蜜桑白皮微生物安全国家标准

2021年1月30日发(作者：白内障怎么治)
食品微生物学检验

菌落总数测定

1
范围

本标准规定了食品中菌落总数（
Aerobic plate count
）的测定方法。

本标准适用于食品中菌落总数的测定。

2
术语和定义

2.1
菌落总数
:
食品检样经 过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每
g
（
mL
）检样中形成的微生物菌落总数。

3
设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

3.1
恒温培养箱：
36
℃±1 ℃，
30
℃±1 ℃。

3.7
无菌吸管：
1 mL
（具
0.01 mL
刻度）、
10 mL
3.2
冰箱：
2
℃～
5
℃。

3.3
恒温水浴箱：
46
℃±1 ℃。

3.4
天平：感量为
0.1 g
。

3.5
均质器。

3.6
振荡器。

（具
0.1 mL
刻度）或微量移液器及吸头。

3.8
无菌锥形瓶：容量
250 mL
、
500 mL
。

3.9
无菌培养皿：直径
90 mm
。

3.10 pH
计或
pH
比色管或精密
pH
试纸。

3.11
放大镜或
/
和菌落计数器。

4
培养基和试剂

4.1
平板计数琼脂培养基：见附录
A
中
A.1
。
4.2
磷酸盐缓冲液：见附录
A
中
A.2
。

4.3
无菌生理盐水：见附录
A
中
A.3
。

5
检验程序

检

样

25 g(mL)
样品
+225 mL
稀释液，均质→

10
倍系列稀释→

选择
2
个～
3
个适宜稀释度的样品匀液，各取
1 mL
分别加入无菌培养皿内→

每皿中加入
15 mL
～
20 mL
平板计数琼脂培养基，混匀→

培

养→

计数各平板菌落数→

计算菌落总数→

报

告

6
操作步骤

6.1
样品的稀释

6.1.1
固体和半固体样品：称取
25
g
样品置盛有
225
mL
磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，
8000
r/min
～
10000 r/min
均质
1 min
～
2 min
，或放入盛有
225 mL
稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍
打
1 min
～
2 min
，制成
1:10
的样品匀液。

6.1.2
液体样品：以无菌吸管吸取
25 mL
样品置盛有
225 mL
磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶
内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成
1:10
的样品匀液。

6.1.3
用
1 mL
无菌吸管或微量移液器吸取
1:10
样品匀液
1 mL
，沿管壁缓慢注于盛有
9 mL
稀释液的无菌
试管中
（注意吸 管或吸头尖端不要触及稀释液面）
，
振摇试管或换用
1
支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，
制成
1:100
的样品匀液。

6.1.4
按
6.1.3
操作程序，制备
10
倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用
1
次
1 mL
无菌吸管或吸
头。

6.1.5
根据对样品污染状况的估计，选择
2
个～
3
个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在
进行
10
倍递增稀释时，吸取
1 mL
样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取
1 mL
空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

6.1.6
及时将
15 mL
～
20 mL
冷却至
46
℃的平板计数琼脂培养基（可放置于
46
℃±1 ℃恒温水浴箱中保
温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

6.2
培养

6.2.1
待琼脂凝固后，将平板翻转，
36
℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品
30
℃±1 ℃培养72 h±3 h。

6.2.2
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝 固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂
培养基（约
4 mL
），凝固后翻转平板，按
6.2.1
条件进行培养。

6.3
菌落计数

可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落 数量。菌落计数以菌落形成单
位（
colony-forming units
，
CFU
）表示。

6.3.1
选取菌落数在
30 CFU
～
300 CFU
之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于
30 CFU
的平板
记录具体菌落数，大于
300 CFU
的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

6.3.2
其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的
菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以
2< br>，代
表一个平板菌落数

6.3.3
当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

7
结果与报告

7.1
菌落总数的计算方法

7.1.1
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值
乘以相应稀释倍数，作为每
g
（
mL
）样品中菌落总数结果。

7.1.2
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（
1
）计算：

N=
Σ
C
∕
(n1+0.1n2)d
?????????? ???（
1
）

式中：

N
——样品中菌落数；< br>Σ
C
——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1
——第一稀释度（低稀
释倍数）平板个数；
n2
——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d
——稀释因子（第一稀释度）。

示例：

稀释度

菌落数（
CFU
）

1:100
（第一稀释度）

232
，
244
1:1000
（第二稀释度）


33
，
35

N=
Σ
C
∕
(n1+0.1n2)d=
(232+
244
+33+
35)
∕
[2
+(0.1
*2)]*
0.01=24727
上述数据按
7.2.2
数字修 约后，表示为
25000
或2.5×10
4
。

7.1.3
若所有稀释度的平板上菌落数均大于
300 CFU
，则对稀释度最高的平板进行计数 ，其他平板可记录
为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

7.1.4
若所有稀释度的平板菌落数均小于
30 CFU
，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.1.5
若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于
1
乘以最低稀释倍数计算。

7.1.6
若所有稀释度的平板菌落数均不在
30 CFU
～
300 CFU
之间，其中一部分小于
30 CFU
或大于
300CFU
时，则以最接近
30 CFU
或
300 CFU
的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

7.2
菌落总数的报告

7.2.1
菌落数小于
100 CFU
时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

7.2.2
菌落数大于或等于
100 CFU
时，第
3
位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前
2
位数字，后面用
0
代替位数；也可用
10
的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

7.2.3
若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

7.2.4
若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

7.2.5
称重取样以
CFU/g
为单位报告，体积取样以
CFU/mL
为单位报告。

食品微生物学检验

大肠菌群计数

1
范围

本标准规定了食品中大肠菌群（
Coliforms
）计数的方法。

本标准适用于食品中大肠菌群的计数。

2
术语和定义