实验三 人类染色质体的检测

2021年1月20日发(作者：凌畹)
实验三


人类染色质体的检测

一、实验目的

1
．
通过人口腔粘膜细胞性染色质的观察学习有关异染色质、
功能性异染色质 、
x
染色体失活等有关知识，

2.
学习性染色质制备、观察与分析的方法。

二、
实验原理





早在六十年代，
Barr
和
Bertram
在雌性猫的神经细胞核中发现，
在多数核 中
部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，
此后许多人的 研究指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、
偶蹄类、
食肉类和
灵长类等动物的多数 组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察
到。


这种染色质小体现在称为“性染色质”
(sex chromatin)
，或称为“巴氏小
体”
(Barr body)
。这种 小体常位于核膜的内表面，呈
Feulgen
阳性反应，表明
是
DNA
的成分
(
图
1)
，


有证据表明，性染 色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个
X
染色
体，
其中一个
X
染色体处于失活状态。
雄性个体只有一个
X
染色体。
因此原则上< br>男性不应有性染色质．但如果一个男人有
XXY
染色体，那就会有一个性染色质，
虽然表现为男性。同样，
XXX
的三体应当有两个巴氏小体。因此，性染色质实质
上 是一个失活的
X
染色体。


为什么失活的
X
染色体会以巴氏小体的形式显示出来
?
目前，已有许多证据
证明，
在雌性个 体中那根失活的
X
染色体已经异染质化，
成为功能性异染质。
使
用放 射自显影的方法已经证明，
失活的
X
染色体的固缩周期与其它染色体是不同
步 的，
它在
S
期是晚复制的。
此外，
人们也已发现，
晚复制的 这根
X
染色体常位
于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。

三、实验准备

1.
器材：显微镜，镜油瓶，镊子，擦镜纸，漱口杯
(
灭菌
)
，压舌板
(
灭菌
)
，清洁
玻片、 盖玻片。

2.
试剂：
二甲苯，
5N
HCl
，< br>1
％硫堇水溶液，
蒸馏水、
封固剂；
酒精：
50
％，
70
％，
95
％，纯酒精。

四、实验步骤


（一）材料的获得

从自己的口腔粘膜取材，
有两点需要特别注意 的事项。
首先
载片要绝对清洁
，
否
则在操作过程中上皮细胞会脱落，
导致实验失败。
玻片需经过预先处理、
可用去
污剂彻底清洗，蒸馏水彻底冲洗 后再经
70%
酒精的冲洗，在火焰上烘干备用
。


另外一个比较难以克服的问题是如何
避免口腔的上皮细胞被口腔中的细菌
污染
。
这将造成特殊的麻烦，
因为
细菌也很容易被染色
，
如果碰巧也处于核膜附< br>近就很容易和性染色质混淆。
可以部分克服的办法是事先
用自来水漱口三次
。< br>这
将可以部分除去细菌和—些即将脱落的已退化的粘膜上皮细跑。

< br>用牙签刮面颊内壁，
将刮下来的细胞涂在载片上，
应涂成一个占较大面积的
薄层
，在空气中
干燥
30
分钟后
进行染色程度的处理。请至少制备两张涂 片。

（二）染色

1
、口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察


刮取颊部粘膜上皮细胞（用灭菌玻璃片）→涂片
→
60%< br>冰醋酸固定
5
分
钟
→
吸去冰醋酸，用
醋酸洋红染色< br>20
～
30min
→
压片
→
镜检


2
、发根细胞巴氏小体观察

1
）
拔取带毛囊头发一段→
45%
冰醋酸解离
5
分钟
→
剥取毛囊→
醋酸 洋红染色
20
～
30min
→
压片观察

（三）观察与报告

1
．镜检制片，

先用低倍镜找到细胞，低倍镜下检出典型的可数细胞的标准：


①核质是网状或细颗粒状分布


②核膜清晰、核无缺损


③染色适度


④周围无杂菌

应避开细菌污染较多的区域。
重叠的细跑、
折叠的细 胞、
染色过深或过浅的
细胞以及核质已颗粒化显示退化的细胞等都不应在统汁数字之内。
性染色质的观
察应在
油镜下进行
，要注意小心操作。

2
．
性染色质位于核膜的内面，直径大约
1um
。在口腔粘膜上皮细胞中很难辨认
非边缘的
X
染色质。形状有凸形、三角形、卵形、短棒及双球形等。

3< br>．性染色质偶尔也可在雄性细胞中观察到，在口腔粘膜中正常的阳性范围是
2
％。在女性 口腔粘膜上皮细胞中，阳性率在
15
％以上。许多研究人员认为在健
康的上皮细胞中可 观察到性染色质的可占
50%-65%
。

五、作业

在报告纸上报告制片结果并回答下述问题。

1.
检查制片的质量，存在什么问题
?
2.
镜检自己的制片，观察
50
个以上细胞，计算具有性染色质的细胞的百分数，
性染色质的数量和性染色质的大 小。

3.
观察中选绘
4
～
5
个典型细胞
(
女性
)
，绘图示明
X
染色质体的形成和部位。

4.
为什么某一
X
连锁的突变基因纯合子女性的病情并不比半合子的男性严重？

5.
正常男人的染色体组成是
44+XY
，而正常女人的染色体组成是
44+XX
，请按要
求填写下列表格：

Barr
小体

性别表现

性染色体的

体细胞中的

的数目

组成情况

染色体总数

0
正常男人

0
有缺陷的女人

1
有缺陷的男人

1
正常女人

2
有缺陷的男人

2
有缺陷的女人