试管胚胎都能移植吗-试管取了
一、
INFORMATIONFORTEST
检测信息
项目名称
方法
方法依据
乙型肝炎病毒核酸
聚合酶链反应
卫生部
《全国临床检验 操作规程》
第三版
(
2006
)
第七篇第六章第一节
二、
ANALYTICALPRINCTPLE
检测原理
聚台酶链 式反应
(PCR
〕可对特定核苷酸片段进行指数级的扩增,
而实时荧光定量
P CR
技术,
是指在
PCR
反应体系中加入荧光基团,
利
用荧 光信号积累实时监测整个
PCR
进程,
最后通过标准曲线对未知模
板进行定量 分析的方法。
在实时荧光定量
PCR
反应中,
引入了一种荧
光化学物 质,荧光物质有两种:荧光探针和荧光染料。我们目前是使
用
TaqMan
荧光探针的 检测原理:
PCR
扩增时在加入一对引物的同时
加入一个特异性的荧光探针,
该探针为一寡核苷酸,
两端分别标记一
个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整 时,
报告基团发射的
荧光信号被淬灭基团吸收;
PCR
扩增时,
Ta q
酶的
5
’一
3
’外切酶活
性将探针酶切降解,
使 报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,
从而荧光
监测系统可接收到荧光信号,
即每扩增一 条
DNA
链,
就有一个荧光分
子形成,荧光信号强度也等比例增加(图一)< br>。这样就可以通过荧光
强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
三、操作步骤
(一)试剂配制
1
、进入试剂准备区,开启冰箱冷冻层取出
HBV-DNA
检测试剂盒。查< br>看外包装盒
(
包括生产批号、有效期
)
,无误后拆开试剂盒,取出核酸
提取液、反应液及
Taq
酶
(
核对核酸提取液、
HBVPC R
反应液及
Taq
酶
管上批号与试剂外包装盒批号是否一致
)
(图
1
)
,
不一致则不可使用,
需更换新的试剂。室温平衡
20min
,完全融化后
2000rpm
离心备用。
2
、核酸提取液的分装
(
1
)取离心管架置于超净工作台 内
(
开机前用紫外线消毒
30
分钟
)
,
用右手拿起 镊子逐个将离心管放入离心管架(注意应夹住离心管外
壁,不能碰到管内壁
)
,摆放顺 序为横列从左往右摆,竖列为从上往
下隔行排,离心管个数为
n(n=
样本数
+
对照品
+
质控品
)
。完成后将镊
子放回原位(图
2
)
。
(
2
)用移液器准确吸取核酸提取液
50ul
分装至离心 管中
(
左上角第
一排开始,
从左住右依次加入)
。
因核酸提 取液内含固体沉淀颗粒物,
为使颗粒均匀分布,
故每次取样时都要用移液器反复吸打
3 -4
次
(图
3
)
。分装完毕后将移液器量程归位。
(
3
)加完一架后用右手拿镊子将离心管拿起,左手大拇指和中指夹
紧离心管下部,然后 用食指将盖子盖上,顺序为:从右下角第一个开
始,从右住左依次盖上(图
4
)
,离心管盖全部盖完后,通过传递窗
转移至标本处理区。
3
、
HBV- DNA
反应液的配制
每批需设置空白对照、阴性对照、临界阳性对照(同时检测低值
阳性质控品,则无需再检测临界阳性对照〕
、阳性质控品、阳性标准
品。所需每批需配 制数
n=
样本数
+
对照品
+
阳性标准品
+
质控品,每个
测试反应体系配制如下表:
试剂
用量(
ul
)
HBV PCR
反应液
Taq
酶
(
1
)
每盒
HBV-DNA
试剂可检测
32
人份,
根据每日需检测标本份数计
算出每批所需
HBV
PCR
反 应液和
Taq
酶用量(例有
111
人份需要进行
检测,则有
3
盒试剂可直接使用
10ul
移液器将
Taq
酶加入
HBV PCR
反应液中,另有
111-3*32=15
人份试剂需将
HBV
PCR
反应液和
Taq
酶
使用移液器按反应体系比例吸取至离心管中配制( 图
5
)
。
(
2
)取出离心后备用的
HBV PCR
反应液和
Taq
酶,按上述要求配制
后用旋涡振荡器振荡混匀
5-10sec
,然后再用离心机
2000rpm
离心
10sec
备 用(图
6
)
。
(
3
)
从操作台面上拿取
HBV-DHA试剂配制盒
(
可选用空余的
200u1
枪
头盒
)
至超净工作台内,打开配制盒并用记号笔在相应的孔位右旁按
顺序编号(图
7
)。编号规则为:样本扩增反应管对应的孔位按相应
的样本流水号编写、阳性质控品反应管对应的孔位 编“
Q
”
(如有高值
则标为
H
,低值为
L)
,阴性对照品孔位编“
-
”
,临界阳性对照对应的
孔位编“±”
, 空白对照对应的孔位编“
B
”
,
1
号标准品对应的孔位
编“
S1
”
,
2
号标准品对应的孔位编“
S2
”
,依此类推。
(
4
)编号完毕后,用右手拿起镊子夹起反应管(ABI7300
使用的是八
联一薄壁反应管,镊子应夹住反应管外壁,不可接触到内壁。 按(图
8
)所示方向依次将所有反应管
(
反应管数
=n)
隔 列摆放到配置盒上。
< br>(
5
)
从离心机中取出已混好
Taq
酶的
PCR反应液,
用移液器
(
量程调
至
36ul)
,准确吸取反 应液并按从上到下、从左至右的顺序依次加至
反应管中,注意:吸头应深入到反应管底部,放液时应缓慢 ,切勿形
成气泡(图
9
)
。全部加样完毕后将配制盒通过传递窗转移至样本处
理区。
(二)标本处理
1
、标本、质控品及对照品的处理
(
1
)从冰箱冷冻室取出
HBV DNA
阳性质控品、阴性对照品, 室温平
衡
20min
待其完全融化。
(
2
)核对 标本和原始申请单的条形码和检验项目,无误后依次粘贴
上相应的流水号,如
ADICON
P 0001
2016-01-12
2
、从传递窗中取出试剂准备区分装好核酸提取液的 离心管架,移至
生物安全柜内在管盖上用记号笔写上阿拉伯数字
1
、
2
、
3
、
......
,
阳性质控管标上“
Q
”< br>(如有高值则标为
H
,低值为
L)
,阴性对照管标
上“
-
”
,临界阳性对照管标上“±’
,
。离心管盖上标记的是
1,就表
示该管要加入流水号为
P0001
的标本(图
10
)。
试管胚胎都能移植吗-试管取了
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