伊维兰注射隆鼻价格风疹病毒

2021年1月28日发(作者：冠心病怎么治疗)


`
赛润
ELISA
classic

风疹病毒
IgG/IgM

目录


1.
用途


2.
诊断意义


3.
赛润
ELISA
classic-
检测原理


4.
试剂盒组成


5.
检测所需物质，试剂盒未提供


6.
储存和稳定性


7.
赛润
ELISA
classic
的检验步骤


7.1
注意事项

7.2
样品准备和储存

7.3
试剂盒反应试剂的准备工作

7.4
检测程序概要

7.5
检测过程

8.
检测结果评估

8.1 4PL
单点定量法

8.2
检验有效性标准

8.3
计算赛润
ELISA
classic
风疹病毒
IgG/IgM
（定量）

8.4
检测结果分析

9.
性能特性

9.1
重复性

9.2
敏感性和特异性

10.
风疹病毒
IgG
抗体的亲和力评估

11.
警告

11.1
警告和安全措施

11.2
废料处理

12.
参考文献
































V9.
03/07-1


赛润
ELISA
classic

风疹病毒
IgG/IgM
酶联免疫测定法体外诊断人体抗体（
IgG/IgM
）

-
只限用于体外诊断
-

IgG
试剂盒
（定量）

编号
ESR129G
IgM
试剂盒
（定量）

编号
ESR129M

检测评估标准
: Dade Behring BEP ? III / BEP ? 2000, DSX,
手动操作


1.
用途


赛润
ELISA
classic

风疹病毒
IgG/IgM
用于定性和
/
或定量检测人体内血清、< br>脑
脊液或血浆中抗风疹病毒的抗体
。
检测抗风疹病毒
IgG
和
IgM
对于风疹病毒的
血清学研究具有特殊的价值，如判断机体免疫状态及初次感染< br>。


2.
诊断
依据


风疹病毒
是一种人类病原体，属于
RNA
病毒的披膜病毒科
，可通过飞沫和直 接
接触等方式传播，潜伏期一般
为
10-21
天。

大约
50%
的感染
病例初期伴有弥散性斑疹，随后这些微小的斑疹可能融合
。
出生
后
感染通常并无大碍，
有
25-30%
的患者尽管
出现
心肌炎，神经炎，耳炎，支气
管炎，脑炎等并发症，
也属于
亚临 床
感染
。风疹病毒感染的临床诊断
都
应有血清
学证据的支持，
因为皮疹和关节炎这些临床症状也可以由其它病毒引起
。（见
1.
，
2.< br>）


妊娠期风疹感染
可能
导致胎儿受到严重损伤及多系统疾 病。因此，妊娠期风疹的
诊断就尤显重要。







当其他的检验系统（如血细胞凝集抑制实验）的结果为弱阳性或
可疑，不能由此
判断免疫
状态
的时候，免疫球蛋白
G-
酶联免疫吸附 试验（
IgG- Elisa
）在确认检
验结果和判断免疫
状态
方面就非常重要了。

通常来讲，
IgM-Elisa (
免疫球蛋白
M-
酶联免疫吸附 试验
)
的阳性结果是初次感染
的指标。
患者感染后，抗风疹病毒的
I gM
抗体通常存在
1-2
个月，但也可能在可
检测水平上维持一年
。
由于风疹再次感染也可能产生
IgM
（免疫球蛋白
M
）抗
体
，在这种情况下，对
所有
IgM
检测结果阳性的
患者
取双份血进行检测是至关
重要的，而且我们也应清醒的认识到，
没有任何一个血清检测的特异 性和敏感性
是
100%
（见
2.,3.
）。

< br>鉴于
风疹感染
对胎儿带来的严重
后果
，抗风疹
IgM
检测
为阳性的怀孕患者，应
该
用另一种反应原理的酶联免疫吸附试验对
IgM
再次进行检测
。
此
外，也应进
行其他的确认
检测
， 如
IgA(
免疫球蛋白
A)
抗体试验，免疫印迹或亲和力试验。
（见
2.
）。


多数情况下，妊娠期的初
次
感染不会 导致胎儿子宫内感染。因此，为
评价
可能引
起胎儿损伤的风险（
5.
），应
该
进行产前诊断（
4.
）。


3.
赛润
ELISA
classic
-
检验原理


用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其 所含的抗体特异
性地与固相载体中存在的抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入碱
性磷酸酶标记的
IgG
、
IgA
和
IgM
抗体，使之与上述 免疫复合物反应。洗板，除
去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。
其与酶结合的免疫 复合物反
应，产生有颜色产物
，颜色强度与特异性抗体含量成正比。

















4.
试剂盒的组成


试验成分

微孔条（此微孔条可
拆下
单独使用，每条有
8< br>孔，共
96
孔，已经包被了抗原）

1
个微孔条框架

包被的抗原为灭活抗原

标准血清（立即可用）

人血清溶于含蛋白 的磷酸盐缓冲液；抗
HIV
抗体、抗乙肝
病毒（
HBV
）表面抗原和 抗丙肝病毒（
HCV
）抗体均为阴
性；

防腐剂：
< 0.1%
叠氮化钠

染色剂：紫红色
O
阴性质控血清（立即可用）

人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；抗
HIV< br>抗体、抗乙肝
病毒（
HBV
）表面抗原和抗丙肝病毒（
HCV
）抗体均为阴
性；

防腐剂：
< 0.1%
叠氮化钠

染色剂：里沙明绿
V
酶标记的抗人
IgG, IgA, IgM
（立即可用）

羊抗人
IgG, IgA, IgM
（多克隆），
标记碱性磷酸酶后在蛋
白稳定剂中储存
。

防腐剂：
0.01%
甲基异噻唑啉酮

0.01%
溴化硝基二垩烷

浓缩洗液（可稀释至
1000
毫升）

氯化钠
溶液
，含吐温
20
和
30mM Tris
防腐剂：
< 0.1%
叠氮化钠

稀释缓冲液

磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温
20
防腐剂：
< 0.1%
叠氮化钠

0.01
克
/
升的溴酚蓝钠盐

终止液

IgG
试剂盒
IgM
试剂盒

数量
/
剂量

12 12
2
×
2
毫升
2
×
2
毫升

1
×
2
毫升
1
×
2
毫升

13
毫升
13
毫升

1
×
33.3
毫升
1
×
33.3
毫升

2
×
50
毫升
2
×
50
毫升

15
毫升
15
毫升





1.2N
氢氧化钠

底物（立即可用）

对
硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液

防腐剂：
< 0.1%
的叠氮化钠

(
未开封瓶子中的底
物可能会轻微变黄，但不会影响其质
量
)
带有标准曲线和评估表的
质量控制文件

（抗体以
IU/
毫升或
U/
毫升计量）



13
毫升
13
毫升

1 1

5.
检测所需物质，试剂盒未提供


-
普通实验室所配的仪器装置

- IgM
检测：
另需赛润含 对照抗原的
类风湿因子
Rf
—吸附剂
(Rf
－吸附剂
/< br>对照
抗原
(
产品编号
T200/20ml))
-
分光光度计，波长
405
纳米，建议参考波长范围
620
纳米
- 690
纳米（例如

650
纳米）

- 37
℃温箱

-
湿盒

-
蒸馏水。


6.
储存及稳定性


试剂

储存

稳定性

微孔条

开封后放在
2-8
℃装有干燥剂的密封
4
星期

（包被抗原）

铝箔袋中。

质控血清
/
标准血清

开封后保存于
2-8
℃。

有效期内；

24
个月

酶标记抗体

立即可用的溶液于
2-8
℃储存。

有效期内；

避免污染（使用无菌
枪尖
）。

24
个月

稀释缓冲液

开启后于
2-8
℃储存。

18
个月



有絮状
沉淀
时丢掉



有效期内；

未开封

36
个月





洗涤液

底物

终止液

浓缩液开封后保存于
2-8
℃。

工作液在
2-8
℃。

工作液在室温下。


盛过工作液的瓶子应按常规方法清
洗，并丢弃混浊溶液。

2-8
℃储存，避光。

避免污染（使用无菌
枪尖
）。当溶 液
变为黄色时应予以丢弃（水作空白，
吸光度大于
0.25
时）。

开封后保存于室温。

有效期内

2
星期

1
星期

有效期内

24
个月

有效期内



7.
赛润
ELISA
classic
的检验步骤


7.1
注意事项


只有全部使用赛润
ELISA

classic
试剂才 能保证检测效果，因为所有试剂都是有
关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清 以及酶标记
物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止
液和 底物溶液可用于所有赛润
ELISA
classic
试剂盒。


ELISA
classic
试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。应在未开封的情况 下，保存
于
2-8
℃，并在有效期（见标签说明）内使用。详细的稳定性和储存资料在
“6.
储
存及稳定性
”
内将加以详述。

每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果未经规定被稀释
或改动都会导致检测 的敏感
性
的降低。


在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中 。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发
和污染，
避免
试剂受到微生物污染，因为蛋白水解酶 的干扰将导致出现错误的结
果。





请从标记处剪开密封袋。
如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子
封紧的，则 不要继续使用微孔条。


开始试验前，将所有试剂置于室温。


从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结
果，吸加酶结合物 时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶
盖或管盖。


试验结果的可重复性依赖于充分混
匀
试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所
有稀释 过的溶液（例如使用混合器）。


小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本
/
对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长，将
会导致不同的

“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。


只有严格遵守赛润
ELISA
classic
试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。


如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无
效。


洗涤不充分将影响试验结果：



应该小心进行洗涤。 洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径
7
毫米，深
10.9
毫米）指导 手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结
束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲 打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。
避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。


7.2
检验前的准备工作和储存


避免使用高血脂、溶 血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。
明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检 测。






样品不应加热灭活。


7.2.1
样品准备


赛润
ELISA
classic
风疹病毒
IgG

开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（
V1+V2
）：


V1+V2=1+100
加
10
微升

患者待测样品



于
1000
微升

稀释缓冲液


稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混
匀
。



赛润
ELISA
classic
风疹病毒
IgM

类风湿因子抗体是
自身
IgM
型的抗体，可与
IgG
免疫复 合物结合
。非特异性风
湿因子抗体的存在将导致
IgM
检测的假阳性结果。另 外，也存在弱结合的病原
体特异性
IgM
抗体被强结合的
IgG
抗体 取代的可能性。
在这种情况下，
IgM
的
检测将得到假阴性的结果。因此，在 进行
IgM
检测前应用类风湿因子吸附剂对
血清作预处理。

特别类风湿因子
Rf
—吸附剂
（产品编号
T200,20ml
） 不仅包含抗人
IgG
抗体，还
含有一定量的对照抗原，
对照抗原同时能与类风 湿因子及可识别宿主细胞膜成份
的抗体结合。因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。


在进行以下
SERION ELISA
classic
I gM
检测时，此类
RF
—吸附剂需作为附加试
剂另行购买
:

巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒






首先应该使用稀释缓冲液
(V2)对类风湿因子吸附剂
(Rf
-
吸附剂
/
对照抗原
)(V 1)
进
行如下稀释：


V1+V2=1+4
加
200
微升
Rf
-
吸附剂
/
对照抗原




于
800
微升

稀释缓冲液中



然后将患者的待测样品
(V1)
在此
Rf
-
稀释缓冲液
(V3)
中进行稀释：


V1+V3=1+100
加
10
微升

患者待测样品



于
1000
微升
Rf
-
稀释缓冲液中


7.2.2
样品储存


密封的患者样品可在冰箱中
2-8
℃保存
7
天。≤
-20
℃可保存更久。


避免样品反复冻融。


已稀释的样品可在
2-8
℃保存一星期。

7.3
试剂和反应试剂的准备工作


7.3.1
微孔条
< br>微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔条取下
并重新放入铝袋。 将袋口折叠
2-3
次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。


7.3.2
对照血清
/
标准血清

对照和标准血清立即可用，不必进一步稀释。试验时，可直接使用。


对于 每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括阴性阳
性对照孔。临界值血清应作双 份测定。如果是定量试验，标准血清也应作双份。


不要用
RF
吸附剂处理对照血清！






7.3.3
抗人
IgG, IgA
或
IgM
抗体稀释液，用
AP
标记（即用）

禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。同一试剂盒才能具最佳检测效果。


7.3.4
洗液


以
1
：
30稀释浓缩洗涤缓冲液（
V1
）至终体积
V2
。


例如：


浓缩缓冲（
V1
）

33.3
毫升

1.0
毫升


7.3.5
样品的稀释缓冲液（即用）


7.3.6

底物（即用）

试验时戴手套以避免污染。必须以无菌
枪尖
吸取底物溶液。

7.3.7
终止液（即用）

7.4
检测程序概要


定量的风疹病毒
IgG / IgM
进行
IgM
检测时先用类风湿因子吸附剂预处理血清，

请参见
7.2.1
；



室温孵育
15
分钟或
4
℃过夜



样品稀释液（病人血清）

1+100
?


将稀释的样本，和立即可用的对照血清
/
标准血清，加到微量孔内（
100
微升）

?

孵育
60
分钟
/ 37
℃

湿盒中

终体积（
V2
）

1000
毫升

30
毫升





?

洗涤

?

加入
立即可用
的酶标记抗体溶液（
100
微升）

?


再孵育
30
分钟
/ 37
℃

湿盒中

?

洗涤

?

加入底物溶液（
100
微升）

?

再孵育
30
分钟
/ 37
℃

湿盒中

?

加入终止液（
100
微升）


?


在
405
纳米处读数




7.5
检测过程


7.5.1

将检测所需数目的
微孔条放到微孔板框上
并准备好一张草签。


7.5.2

在微量孔内分别加入
100
微升的已稀释样本
或立即可用的
对照血清。留
一个孔为底物空白使用，例如：


定量的
IgG / IgM
微量孔

孔
A1
底物空白

孔
B1
阴性对照

孔
C1
标准血清

孔
D1
标准血清

孔
E1
标本
1
……






7.5.3

将样品于湿盒内
37
℃（±
-1℃）孵育
60
分钟（±
5
分钟）。


7.5.4

孵育后以洗液缓冲液
洗涤
板孔（使用自动洗板机或手工洗板）：


-
吸去或甩去洗液

-
每孔内加入
300
微升洗液

-
吸去或甩去洗液

-
重复洗涤过程
3
次（共
4
次！）

-
将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体


7.5.5

加入酶标记抗体。

于适当孔内（底物空白除外）加入
100
微升
IgG / IgM / IgA
酶标记抗体


7.5.6

湿盒内
37
℃（±
1
℃）孵育
30
分钟（±
1
分钟）
?
。


7.5.7

孵育后，以洗液
清洗
板孔（洗涤见上）


7.5.8

加入底物

于每孔内加入
100
微升底物溶液（包括底物空白孔）


7.5.9

湿盒内
37
℃（±
1
℃）孵 育
30
分钟（±
1
分钟）
?
。

7.5.10

终止反应

每孔内加入
100
微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。


7.5.11

读取消光度

以底物空白为空白对照液，
60
分钟内读取
405
纳米的
OD
值，建议参考
波长范围为
620
纳米
-690
纳米（例如
650
纳米）。


8.

检测结果评估

赛润
ELISA
classic
风疹病毒
IgG
/
IgM
（定量）

8.1 4PL
单点定量法


?

注意：在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。








通过利用非线性方程，可以保证根据 消光信号的定量数值精确计算出抗体活性
，
该方程可在不对
OD
值作任何改动 的情况下调整
S
型曲线。


赛润
ELISA
classic
抗体浓度的确定是通过
逻辑对数模型（
4PL, 4
参数）
计算得
出的，此模型可精确适用于相关曲线。

它是基于以下公式：


OD
?
?

?
D
-
A

1
?
e
?
(C
-
ln
conc.)

参数
A,B,C,D
分别代表曲线的准确形状：


1.
下端渐近线

→

参数
A
2.
曲线斜率

→

参数
B
3.
转折点

→

参数
C
4.
上端渐近线

→

参数
D

标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司 （维尔茨堡市）在严格条件下经过多次
试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作 标准曲线。


每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如 有需要也
可取得相关的评估软件。


为了校正正常试验偏差和建立试验对照 ，每轮试验均需使用标准血清作为对照。
该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的， 在此范围内可保
证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照，且在某些
ELISA< br>试验
中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。

8.2
有效性标准


-
底物空白的
OD
值必须
<

0.25

-
阴性对照值必须为阴性（请参见试剂盒内所附定量表）


-
赛润
ELISA
classic
试验：标准血清 的平均
OD
值必须在有效范围内，此范围
在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减 去底物空白之后！）






-
赛润
ELISA
classic
试验：阳性对照的平均
OD值必须在有效范围内，此范围
在试剂盒的特异性质量控制认证书上给定（减去底物空白之后！）

如果未
达到
以上标准，试验无效且必须重做。



8.3
赛润
ELISA
classic
风疹病毒
IgG / IgM
的定量计算


IgG
抗体活性
以
IU/ml
计算，以世界卫生组织风疹 病毒参考血清为标准。该血清
浓度为
1000IU/ml
。

IgM
抗体活性以
U/ml
计算，以风疹病毒
IgM
参考血清（ 莱比锡
,
德国）为标准。
该血清浓度为
30 U/ml
。


8.3.1
非自动评估


每个试剂盒内均备有一个标准 曲线和一个评估表，因而每一个
OD
值就可得到一
个抗体活性值。标准血清的参考值和 有效范围会在求值表格（质量控制认证）中
给定。

所有的
OD
值在
评估
前必须先减去空白
A1
。


方法
1
：
定性评估


为确定临界值范围，请将已 测得标准血清的
OD
平均值与质量控制证书上给出的
数据相乘
（见专用公式） ，例如：

OD=0.502
×
MW (STD)
临界值上限

OD=0.352
×
MW (STD)
临界值下限

如果得到的标准血清的平均消光度值是
0.64,
那么
临界值
的范围即为
0.225-
0.321
。


方法
2
：
用评估表格来确定抗体活性。


1.
计算标准血清两个
OD
值的平均值，并检查其是否在给定的有效范围内。

2.
然后，将所得结果转入“标准血清
OD
范围”栏，在此进行求值。