低密度脂蛋白胆固醇测定方法进展(精)

2021年1月22日发(作者：宣鼎)
低密度脂蛋白胆固醇测定方法进展







摘要

血清或血浆中低密度脂蛋白胆固醇（
LDL-C
） 与冠心病
（
CDH
）发生和动脉粥样硬化损伤呈正相关，而且是美国国家胆固醇教育计 划
（
NCEP
）作为脂类疾病分类和风险预测的一个重要指标。
LDL-C< br>也是选择药物
治疗和预后方面的一个十分有意义的临床指标，国内外都在研究和开发行之有
效、可靠的标准化测定方法。本文对其有关的测定方法和研究进展作综述。


关键词：低密度脂蛋白胆固醇；方法学；心血管疾病


临床和流行病学研 究
证明血清中
LDL-C
与冠状动脉粥样硬化有密切的正相关
[1]
。在
1986
年病理学
家们就研究证明
LDL-C
浓度越高时动脉粥 样硬化损伤的程度越大，粥样硬化程
度小时，测到血清中
LDL-C
也低
[2 ,3]
。


lDL
是一组不均一的脂蛋白颗
粒，一般认 为
LDL
的漂浮密度为
1.006
～
1.063
，且包括了 中间密度脂蛋白
（
LDL
）
1.006
～
1.019
及
Lp(a)1.050
～
1.080
。
LDL
中蛋白含 量约为
20
％～
25
％，主要是载脂蛋白
B-100
（ApoB-100
），而载脂蛋白
E
（
ApoE
）和载脂蛋白< br>CⅡ（ApoCⅡ）含量很少。胆固醇的含量约是血清中总量的三分之二。
LDL
是通< br>过受体途径进行降解，如过量时可以导致巨噬细胞和其他吞噬细胞变成泡沫细
胞，这被认为是与动 脉粥样硬化有关的因素。因此，
LDL-C
的测定结果直接影
响到分类和治疗。美国的
NCEP
专家组以
LDL-C
浓度将成人、小孩、青少年各分
为：成 人在
3.37mmol/L(1300mg/L)
以下为合适水平，在
3.37
～
4.12mmol/L(1300
～
1590mg/L)
间作为中危水平 ，高于
4.14mmol/L(1600mg/L)
时
作为高危水平；小孩和青少年在
2.85mmol/L(1100mg/L)
以下为合适水平，在
2.85
～
3.34 mmol/L(1100
～
1290mg/L)
为中危水平，高于
3.37mmol/L(1300mg/L)
为高危水平
[4]
。为提高LDL-C
测检水平，国内外对
LDL-C
测定方法进行广泛的
研究并不 断改善，现将有关方法研究进展综述如下：


1
等密度和密度梯度
超速离心法


血清中的各种脂蛋白的分离是< br>LDL-C
测定的一个重要环节。由
于各种脂蛋白的大小、密度和组成及功能都有很大的 不同。超速离心技术就是
利用脂蛋白各种成分的密度不同将它们分离，是脂蛋白分离的主要方法。


1950
年
Delalla
和
Gofman
首次报道等密度超速离心法。在实验室中一般采用
β
Quantification
（
β
Q
）法，它利用
1.006
的临界分离液，在离心力为
10900g
时离心
18h
，将血浆分成上下两部分，上清液为
VLDL和乳糜颗粒，下面
为
IDL
、
LDL
和
HDL
。用试管切开技术将上下液体分开。下面部分再采用化学沉
淀法将
HDL
和
L DL
及
IDL
分开，分别用酶法测定胆固醇。这方法已被临床实验
室作为参考 方法。而且还可以根据需要改变分离液密度，当密度提高为
1.019
，可以将
IDL
与
LDL
和
HDL
分开，也可提高到
1.21
，分 离出
HDL
等。但
在选择脂蛋白分离切点系指它们与缓冲液混和物的密度，而不是脂蛋 白自身的
密度。


另外有报道用密度梯度超速离心法
[5]。这种方法是将血清加入到
已有不同密度梯度的分离液中，进行超速离心后，血清中脂蛋白的各种成 份可
以转移到各自相等密度的相等的区域。这种方法可以一次将脂蛋白中的各种成
份分离。而不 足之处是要求离心时间很严格，分开各种组份较困难。根据离心
转子的不同，可以分为水平转子，垂直转 子以及固定角度转子。水平转子在实
验中已被证明分离效果最好，但要求离心时间长（
17～
66h
）；垂直转子可以缩
短时间（
45min
～
3 h
），由于转动距离小，会有微量丢失；在等密度超速离心中
首选固定角度转子，如在密度梯度 超速离心中使用时，离心时间要比垂直转子
稍长。


这两种方法对实验室 要求条件高，一般实验室都难以应用。虽然现
在有很多改良方法，克服了传统方法的部分缺点，但分离的 效果仍不能同传统
方法比。所有的超速离心法都有它们的局限性，它们所测得的结果仍是
NCE P
作
为分类和治疗的指标。


2
谱法


根据脂蛋白分子的大小和亲和性有很
大的不同，利用层析技术对脂蛋白进行分离。目 前有多种色谱仪和分离柱被用

于脂蛋白的分离。而琼脂糖层析技术和
Toya so da
的高压凝胶层析技术使用最
普遍。这种方法是非破坏性，可以回收各种成份，有报道
[6]LDL-C
的回收率可
以达到
80
％～
98
％，但 稳定性较差。目前这种技术也在不断完善，但要求实验
条件高，操作繁琐，时间长，仪器昂贵，难以在临 床实验室应用。


3
电泳


电泳技术是基 于脂蛋白分子所带的电荷和分子量大小不同进行分离，早期这种
技术在临床实验室普遍用于定性分析，直 接观察血清脂蛋白谱。现在已不再推
广使用，大量实验证明电泳电量法所得的结果不能令人满意，并且发 现与常规
实验测得的结果有误差。有报道
[7]
肝硬化胆道阻塞病人的血清脂蛋白谱显 示正
常，而血清胆固醇浓度追忆忼于
25.9mmol/L(10g/L)
。因此还应 进行总胆固醇
（
TC
）测定。因为亲脂性染料不能和游离胆固醇以及磷脂结合。另外， 可以与
超速离心法和化学沉淀法联合使用，经分离后，进行某一组份纯度分析。免疫
与电泳技术 结合，可以大大提高准确度；以及全自动电泳分析仪出现，在常规
实验室进行脂蛋白定量分析将成为可能 。


4
化学沉淀法


4.1
肝素
沉淀法

肝素在
pH
值
5.12
柠檬 酸缓冲液中可以沉淀
LDL
，使
LDL
与其它脂蛋
白分离，然后进行 胆固醇测定。这种方法
pH
值很重要。
pH
值必须使
LDL
颗粒
的脂蛋白所带电荷刚为正值。由于
VLDL
和
LDL
等电点分别 为
4.7
和
5.4
，
pH
值
5.12±0.02< br>时
LDL
刚好可以完全沉淀，而
VLDL
不沉淀。肝素沉淀法与定量电
泳法有很好的一致性，但当
TG
含量大于
4.58mmol/L(4000m g/L)
时，一致性相
对降低。在Ⅲ型血浆脂蛋白增高症的病人血清中加沉淀剂时
VL DL
和
Lp(a)
与
LDL
发生共同沉淀，导致结果出现偏差。这种 方法在
TG
低时，它有很好的精密
度，变异系数小于
3.5
％。与等 密度超速离心法比较，当
TG
浓度大于
2.0mmol/L(1750mg/L)时，肝素法出现结果偏离
[4]
。近年
Armstrong
等
[ 8]
实验
证明降低
pH
值到
4.85
时
Lp(a)
沉淀。


4.2
聚乙烯硫酸（
PVS
）沉淀法

含有
EDTA
的< br>PVS
可将血清中
LDL
沉淀。
PVS
沉淀
LDL< br>是非离子相互作用，
pH
值
影响较小，
pH
值在
3< br>～
8
范围内均可以沉淀。因此，并不需要精确的
pH
值。沉
淀 剂中
EDTA
与血清中二价离子结合，阻止
VLDL
共同沉淀，而聚乙二醇独 甲醚
（
PEGME
）加速
LDL
形成小球，可缩短沉淀时间。
Assmann
等
[9]
实验证明
PVS
法可以将
LDL
同
HDL
、
VLDL
和
LpX
分离，但
L p(a)
则完全同
LDL
共同沉淀，实
际结果应包括
Lp(a)所含的胆固醇。当血清中
TG
浓度小于
4.2mmol/L
（
3 680mg/L
）时，与超速离心法有很好的一致性，但当
TG
大于
4.6m mol/L(4070mg/L)
时，
PVS
法所得结果偏低，且随
TG浓度的升高误差也随
着增大。当血清
TG
低时，
PVS
法与其它 所有方法都有很好的一致性，且有好的
精确度，变异系数小于
3.0
％。


4.3
多环表面活化法

本法采用
pH
值6.10
的异吡唑缓冲液中非特异两歧性聚合物使
LDL
沉淀，然后将沉淀物重新 溶解直
接测定
LDL-C
或有
TC
与上清液胆固醇之差计算出。Moss
等报道
[10]
此法与超
速离心法和电泳法有很了的一致性，但 与其他化学沉淀法一样受血清中的
TG
浓
度影响。


5
Friedewald
公式计算法


1972
年
Friedewald
和
Levy
等
首次提出用公式计算：
LDL
－
C
＝
TC
－
(HDL
－
C
＋< br>VLDL
－
C
），而
VLDL
－
C
＝
TG×0.45(mmol/L)或
VLDL
－
C
＝TG×0.20(mg /L)。此公式是基于
TG
和比率恒定
的情况与其它方法有很好的相关性，并要求空腹 血清。如Ⅲ型血浆脂蛋白增高