试管口45土壤酶活性测定

2021年1月20日发(作者：导管伸入试管过短)

2.
土壤蛋白酶活性的测定

2.1
甘氨酸标准曲线的绘制

1.
分别吸取
0
，
0.1
，
0.2
，
0.05
，
1.2
和< br>5mL
甘氨酸标准溶液置试管中，加蒸馏水至
5mL
。
各加入
1mL2%
茚三酮溶液摇匀，
在煮沸的水浴上加热
10min
。
将显 色溶液转入
50mL
容量瓶中，
稀释至刻度。

2.
在光电 比色计上用
1cm
比色杯于
560nm
波长处以不含甘氨酸的溶液为对照比色 测定各含甘
氨酸溶液的光密度。
以含甘氨酸溶液的浓度为横坐标，
光密度为纵坐标绘制 甘氨酸的标准曲
线。

2.2
蛋白酶活性测定方法

称取
2g
风干土两份，分别置试管中，加入
0.5mL
甲苯，摇匀后放置
15min
。另取一个
试管不加土样和甲苯作为无土对照。在一个加土样试管和无土对照试管加 入
10mL1%
白明胶
溶液，另一个加土样试管加
10mL
蒸馏水代 替白明胶溶液作为无基质对照。将试管塞紧，小
心摇匀。置
30
℃恒温箱中培养
24h
。培养结束后，将试管中悬液用滤纸过滤至另一试管中。
吸取
5mL
滤液于试管中，加
0.5mL0.05mol/L
硫酸和
3mL20%
硫酸钠 沉淀蛋白质，再次过滤。
在上述滤液中加入
1mL
茚三酮溶液，仔细摇匀，在煮沸的水 浴上加热
10min
。将显色溶液转
入
50mL
容量瓶中，
稀释至刻度。
按照测定甘氨酸标准曲线的方法比色测定各样品的光密度。
根据所测光密度值在甘 氨酸标准曲线上查出对应的甘氨酸浓度。土样在测定过程中稀释了
10
倍
（加入
10mL
白明胶溶液或蒸馏水）
，
比色测定的样品体积时
5mL
，
由各样品的甘氨酸浓
度可以得出各土样中产生甘氨酸的毫克数。











3.
过氧化氢酶活性的测定

过氧化氢酶活性的测定采用高锰酸钾滴定法，
具体方 法如下：
称取
5
克过
1
毫米筛的风
干土样，置于
1 50
毫升三角瓶中，注入
40
毫升蒸馏水和
5
毫升
0.3%
过氧化氢。随即置于振
荡器上振荡
30
分钟。然后注入
5
毫 升
1.5mol/L H
2
SO
4
过滤。取
25
毫 升滤液，用
0.01mol/ L
高锰酸钾滴定（保证在酸性环境下）
。同时设置对照 ，即三角瓶中注入
40
毫升蒸馏水和
5
毫升
0.3%
过氧化 氢，
而不加土样。
重复三次。
以单位土重消耗
0.01mol/L
高 锰酸钾的毫升数
来表示过氧化氢酶的活性。

5H2O2+2KMnO4+4H2SO4






5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4