人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法

2021年1月25日发(作者：贝尔纳)
人类乳头瘤病毒（
HPV
）的检测方法


全网发布：
2011-06-23
21:23
发表者：陈继明
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摘要
：人类乳头瘤病毒（
HPV）与宫颈癌的发生和发展关系密切，
HPV
的检测已是宫颈癌早
期筛查的一个重要 方面。
HPV
的检测和分型对于了解宫颈癌病情变化、指导治疗、判断预
后以及疫苗改 进均具有十分重要的价值。本文将就
HPV
的检测方法的进展作一小结。

关键词
：人乳头瘤病毒（
HPV
），宫颈癌，检测，疫苗

Abstract:

Human
papilloma
virus
(HPV)
is
strongly
correlated
with
the
pathogenesis
and
development
of
cervical
cancer,
the
testing
of
HPV
has
been
an
important
aspect
of
early

screening
of
cervical
cancer.
The
testing
and
classification
of
HPV
is
invaluable
for
ackn
owledging
the
advance
of
the
disease,
treatment,
prognosis
and
the
improvement
of
HPV
vaccine.
A
summarization
will
be
made
in
this
article
concerning
with
the
advance
of
the

testing
methods
of
HPV.

Key
words:
human
papilloma
virus
(HPV),
cervical
cancer,
testing
methods,
vaccine



宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，
占女性生殖器官恶性肿瘤的半数以上，
严重威胁着妇
女的健康。全世界每年大约有
4
万人患病，中国新发病例约计
13
万，占目前已发现的所有
女性肿瘤的
6%
，是仅次于乳腺癌而引起妇女癌症相关死亡的重要原因。宫颈癌的发病机理
目前尚不清楚 ，但已有很多研究证明，
99%
的宫颈癌组织中可检出人乳头瘤病毒
(human
pa
pilloma
virus,
HPV)
[1-2]
。目前，已经明确
HPV
感染为宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的
必要条件
[3-4]
。大量研究资料表明，
HPV
与宫颈癌及癌前病变密切相关，高危型
HPV(HRHP
V)
感染与宫颈癌关系最为密切
[5]
。
随着病 变程度的加重，
HPV
的检出率也逐渐增高
[6]
。
所以，
许多专家提出将
HPV
的检测作为宫颈癌的一种筛查手段。目前，针对
HPVDNA< br>检测作为
宫颈癌原始筛查方法以及与细胞学联合在筛查中的意义的研究报道较多
[7-1 0]
。本文将就
HP
V
检测方法的相关内容进行小结，重点介绍目前应用最为 广泛的
PCR
法和杂交捕获试验。

由于
HPV
至今尚不能 在体外培养，又无合适的实验动物，因而对其检测主要依赖于形态学
方法和分子生物学技术。目前
HPV
检测方法主要有细胞学法，斑点印迹法，荧光原位杂交
法，
Southern
杂交法，多聚合酶链反应
(PCR)
法和杂交捕获法等。细胞学法敏感度和特异度较低；
斑点印迹法具有放射性。
目前较为公认的敏感度和特异度高的方法是捕获二代法；< br>其
它敏感度较高的方法有原位杂交，
PCR
法。但
PCR
法特 异度很低，假阳性率较高；而核酶
印迹原位杂交法复杂，不宜大规模临床使用。

1.

细胞形态学检测

宫颈

HPV
阳性细胞的特 征性改变是出现了特异性挖空细胞。
初期在表层出现，
当不典型增
生达
2/3
以上时，挖空细胞减少，此时表现为低分化鳞癌的形态特点。感染

HPV16
，
18
的
宫颈上皮阳性为中层挖空细胞核出现了密集浓染的蓝紫色颗粒产物，从慢性宫颈炎→

CIN
→
CaC
ｘ，
HPV
杂交信号渐强，由上皮表层到棘层，分布呈散在→簇状→弥漫状。

2.

免疫组织化学法



用
SP
法染色测

HPV16
，
18
早期蛋
E6
单抗能有效证明感染组织中存在的
E6
蛋白，阳
性标志为核内出现棕黄色颗粒。
研究表明抗
HPV16E6
单抗可直接定位于宫颈癌组织，
对宫
颈癌有较好定向选择性，有可能作为人宫颈癌放射免疫显 影诊断的载体。

3.

基因扩增技术

3.1
HPV
DNA
的
PCR
扩增

评价
H PV
检测方法最关键的因素是检测灵敏度，以基因扩增
为基础检测
HPV
D NA
，
是目前最灵敏的检测方法，
可检测出低水平的病毒感染，
并且能够比较准确地对
HPV
感染状态进行分类，
因此成为实验室和流行病学研究的理想工 具。
但是，
由于基因扩增过程中污染造成的假阳性及技术成本高，目前不宜作为临床实验室HPV
感染
的常规检测。

3.2
荧光定量
PCR
(FQ-PCR)
技术


FQ- PCR
是
1995
年由美国
Perkin
Flmer
公司 研制成功
的一种新型核酸定量检测方法，
该法将普通
PCR
的高灵敏性、DNA
杂交的高特异性和光谱
技术的高精确性有机结合，克服了传统
PCR
在许多方面的缺点和局限性。由于荧光探针的
引入，而且被释放的荧光基团数目与
PCR产物数量相同，使得该方法对
DNA
模板定量的
准确性与特异性都有很大提高。< br>常用的
PCR
扩增仪与传统
PC
R
扩增仪相比，
应 用更广泛、
定量测量、
检测效率明显提高、
扩增产物无需电泳分析、
无管道内 污染及结果重复性好等特
点。由于
HPV-16
型特异引物可与
HPV66< br>型模板
DNA
发生错配，传统
PCR
法扩增时，常
对两者的扩 增产物不易区分而造成
HPV
16
假阳性结果，但应用
FQ- PCR
技术，
HPV
66
型
DNA
不能扩增，从而增强了
HPV
分型检测的特异性。此外，
FQ-PCR
技术检测
HPV感染
的敏感性较传统
PCR
法增高，
当
HPV16,
18,
31,
33,
35
亚型含量平均为
1
拷贝基因组
/300
个细胞时，即可用此法检测到。

4.

杂交俘获试验

4.1
第一代杂交俘获试验
(hybrid
capture
test-
Ⅰ，
HC-
Ⅰ
)
为克服基因扩增技术的不足，
几
年前美国
Digene
公司开发出一种新的< br>HPV
DNA
检测技术
——
第一代杂交俘获试验
(hybrid
capture
test-
Ⅰ，
HC-
Ⅰ
)
。其 原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。
HC
-
Ⅰ不需要基因扩增， 利用两套单链全长
RNA
混合探针，可以检测
5
种低危型
HPV(6 ,
11,
42,
43,
44)
及
9
种高危型
HPV(16,
18,
31,
33,
35,
45,
51,
52,
56
)
。
理论上检测灵敏度是

50
000
个
HPV
DNA
拷贝。经过临床试验评价，
HC-
Ⅰ检测灵敏度低于
PCR
及其他基因扩
增技术，但其特异度和阳性预测值却高 于
PCR
。

4.2
第二代杂交俘获试验
(hybrid
capture
test-
Ⅱ，
HC-
Ⅱ
)


最近
Digene
公司推出的杂交捕
获二代试验
(
HC-II
)
更敏感，由原先的试管法改为
96
孔平板法，提高了 工作效率，降低了
成本，更适于大人群的筛查。该法同时能检测
13
种高危型
HPV
(HPV16,
18,
31,
33,
35,
39,
45,
51,
52,
56,
58, 59
和
68
型
)
，已得到世界范围的认可。
Petry
等
[8]

对德国
8466
例患
者经
HC -
Ⅱ检测，发现
HC-
Ⅱ检测宫颈上皮内瘤变
(cervical
intraepithelial
neoplasia
，
CIN)
Ⅱ级的敏感性远较常规细胞学高，前者是
97.8%
，而后者是
43.5%
，而且
HC
Ⅱ检测
CIN
Ⅱ的特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为95.3%
、
10.9%
和
100%
，与细胞学检测基本吻合。
HC-
Ⅱ检测方法的缺点是不能测定具体的
HPV
型别。此外，< br>HC-
Ⅱ作为杂交反应，存
在交叉杂交的问题，即与不在混合探针中的其他
HP V
型起交叉反应引起假阳性结果而降低
特异性
[11]
。