无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理

2021年1月25日发(作者：汪东兴)
无菌检查和微生物限度检查阳性菌种的管理


一、实验室要求：

1.

实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室内严禁吸烟和饮食。

2.

实验人员必须穿戴工作衣帽，工作服经常洗涤、消毒、保持清洁。

3.

操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。

4.

发生菌液污染台面或地面，
应立即用
3%
甲醛或5%
碳酸等消毒液由外向内
倾覆其上，
1
小时后再擦拭，如为破伤风梭菌 ，则应隔夜后再擦洗。

5.

工作衣、
帽、
口罩受到菌液 污染时，
应立即脱下使污染部位包裹在内部，
高压灭菌后再清洗。

6.

如有传染性培养物污染手部，应先用
75%
乙醇棉球擦拭，再 浸入
01
新洁
尔灭消毒液内泡手，然后再用肥皂及清水彻底洗干净。

7.

接种环
(
针
)
，每次使用前后，必须通过火 焰灭菌，冷却后方可接种培养
物，接种带有蜡质、油质的培养物或菌苔残留多时，不应立即在火焰上灼烧 ，应
先在内焰里将油质培养物烘干后再移至火焰上灭菌，
以免活菌外溅污染环境及感
染 操作者。

8.

带菌的吸管应浸泡在
5%
甲酚消毒液内
24h
后取出清洗，
带菌的试管或培
养物应在
121
℃高压 灭菌后再取出清洗。

9.

在接种霉菌、放线菌时应在铺有浸过消毒液的纱布上操作，防止孢子散
落传播。

10.

凡带活菌的物品，必须消毒后才能清洗，严禁污染下水道。

二、无菌操作要求
:

无菌操作是指在无菌的环境条件下，使用无菌 器材，防止微生物污染的操作
技术。
即保持待检样品在操作时不被污染，
又要防止被检 的微生物及阳性对照菌
在操作中污染环境或感染操作人员。
从事无菌及微生物操作的工作人员必 须经过
无菌技术及基础微生物学专业知识的学习及培训才具备上岗操作的资格，
微生物
专业检验人员也不应该频繁地变换工作岗位。

1.

无菌室应每次使用前 后用
0.1%
新洁尔灭消毒液或
2%
甲醛液擦拭工作台
面及可能污染 的死角，湿拖地面，打开无菌空气过滤器及超净工作台的开关
30
分钟，紫外线杀菌灯照射1
小时。

2.

操作人员用肥皂洗手后进入缓冲间换拖鞋，用
75%
乙醇棉球擦手，穿戴
工作衣帽、口罩。将所需物品剥去牛皮纸及外包装，从传递 窗移入操作间，再用
01
新洁尔灭泡手后进入操作间，在乙醇
(
或煤气灯)
火焰区
(
火焰高度
3-5cm)
操
作。

3.

供试品表面消毒，如为安瓿先用砂轮划痕后用
2%
碘酒棉球擦 拭，再用
7
5%
乙醇棉球擦拭、待干，也可以用消毒液浸泡消毒。

4.

操作者勿用嘴直接吸吹吸管，防止致病菌感染操作人员及口中的杂菌污
染供试品。

5.

在无菌操作中切勿大幅度或快速动作、
拖行，
以免搅动空气中尘埃微粒。

6.

注射器如需回抽时，应对着火焰吸入无菌空气。

7.

所用的器材如培养基、稀释剂配制后经湿热灭菌
121
℃20
分钟，吸管培
养皿等均应洗涤，干燥，包扎后经干热灭菌
160
℃< br>2
小时才能使用。

三、仪器设备

实验室所用的各种仪器 ，如培养箱、电热恒温水浴瓶、电热恒温干燥箱等，
均应严格按照仪器说明书操作，均应按计量要求定期 检测，并做好检测与维修记
录，以保证其正常使用。无菌操作净化工作台要定期检测洁净度，应达到百级 。
净化工作台的高效过滤器应根据使用情况

四、培养基的管理


培养基是人工配制的适合细菌生长繁殖的生物营养物质，培养基的管理在无
菌及微生物限度检查 工作中起着重要的作用。

1.
培养基购入后应记录名称、产地、批号，培养基配制 记录应包括
:
名称、配
制量、配制者、配制日期。

2.
干燥培养基的配制应先量入蒸馏水至容器中，再称取培养基干粉放入水中，
摇匀，静置
15分钟使其溶解，一般不要加热，避免某些营养成分被破坏。

3.
培养基配制后 应立即灭菌，以防长菌使营养成分损耗，高压灭菌时应防止
温度过高、时间过长，使营养成分破坏致使实 验结果出现假阴性。灭菌时间
:
稀释
剂
121
℃灭菌
20< br>分钟，含糖培养基
115
℃灭菌
20
分钟。

4.
配制好的培养基应保存在凉暗处
(2-10
℃
)
或置
4℃冰箱内保存，
一月左右使
用。保存时间需视培养基中水分蒸发程度及有无污染而定，用硅 胶塞，封入塑料
袋，内可延长保存时间。培养基切勿反复加热使用。

5
培 养基的质量控制，应选用优质的蛋白胨，牛肉膏等营养成分，化学纯以上
的化学试剂，调配成最适的pH
值。配制后应按规定做无菌试验，如无菌检查用的
培养基，需气菌、厌气菌培养基置< br>30-35
℃培养
48
小时，真菌培养基置
20-25
℃培养
72
小时，
应无菌生长。
除此以外，
还需做培养基性能的质 量控制，
性能试验
:
即不同的培养基接种不同的已知标准菌株，培养
24小时后，观察细菌生长情况，
如无菌检查培养基需做培养基灵敏度试验，细菌生长良好，说明培养基 性能可靠。
五、实验菌种的保藏与管理


国内药品微生物检验所用 的菌种菌号是
CMCCB
、
CMCCF
，
B(Bacteria)< br>代表细菌，
FFungi
代表真菌。由中国药品生物制品检定所提供。

1.
菌种保藏基本要求

菌种的保藏是微生物学基础工作中的一项 重要内容，用人工方法低温、干燥、
缺氧、缺营养等方法控制微生物的代谢，使细胞基本上处于休眠状态 ，繁殖受到
抑制仍保持菌种原有的各种生物学特性，以达到保种的目的。菌种保藏的关键是
不变 异、不污染、不死亡。

菌种保藏分四个阶段
:
① 挑选特征典型的纯 菌菌落，其方法是用接种环挑取少许菌苔，接种至
2ml
营养肉汤或
09
氯化 钠溶液中制成菌液，
再取一环菌液在营养琼脂平板上分区划线，
培养后可见单个菌落生长。
② 凡能产生孢子或芽胞的微生物都用孢子和芽孢进行保种
VUnEI oKM
孢子和芽胞的代谢作用较弱，但对恶劣环境有很强的抵抗。

③ 在传代前，将菌液管 放入
80
℃水浴中作用
30
分钟，杀死杂菌繁殖体后用
芽孢传代。< br>