肝功能和乙肝五项-男人的小弟弟
DNA
指纹的遗传分析
【实验原理】
“DNA
指纹”
是指可以利用
DNA
差异来进行与传统指纹分析相似的身< br>份识别。
DNA
指纹是以
DNA
的多态性为基础，而卫星
DN A
的发现则是其
最重要的奠基石。卫星
DNA
是由一短序列（即重复单位或核 心序列）多次
重复而成，因此也有人称其为可变数目串联重复序列（
variable
numbers
of
tandem
reprat
，
V NTR
）
,
在人类基因组中存在多种由不同重复单位组成的卫
星
DN A
，
重复单位的碱基序列在不同个体中具有高度的保守性，
而卫星
DNA的多态性则来源于重复单位的重复次数不同，
并形成了众多的等位基因。
列
如，人 类
1
号染色体上的
VNTR
D1S80
，核心序列由
16
个核苷酸组成，拷
贝数在
14
～
41
个之间，已知
29
种不同的等位基因。
1984
年Jefferys
等人首次将分离的人源小卫星
DNA
用作基因探针，
同 人
类核
DNA
的酶切片段杂交，
产生了由
10
多条带组成的 杂交图谱，
不同个体
杂交图谱上带的位置就像指纹一样因人而异，
因而
Jef ferys
等人称之为
DNA
指纹图谱。
产生
DNA
指纹图 谱的过程叫做
DNA
指纹分析，
目前包括
PCR
、
RFLP
（
限制性内切酶酶切片段长度多态性）
和
RAPD
（随机扩增多态性
DNA
）
等方法。
DNA
指纹图谱的基本特点：
（
1
）多位点性：基因组中某些位点的小卫星重复单位含有相同或相似
的核心 序列。
在一定的杂交条件下，
一个小卫星探针可以同时与十几个甚至
几十个小卫星位点 上的等位基因杂交。
（
2
）
高变异性：
DNA
指 纹图谱反应的是多个位点上的等位基因的特征，
具有很高的变异性。发现两个无血缘关系个体具有相同< br>DNA
指纹图谱的概
率仅为
5
×
10-19
，因此， 除了同卵双胞胎，几乎不可能有两个人的
DNA
指
纹图谱完全相同。
（
3
）稳定的遗传性：
DNA
指纹图谱中的谱带能够稳定遗传，杂合带遵< br>守孟德尔遗传规律。子代
DNA
指纹图谱中产生与双亲都不同的新带的概率
（基 因突变）仅在
0.001
～
0.004
之间。
DNA
指纹图 谱还具有体细胞稳定性，
即用同一个体的不同组织如血液、
肌肉、
毛发、
精液 等的
DNA
作出的
DNA
指纹图谱是一致的。
由于
DNA
指纹图谱具有这些显著的特征，他已经成为最具吸引力的遗
传标记。
Jeff reys
是第一个意识到
DNA
指纹可以建立个人身份识别系统的人，
并且首 先将其用于亲子鉴定，移民审查和凶杀侦破。
1989
年该技术获美国
国会批准作为正 式法庭物证手段。
此外，
它还被用于医生诊断及寻找与疾病
连锁的遗传标记，
探明动物种群的起源及进化过程，
在作物的基因定位及育
种上也有非常广泛的应用。
1
【实验材料、仪器及试剂】
1.
人类口腔细胞。
2
．仪器：微量移液器，小型离心机，恒温水浴锅，漩涡振 荡器，
PCR
仪，电泳仪，电泳槽，透射式紫外分析仪（或凝胶成像仪）
。枪头，1.5mL
，
0.2 mL
离心管，棉签，使用前均需
121
℃高温灭菌
3
．< br>试剂：
NaCl
，
琼脂糖，
溴化乙锭，
Na2-EDTA，
SDS
，
Tris
，
Proteinase
K，冰醋酸，溴酚蓝，二甲苯腈蓝，蔗糖，甘油，
DNA
相对分子质量标记，
Che lex 100
树脂（
Bio-Rad
）
，
PCR pre- mix(TaKaRa)
。
4
．溶液配制：
（
1
）
5%
Chelex
树脂：
Chelex
100(Bio-Rad)
0.5g
、
50mmol/L
Tris-HCl
10mL
、
用
4mol/L NaOH
调
pH
至< br>11
，
室温可保存
3
个月，
使用前充分混匀。
（
2
）
2.0
％琼脂糖凝胶：称
2.0g
琼脂糖放入< br>250ml
三角烧瓶，加入
1
×
TAE
溶液
100mL
微波炉加热溶解，
冷却至
60
℃左右加入
1
μ
g/mL
溴化乙锭
（
EB
）
，缓慢混匀后倒胶板。
（
3
）
溴化乙锭
（
EB
）
：
用无 菌水配制
5mg/mL
储藏液，
工作浓度
1
μ
g/mL。
注意；溴化乙锭为诱变剂，有致癌作用。配制、稀释和染色时必须戴手
套。
（
4
）
0.5mol/L EDTA(pH8.0)
：
Na2-EDTA 18.61g
、
NaOH 2g
，蒸馏水定容
至
100mL
，室温保存。
（
5
）
10
×
TAE
电泳缓冲液：
Tris
48.4g
、冰醋酸
11.42mL
、
0.5mol/L
EDTA(pH8.0) 20mL
，蒸馏水定容至
1000mL
，室温保存。
（
6
）
10
×上样缓冲液
（
Loading dye
）
：
溴酚蓝
0.25g
、
二甲苯腈蓝
0.25g
、
蔗糖
50.00g
（或甘油
50m L
）
，用
60mL
无菌水（用甘油
50mL
时，
4 9mL
）
溶解上述试剂，再定至
100mL,
室温保存即可。
（
7
）
10%SDS
：
SDS 10g
用无菌水溶 解后（可加热）
，定容至
100mL
，室
温保存。
（8
）蛋白酶
K
溶液：
20mg/mL
蛋白酶
K
水溶液
5mL
、
10%SDS 1mL
、
无菌水
94mL
，冰箱冷藏。
（
9
）无菌水：蒸馏水或去离子水，高温灭菌。
（
10
）
1mol/L Tris- HCl(pH8.0)
：将
12.1g Tris
溶解在
80mL
蒸馏水中，
加盐酸调节
pH至
8.0
，加蒸馏水定容至
100mL
。
5
．引物
Primer1
：
5
’
-GA AACTGGCCTCCAAACACTGCCCGCCG-3
’
Primer2< br>：
5
’
-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3
’
【实验操作】
2
肝功能和乙肝五项-男人的小弟弟
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