麻疹的主要传播途径PCR检测时对实验室DNA污染的清除

2021年2月2日发(作者：上海岳阳医院)
30 60 120 30 60 120 30 60 120
1
：1 ×103 ×103 ×103 ×107 ×107 ×107 ×107 ×107 ×106

1
：10 ×102 ×102 ×102 ×106 ×106 ×106 ×106 ×106 ×105

1
：100 ×10 ×10 ×10 ×105 ×105 ×105 ×105 ×104 ×104

1
：1000 0 ×104 ×104 ×104 ×104 ×103 ×103

1
：10000 0 0 0 ×103 ×103 ×103 ×102 ×102

×10

1
：100000 0 0 0 ×10 ×10 ×10 ×10 ×10

3
讨论

PCR
测定出现假阳性结果通常是由外源性
DN A
污染所致，病人标本中的病毒颗粒、阳性对照
均是造成实验室严重污染的主要因素。
紫外线可以降解
DNA
或使
DNA
发生突变、
失活和破坏
D NA
结构、阻断
DNA
的复制。所以经紫外线照射后
DNA
难以扩增 。紫外线照射方便易行，消
毒面广，
对室内仪器设备影响较小。
因此被广泛应用于各实 验室消毒。
但是紫外线消毒效果
受灯管的辐射强度、照射时间、微生物的种类、有机物的含量、 温度和湿度的影响
[1,4]
。

为了解紫外线消毒状况和有效范围，
选择正确的消毒方法和时间，
以减少实验室
PCR
检测外
源性
DN A
污染，我们将
HBV
－
DNA
阳性标本进行了相关试验。结果显示 ，
HBV
－
DNA
阳性血清
标本和
HBV
阳性参控 品经低温干燥后，用紫外线照射
2
小时，
HBV
－
DNA
高 拷贝数的血清标
本下降比例高于低拷贝数的血清标本，
同样拷贝数的
HBV
阳 性参控品显著高于血清标本；
各
种标本随着稀释倍数的增加，经紫外线照射后
HBV< br>－
DNA
的下降比例明显增加，说明标本中
有机物如蛋白质等含量的高低直接影 响到紫外线的照射效果。
HBV
－
DNA
阳性血清标本和
HBV阳性参控品在液相状态，
经紫外线照射
2
小时后
HBV
－
DNA
下降比例不明显。
这一结果表明，
紫外线对
HBV
－
DNA
阳性的液态标本照射无实际价值。

以上实验结果表明，
紫外线对阳 性血清标本造成的实验室污染不能清除；
阳性模板经紫外线
消照射后可以降低其含量，
对清除物体表面较低含量阳性
DNA
模板或
DNA
引起的气溶胶可能
有效。
因此，在进行
PCR
实验室操作时，
必须严格按
PCR
实验操作规程试验，在操作中应尽
量减少各种标本外溢和溅出，
以免引起实验室污染，
每次实验完毕需认真清洗实验操作台和
实验室环境。
在进行下一次实验前，
实验环境 应用紫外线照射
2
小时以上。
一旦造成实验室
DNA
污染，将直接／ 或可能是不可逆转地影响今后的实验室试验结果。


参考文献

1
刘怀田，李荣芬。紫外线表面消毒应用研究的进展。中国消毒学杂志，
1994
；11
（
1
）：
37-38
2
王占科，祝仲珍。紫外 线照射消除
PCR
技术外源性
DNA
污染。人民军医，
1997；
5
：
286
－
297
3
宋维汉，苏学今 ，张新秀，等。三种物理方法对乙型肝炎病毒消毒效果的观察。白求恩医
科大学学报，
1998
；
1
：
105
－
107
4
居喜娟，< br>薛广波，
卞雪莲，
等。
紫外线空气消毒器除菌效果的研究。
中国消毒学 杂志
,1994
；
11
（
4
）：
233-236


防止
PCR
外源性
HBV- DNA
污染的实验研究


摘要

目的

选择一种消除实验室
DNA
污染的最佳消毒方法。方法

用压力蒸汽 消毒、紫外线消毒、
84
消毒
液、过氧乙酸消毒液、次氯酸钠溶液和
2
％戊二醛消毒液，按常规方法对高浓度（5×107copies/ml ）与
低浓度（5×103copies/ml ）
HBV
－
DNA
阳 性血清标本和
HBV
阳性参控品进行消毒处理，然后用
PCR
检测技
术检测
HBV
－
DNA
浓度的变化。结果
HBV
－
DNA
阳性血清标本经
84
消毒液消毒后不能检出
HBV
－
DNA
；过氧
乙酸、
次氯酸钠和戊二醛消毒液及紫外线照射消毒法消毒后
H BV
－
DNA
含量减少；
压力蒸汽消毒法对血清标
本中的
H BV
－
DNA
无作用。结论
84
消毒液能完全清除阳性血清标本中的
HBV-DNA
；高压蒸汽、过氧乙酸、次氯酸钠和
2
％戊二醛及紫外线照射消毒法不能完全清除阳性血清标本中的
HBV
－
DNA
。

要害词：乙型肝炎病毒；消毒；方法；聚合酶链反应

中图分类号：

文献标识码：

文章编号：


The Study on the Prevention of External HBV-DNA Contamination
LIU Jun-quan, CHENG Fu-xing, ZHOU Zhong-hai, ZHANG Yu-xi
(
Department
of
Central
Laboratory,
97
th
hospital
of
PLA,
Xuzhou
221004,
Jiangsu
Province,
China)

Abstract: OBJECTIVE To select an optima antisepis to avoid DNA contamination during polymerase
chain reaction experiments. METHODS Hepatitis virus B(HBV)DNA from serum samples and control
samples
were
antisepsised
by
six
methods,
including
pressche
steam;
ultraviolet
radiation,84-disinfector, peroxide acetic acid, hypochlirite mareium and 2% glutara ldehyde
disinfector.
RESULTS
HBV-
DNA
couldn’t
be
detected
after
being
dealed
with
84
-disinfector,
while
pressure
steam
antisipsis
had
no
effects
on
decreasing
DNA
contamination.
Other
four
methods
had
lower efficiency. CONCLUSIONS 84-disinfector is able to clear all the HBV-DNA of positive serum
samples, while other five methods are not able to.
Key words: Hepatitis B virus; disinfect; methods; Polymerase chain reaction

检测乙肝病毒
（
HBV-DNA
）
在 我国常被用来间接评价消毒剂杀病毒的效果。
用聚合酶链反应
（
PCR
）检测
HBV-DNA
具有操作简便、灵敏度高和特异性强等优点。但也常因微量污染而产生 假阳性结果。近年来，人们采用了
许多方法消毒处理不同的污染环境和污染物
[1-4]
，
但消毒效果报导不一。
为选择一种消除实验室
DNA
污染
的最佳 消毒方法，我们选用六种传统的消毒法进行对比研究。现将结果报告如下。

1
材料和方法


材料