地中海贫血的诊断方法

2021年1月23日发(作者：徐喈凤)





地
中
海
贫
血
的
诊
断
方
法

Document number
：
BGCG-0857-BTDO-0089-2022



地中海贫血的诊断方法

B-
地中海贫血的筛查和诊断主要依赖实验室检查，方法主要有：

1
血常规检测



地中海贫血的重要特征之一是小细胞低色素性贫血，如
MCV
≤
80
fl
，
MCH
≤
25
．
0 Pg
，则可疑为地中海贫血患者或基因携带者

，可同时
测定血清铁和铁蛋白，以排除缺铁性贫血。

2
红细胞渗透脆性试验
(
一管法
)


其原 理是地中海贫血红细胞膜表面粗糙、凹陷、折叠和浆膜扩展，
膜与内容物之比增大，对渗透溶解的抗性增 加，在
0
．
32
％
(
或
0
．
36
％
)NaC1
中溶解度降低
(
脆性降低
)
。一管法 可用于地中海贫血群体
筛查。

3
血红蛋白
(Hb)
电泳
Hb
电泳

是检测地中海贫 血、异常血红蛋白最常用的方法，可观察到
HbE
、
HbH
等异常血红蛋白区 带，同时可定量检测
HbF
、
HbA2
的含量并区分常见
类型的地中 海贫血。有研究显示
MCV
、
Hb
电泳和红细胞脆性实验三者联合
检 测的灵敏度可达
100
％

，阴性预告值达
100
％

，联合特异度可达
100
％

，阳性预告值达
100
％
DS
。

4
高效液相色谱技术
(HPLC)


原理：采用微柱法离 子交换层析和梯度洗脱技术，全自动分析仪
可分离血红蛋白的变异体与亚型，容易发现重型和轻型
B
地中海贫血。在
操作上，
HPLC
采用的是全血标本，不需要制备
Hb
液，只要将全血标本直
接放在仪器上，通过电脑操作便能实现
HbA
、
HbA2
、
HbF
等定量检测。优


点：所需样 本量少，自动化程度高，操作简单，快速，能消除人为误
差，结果准确。
HPLC
也可 用于胎儿脐带血的产前诊断，可诊断出重型
B
地
中海贫血，但不能区分正常胎儿和杂合 子胎儿

。近年来，地中海贫血高
发地区也采用此法进行携带者检测

。

5
基因诊断




近 年来，随着分子生物学研究领域的不断发展，从最初的
B
珠蛋白基
因簇限制性酶切多态 性检测至目前的聚合酶链反应
(PCR)
技术结合其他分
子生物学方法，
B< br>地中海贫血的诊断已逐步改进和完善。基因诊断方法有
下列几种：

5
．
1
限制性片段长度多态性连锁分析
(RFLP
连锁分析
)

原
理：
DNA
限制性内切酶可识别并切割
DNA
上特定的核 苷酸序列，得到一定
长度的
DNA
片段，而碱基的突变可导致酶切位点的丢失或形成， 从而改变
酶切片段的大小。突变基因在经过相应的限制性内切酶水解后，其电泳
条带的数量和大 小就会发生改变，根据这些改变可判断出突变是否存
在。缺点：由于单独使用该方法，不能直接测出受试 者突变基因的类
型，必须结合寡核苷酸探针等技术，故其应用范围有一定限制，且操作
繁琐。如 果母亲或父亲在所有的多态性位点上都为纯合子，无法用此方
法进行产前诊断，或者患儿和父母所有位点 上都是杂合状态，只能进行
50
％

的排除性诊断。

5
．
2
探针斑点杂交技术
(
allele
—
specific oligonucleotide ASO)

应用引物扩增珠蛋白基因，同时合成 与正常序列和突变序列完全互补的
寡核苷酸探针。将
PCR
扩增产物点在尼龙膜上，分 别与标记的正常和突变