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ABO
、
Rh-D
血型鉴定操作规程
1.
目的:规范
ABO
、
Rh-D
检测的操作过程
2.
标本采集:静脉采血
2ml
抗凝血
,
避免溶血试剂
3.
试剂:长春博讯生物技术有限责任公司
4.
方法原理
【原理】
:
标准血清中的完全抗体
(lgM)
抗
A
、抗
B
、和
抗
D
能和红细 胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特
异性的凝集反应。
根据红细胞凝聚类型可鉴别出
A
、
B
、
O
、
AB
四型和
RHD
阴性或阳性。
5.
操作
:
一、玻片法
(
一般只能做正定型
)
【正定型】
:
1
、取一张玻片
,
用蜡笔或记号笔将其分为三等份
,
从左
到右每一等份左上角标明
A
、
B
、
D,
2
、对应 加入抗
A
和抗
B
抗
D
标准血清一滴
;
3
、分别加
PC(
患者
10
—
15%
红细胞悬液);
4
、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀
,
混合物约
2c m2
大小
;
5
、轻轻地连续倾斜转动玻片
2
—
5
分钟
,
观察并记录
;
【解释】
:A
端凝集为A
型血
;B
端凝集为
B
型血
;A
、
B
端均凝集则为
AB
型
;A
、
B
端均不凝集则为O
型
;D
端
凝集则为
RH
阳性者
,
无 凝集则为
RH
阴性。
备注
:
玻片法可作为
ABO
血型初筛或复检
;
不适用于抗
体鉴定和交叉配血
;
不适合检 测
ABO
亚型。
二、试管法
(
盐水介质
) 【原理】
:
标准的
A
型和
B
型红细胞能和受检者血清< br>(
血
浆
)
中相应的抗体发生特异性结合
,
形成肉眼可 见的凝
集反应
,
从而可推断出受检者的血型。
【材料】
:
1
、标准
A
型和
B
型红细胞悬液
(
浓度< br>4%,
商品有售
,
亦
可自行新鲜配制
);
2
、受试者血清或血清
;
3
、洁净康氏试管。
【正定型】
:
1
、取二支洁净试管分别记上抗
A
和抗
B;
2
、 对应加入抗
A
和抗
B
血清
1
滴
;
3、分别加入病人红细胞悬液
1
滴
(
浓度为
2%-5%); 4
、混匀
,
室温放置
5
分钟
,1000rpm
离心
1
分钟
,
取出观
察结果
【解释】
:
轻摇试管
,
检查是否凝集
,
抗
A
、抗
B< br>管均凝
集
,
受试者为
AB
型血
;
抗
A
、抗
B
管均不凝集
,
则为
O
型血
;抗
A
管凝集则为
A
型血
;
抗
B
管凝集 则为
B
型血。
【反定型】
:
1
、取二支试管分别记上
AC
和
BC;
2
、分别加入病人血清
;
3
、对应加入
A
和
B
型试剂红细胞
;
4
、混匀室温放置
5
分钟
,1000rpm
离心
1
分 钟
,
取出观
察结果
;
【解释】
:
首先检查上清液 有无溶血
,
然后轻摇试管
,
检查
是否凝集
,A
、< br>B
管均凝集受试者为
O
型血
;A
、
B
管均< br>不凝集则为
AB
型血
;A
管凝集则为
B
型血
;B
管凝集则
为
A
型血。
3.
卡式法
(
微柱凝胶技术
)
【原理】
:
在含有中性胶的微柱管中相继加入红细胞抗
体和红细胞
,
孵育后相应的抗原和抗体则 形成免疫复合
物
,
利用凝胶分子排阻原理在一定的离心力下
,
该复合
物不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中
.
无相应
的抗原和抗体
,
则不能形成免疫复合物
,
在一定的 离心
力下
,
分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
可用于
ABO
血型正反定型
,RH
血型检测或其它应用完
全性抗体的血型检测。
【试剂】
:
血型检测卡
ABO
试剂红细胞
【正定型】
:
在含有红细胞抗体的微柱凝胶管中加入待
检红细胞
,
孵育后离心观察结果。
分散的红细胞可以通
过凝胶间隙沉于微柱腔底部
,凝集的红细胞不能通过凝
胶间隙浮于胶表面或悬于胶中。
【解释】
:< br>抗
A
、
抗
B
管均凝集
(
浮于胶表面或悬于胶 中
),
受试者为
AB
型血
;
抗
A
、
抗
B
管均不凝集
(
沉于微柱腔
底部
),
则为O
型血
;
抗
A
管凝集则为
A
型血
;< br>抗
B
管凝
集则为
B
型血。
【反定型】< br>:
将抗原吸附在红细胞表面
,
检测与其相应抗
体发生的凝集反应。在
ABO
血型反定型试验中
,
将人
A
或
B型血型多糖抗原经媒介化合物联结到
O
型红细胞
上
(
可长期保存
),
然后将该具有
A
型抗原或
B
型抗原红
细胞分别 与被检血清在微柱凝胶中反应
,
检测被检血清
中
ABO
抗体
.
【解释】
:A
、
B
管均凝集受试者为
O
型血< br>(
浮于胶表面
或悬于胶中
);A
、
B
管均不凝集则为
AB
型血
(
沉于微柱
腔底部
);A
管凝集则为B
型血
;B
管凝集则为
A
型血。
交叉配血操作规程
交叉配血的目的是确保为病人选择合适的血液和
测定受试者血清中有无任何不规则的抗体
,
防止输血后
产生溶血性输血反应。交叉配 血有两类即主侧交叉、
次侧交叉
,
交叉配血实验的结果
,
主侧是绝对 不可以有
凝集和溶血现象
,
次侧在
A
或
B
型人输入
O
型血时
,
可
以有凝集现象
,
但不可以有溶血现象 。
一、盐水交叉配血实验
(
试管法
)
【原理】
:
完全抗体
(lgM)
在盐水介质中能和相应的抗原
发生免疫反应
,
形成肉眼可见的凝集反应。
【试剂】
:
生理盐水
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