什么事阳痿法医实验室几种常用DNA提取方法及比较

2021年2月2日发(作者：植物神经紊乱的治疗)


法医实验室几种常用
DNA
提取方法及比较

(
一
)Chelex100
法

原理：
Chele x100
是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二
乙酸盐离子， 起着螯合基团作用，对多价金属离子有极强亲和力。在低离子强度、碱性及
100
℃煮沸条件下 ，可以使细胞膜裂解，并使与
DNA
结合的蛋白质变性，
DNA
游离。检材基
质中一般含有大量金属离子，
在低离子强度及加热条件下，
金属离子可以辅助脱氧核糖 核酸
酶降解
DNA
，
也可以抑制
PCR
反应，
所以 在提取
DNA
时，
加入
Chelex100
，
螯合了金属离 子，
防止了
DNA
降解，提高了
PCR
扩增成功率。


方法：
剪取适量血斑、
精斑、
汗斑、
鼻涕斑、
指 甲、
毛根、
软组织等等生物检材，
置于
0.5ml
离心管内，加入适 量纯水，室温浸泡，
13,000rpm
离心
5min
，上清丢弃，管底留约
20
μ
l
左
右液体及检材基质，
加入
100-20 0
μ
l 5%Chelex100(
有时需加适量
PK)56
℃15min
至数
10
小时
不等，
100
℃
8m in
，
13,000rpm
离心
5mim
，上清备用。

评述：

Chelex100
法已经成为
DNA
提取的基本 方法，
Chelex100
法是万能的。目前，我们一切纯化
方法都在
Che lex100
法的基础上进行，
Chelex100
法又不是万能的。


Chelex100
法提取前的检材清洗非常重要，因为现场检材往往均较脏，脏东 西可以抑制
PCR
反应，所以往往不止清洗一次，清洗检材时可能损失部分
DNA。所以应平衡清洗抑制剂与
损失
DNA
之间的关系。特别强调清洗时应“把根留住 ”
，很多情况下已知样本
DNA
检验失
败的原因是把根没有留住。
D NA
检验时还有另外一句名言：
“一个萝卜一个坑”
，防止混乱
检材。肝素抑 制
PCR
反应，血红素抑制
PCR
反应，所以长时的浸泡、多次清洗往往可能 洗
除肝素及血红素。
在已知样本多次无检验结果疑为肝素抗凝的情况下，
多洗是检验成 功所必
须的。血红素对普通
Taq
酶的抑制作用是明显的，而目前
mtDNA
扩增一般用普通
Taq
酶，
所以同一样品除进行
STR
检验 外尚需进行
mtDNA
检测时，尽量去除干净血红素，显得尤为
重要。现场提取毛发或 样本毛发，用毛根进行
STR
检验时，纯水清洗也非常重要，如果没有
清洗干净，毛根
DNA
本身很少，很易检出为混合型。因为现场毛发及样本毛发很易粘附另
一人成份。 毛根清洗的特点为振荡洗涤，不离心，多换水。

清洗后检材中加入
5%Chelex100
量视检材而定。

检材参考加入量

0.5
×
0.5cm
血斑







150ul-200ul





二步法精斑











100ul
毛根

















10ul
烟头

















30-50ul
对于组织，难溶检材，有疑问检材，均可加入终浓度为
100ug/ ml
左右
PK
，有时间隔一段时
间，补加适量
PK
，
PK(
蛋白水解酶
K)
作用最佳
pH
为
8.0
。

5
、加入
Chelex100
后，
56
℃浸泡时 间，血斑≥
15min;
组织≥
30min
，二步法精斑≥
1h。

6
、
PCR
扩增前应离心。
PCR
扩增时 不应吸入
Chelex100
，因为
Chelex100
为
PCR< br>抑制剂。

7
、
Chelex100
使用浓度
5%< br>，有些人用
10%
，
有些人用
20%
，
各人爱好。配 制好
5%Chelex100
pH
应在
10
—
11
之间，否则应丢弃，不应人为调整
Chelex100
悬液
pH
值。

(
二
)
有机法

原理：
有机法提取
D NA
一般是指用平衡酚
(
又叫饱和酚
)
、
氯仿等按不同比例 混合，
采用不同
方法提取
DNA
。
DNA
易溶于水，不溶于 有机溶剂，蛋白质分子表面带有亲水性基因，很容
易进行水合作用，
并在表面形成一层水化层，
使蛋白质分子能够顺利地进入到水溶液中，
形