艾滋病是怎么得的溶血素与补体激活实验报告

2021年1月30日发(作者：血管炎怎么治)
实验报告

实验名称

院




系

姓




名



溶血素与补体激活

专




业


学




号

实验日期

班




级




一、实验目的

1
，熟记溶血素制备的基本流程

2
．认识免疫方法对抗体产生的影响

3
．分析补体激活及生物学功能的影响因素

4
．评价补体溶血实验的拓展与应用


二、实验器材

器材

无菌注射器、无菌玻璃瓶、手术剪、镊子、止血带、酒精棉球、无菌棉签、天平 、试管、试
管架、锥形瓶、胶头滴管、废液缸、离心机、兔台、手术剪、眼科剪、注射器、烧杯、电动< br>移液枪、水浴锅、记号笔、冰箱、镊子、平皿、
200
目细胞滤网、研磨棒、酒精灯、恒 温培
养箱


试剂

碘酒、灭菌生理盐水、甘油、
Hank’s
液


三、实验原理

1.
溶血素
(Hemolysin)
：以绵 羊红细胞（
SRBC
）作为抗原免疫实验动物所获得的抗体（抗
-
SRBC< br>）
，被称为溶血素。

2.
补体
(Complement)< br>：补体系统包括
30
余种成分，存在于人或脊椎动物血清、组织液和细
胞膜表面 。是一组经活化之后才具有酶活性的糖蛋白。

3.
补体经典激活途径
大白兔产生的抗体与绵羊红细胞上抗原表位结合，抗体结构改变，暴露补体结合部位，与
C1qrs
结合，
C1q
构象改变，使
C1r
与
C1s
裂解< br>C4
和
C2
，大片段
C4b
和
C2a
结合成
C3
转
化酶，
小片段进入液相。
C3
转化酶裂解
C 3
，
再与大片段
C3b
结合形成
C5
转化酶
（C4b2a3b
）
。

C5
转化酶裂解
C5
，
C5b
与
C6
、
C7
结合于绵羊红细胞膜上，再与
C8
结合，再与
12
-
16
个
C9
结合形成
MAC
（攻膜复合物）
。红细胞膜上形成孔道，致死量钙离子内流，绵羊红细胞
裂解 。


4.
补体结合反应实验原理

补体结合反应是一种 有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应。
参与本反应的五种成分可分为两个 系统：

一为待检系统，即为已知抗原（或抗体）和待检抗体（或抗原）
；

另一个为指示系统，
即绵羊红细胞和其相应的溶血素。待检抗原、
抗体和补体作用后，
再加
入指示系统。
若待检系统中的抗原和抗体相对应，
两者特异性结合后激活 补体，
补体被消耗。
再加入的指示系统无补体结合，
不出现溶血；
若待检系统 中的抗原与抗体不对应或缺少一方，
补体不被激活，当指示系统加入后，绵羊红细胞和溶血素复合物激活 补体，产生溶血现象。

5.
空斑形成实验

是一种体外检测IgM
、
IgG
类型抗体产生细胞的实验方法，又称空斑形成细胞（
PF C)
测定。
可作为评估药物影响抗体产生水平以及临床筛选抗肿瘤新药的重要依据。

经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合后，
抗体形成细胞产生的抗体与绵羊红细胞结合；在补体参与下，绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。一个空斑即
代表一个 抗体形成细胞。


四、实验过程及步骤


一、
SRBC
的制备

（一）
无菌抽取绵羊血

1.
手术剪减去绵羊颈部毛发备皮，止血带扎住颈部，碘酒消毒，酒精棉球再擦拭。

2.
抽取一定量的绵羊血，
注入无菌玻璃瓶，
轻轻摇晃获得抗凝绵羊血，摇晃时不能用力过猛，
防止
SRBC
破裂。

（二）
绵羊红细胞的制备

1.
在无菌实验室中，用移液枪吸取5ml
抗凝绵羊血于试管中，共
4
支试管。

2.
配平 后对称放入离心机中
2000rpm
离心
10
分钟。

3.4
支试管，胶头滴管吸去上清液，加入适量的灭菌生理盐水后轻轻摇晃混匀。
< br>4.
再次配平后，
2000rpm
离心
10
分钟，
2
-
3
次。

5.
吸去上清液，获得绵羊红细胞。

（三）
绵羊红细胞悬液制备

1.20%
绵羊红细胞悬液制备

在无菌实验室中，用移液枪吸取
2 ml
绵羊红细胞于锥形瓶中，用移液管再加入
8ml
灭菌生
理盐水，混合均匀 。

2.2%
绵羊红细胞悬液制备

在无菌实验室中，用移液枪吸取
1ml
绵羊红细胞于锥形瓶中，量筒量取
49ml
无菌生理盐水
加入 锥形瓶，混合均匀。


二、溶血素的制备

（一）
免疫接种程序


（二）
免疫途径

在大白兔背部三个点酒精消毒后，皮下接种绵羊全血。

（三）
试血

1.
动物免疫
18
天后缘静脉采血
2
毫升，离心取血清。< br>
2.
清稀释成不同倍数补体溶血实验。


（四）
心脏取血

胸骨左缘第
3
、
4
肋间 心脏跳动最明显处。手术剪去毛，消毒后注射器取
20ml
血。

（五）
补体灭活与溶血素保存

1.
将心脏血分别注入
2< br>支离心管中，各
10ml
。

2.
配平，
2000r pm
离心
10
分钟，保留上清液，即血清。

3.
将血清置 于
56
℃恒温水浴锅
30
分钟，
电动移液枪加入等体积甘油，
记号笔标明：
溶血素、
日期、效价（
1
：
6400
）。置于
-
20
℃冰箱保存。


三、补体溶血实验