA
的稳定性及缓冲液成分
不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统（
pKa
＝）和硼酸系统（
pKa=
）等 虽然也都符
合细胞内环境的生理范围
(pH)
，可作
DNA
的保存液 ，但在转化实验时，磷酸根
离子的种类及数量将与
Ca2
＋产生
Ca3(PO 4)2
沉淀，在
DNA
反应时，不同的酶
对辅助因子的种类及数量要求不同， 有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓
度，采用
Tris-HCl
（
pKa =
）的缓冲系统，由于缓冲液是
TrisH+/Tris
，不存在
金属离子的 干扰作用，故在提取或保存
DNA
时，大都采用
Tris- HCl
系统，而
TE
缓冲液中的
EDTA
更能稳定

。

8
、
STE
是
Tris-Hcl
、
EDTA
、
Nacl
的混合液

。其总体作用是 为
DNA
提供保护
环境，在此环境下
DNA
可以呈稳定态，最少限度 地受到破坏。

提供缓冲体系，
DNA
在这一体系中呈稳定态。
< br>EDTA
：是
DNA
酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后
DNA
酶降解
DNA
。

NaCl
，有利于
DNA
的溶解。