东南大学考试管理办法-腰酸是什么原因
动物肝脏中DNA勺提取及检测实验报告
动物肝脏中DNA勺提取及检测
一、前言
脱氧核糖核酸
脱氧核糖核酸,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染 色体的主要化学
成分,同时也是组成基因的材料。有时也被 称为“遗传微粒”,原因是在繁
殖过程中,父代会把它们自 己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性
状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很 高的粘度,可
被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线有吸收作用, 利用这一特性,可以对
DNA进行含量测定。当核酸变性时, 吸光度升高,称为增色效应;当变性核
酸重新复性时,吸光 度又会恢复到原来的水平。 较高温度、有机溶剂、酸碱
试剂、 尿素、酰胺等都可以引起 DNA分子变性,即DNA双链碱基间 的氢键
断裂,双螺旋结构解开一也称为 DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色 体则统称为染
色体组。对于人类而言,正常的体细中含有 46 条染色体。染色体在细胞分裂
之前会先在分裂间期完成复 制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成
前期、S期-DNA 合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物,如动物、植物
及 真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物,
如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。染
色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将 DNA进行组
织并压缩,以帮助 DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调 节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构
DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级 结构、三级结
构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸, 即腺嘌呤脱氧
核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核 苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸。而
脱氧核糖与磷酸分子借酯键相 连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基
排列在内侧。 每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着
DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质 的合成。读取密
码的过程称为转录,是以
单链为模板转录出一段称为
DNA双链中的一条
mRNA勺核酸分子。
3', 5 '
DNA是许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用
-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数 DNA含有两条这样的
长链,也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体 $$ X174、G4 M13等。DNA有
环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的 DNA 中,5-甲基胞嘧啶可在一定
限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚 DNA的 5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌
体中,
胞嘧啶取代了胞嘧啶。 40年代后期,查加夫发现不同物种
DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤
数等于其胸腺嘧啶数,鸟嘌呤数等于胞嘧啶数,因而嘌 呤数之和等于嘧
啶数之和,一般用几个层次描绘 DNA的结构。
5-羟甲基
浓盐法从动物组织中提取 DNA
核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在,其中 DNP能溶于水
及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很
低,而RNP则可溶于低盐溶液, 因此可利用不同浓度的 NaCI 溶液将其从样
品中分别抽提出来。将抽提得到的 DNP用 SDS
处理可将其分离 DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉 淀除去可得DNA
上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。
肝脏细胞
肝脏是肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通 过显微镜才能看
到。人肝约有 25亿个肝细胞,5000个肝细
50万个。
胞组成一个肝小叶,因此人肝的肝小叶总数约有
肝细胞为多角形,直径约为 20-30力叭微米),有6-8个面, 不同的生理条件
下大小有差异,如饥饿时肝细胞体积变大。 每个肝细胞表面可分为窦状隙
面、肝细胞面和胆小管面三 种。肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构 :
如肝细胞核、
肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体 及饮液泡等组
成。
二、实验目的
1.
三、实验原理
掌握浓盐法从动物组织中提取
DNA的原理与技术
核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在,其中
DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很
低,而RNP则可溶于低盐溶液, 因此可利用不同浓度的 NaCI 溶液将其从样
品中分别抽提出来。
将抽提得到的DNP用 SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,
用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得
醇即可将其呈纤维状析出。
四、实验器材和材料试剂
实验器材: ①匀浆器
DNA上清,加入冷乙
②量筒 ③离心机
④
离心管 ⑤试管 ⑥吸管 料: ①猪肝实验试
剂:
⑦恒温水浴锅实验材
①
L L 柠檬酸钠溶液
②
95%乙醇
④5%SDS§液
五、实验操作
③NaCI固体
⑤V(氯仿):V20: 1的混合液
1.称量
①称取一定质量的猪肝,加入
钠缓冲液并用匀浆器磨碎
2倍肝重的L L柠檬酸
2.
提取DNA
①
量取肝糜4 ml于10毫升离心管,在 4000rmin下离
心10min,沉淀中再加入 8 ml缓冲液于4000rmin 离心5 min;
②
弃上清,取沉淀;
③
将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧
杯、加入5 ml氯仿- 异戊醇混合液、1 ml SDS振荡30min ;
④
缓慢加入固体NaCI,使其最终浓度为1molL ;⑤将 溶液分装到2
个10毫升离心管中,在4000rmin离心5 min, 取上清水相;
⑥
在上述水相溶液中分别加等体积冷 95%乙醇,边加边
用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用 滤纸吸去多余的
乙醇,即得 DNA粗品;
⑦
用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。
③
在粗提取DNA操作中,频繁地将 DNA提取液转移至各 个仪器内,
可能有极小部分 DNA提取液未倒净,残留在仪器 壁上损耗掉,导致实验误
差;
④
在使用移液枪的过程中,可能因为操作不当或移液枪
经常错误使用,出现仪器误差,导致吸取的DNA羊液不精确, 出现实验误
差;
⑤
在水相中加入乙醇析出 DNA寸,不是所有DNA匀析出,
有小部分依旧融在溶液,导致提取出的 DNA含量偏低;
⑥
标准曲线制作过程中出现些许误差;
总的来讲,本次试验结果是相对比较成功的,较为粗略 地测量出猪肝中
DNA勺含量,并且较为熟练地掌握了浓盐法 从动物组织中提取 DNA的原理
与技术,基本达到了本次实验 的目的。在今后的实验中会着重注意实验操作
的严谨性,严 格按照实验前拟定完全的实验步骤进行,保证将实验操作过 程
中可能出现的误差概率降到最低,尽可能达到预期的实验 效果,完成自我的
学习及锻炼过程。
动物肝脏中DNA的提取及检测
一、前言
脱氧核糖核酸
脱氧核糖核酸,又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染 色体的主要化学
成分,同时也是组成基因的材料。有时也被 称为“遗传微粒”,原因是在繁
殖过程中,父代会把它们自 己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性
状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很 高的粘度,可
被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线有吸收作用, 利用这一特性,可以对
DNA进行含量测定。当核酸变性时, 吸光度升高,称为增色效应;当变性核
酸重新复性时,吸光 度又会恢复到原来的水平。 较高温度、有机溶剂、酸碱
试剂、
尿素、酰胺等都可以引起 DNA分子变性,即DNA双链碱基间 的氢键断裂,
双螺旋结构解开一也称为 DNA的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色 体则统称为染
色体组。对于人类而言,正常的体细中含有 46 条染色体。染色体在细胞分裂
之前会先在分裂间期完成复 制,细胞分裂间期又可划分为:G1期-DNA合成
前期、S期-DNA 合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物,如动物、植物
及 真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;而对于原核生物, 如细菌而言,
则主要存在于细胞质中的拟核内。染
色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将 DNA进行组
织并压缩,以帮助 DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调 节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构
DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级 结构、三级结
构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸, 即腺嘌呤脱氧
核苷酸、胸腺嘧啶脱氧核苷酸、胞嘧啶脱氧核 苷酸、鸟嘌呤脱氧核苷酸。而
脱氧核糖与磷酸分子借酯键相 连,组成其长链骨架,排列在外侧,四种碱基
排列在内侧。 每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着
DNA长链所排列而成的序列,可组成遗传密码,指导蛋白质 的合成。读取密
码的过程称为转录,是以
单链为模板转录出一段称为 mRNA勺核酸分子。
DNA是许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用
-磷酸二酯键相连构成的长链。大多数
3', 5 '
DNA双链中的一条
DNA含有两条这样的
长链,也有的DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体 $$ X174、G4 M13等。DNA有
环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的 DNA 中,5-甲基胞嘧啶可在一定
限度内取代胞嘧啶,其中小麦胚
DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中,
胞嘧啶取代了胞嘧啶。
5-羟甲基
40年代后期,查加夫发现不同物种
DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤
数等于其胸腺嘧啶数,鸟嘌呤数等于胞嘧啶数,因而嘌 呤数之和等于嘧
啶数之和,一般用几个层次描绘 DNA的结构。
浓盐法从动物组织中提取 DNA
核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在,其中 DNP能溶于水
及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很
低,而RNP则可溶于低盐溶液, 因此可利用不同浓度的 NaCI 溶液将其从样
品中分别抽提出来。将抽提得到的 DNP用 SDS
处理可将其分离 DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉 淀除去可得DNA
上清,加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。
肝脏细胞
肝脏是肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通 过显微镜才能看
到。人肝约有 25亿个肝细胞,5000个肝细
50万个。
胞组成一个肝小叶,因此人肝的肝小叶总数约有
肝细胞为多角形,直径约为 20-30力叭微米),有6-8个面, 不同的生理条件
下大小有差异,如饥饿时肝细胞体积变大。 每个肝细胞表面可分为窦状隙
面、肝细胞面和胆小管面三 种。肝细胞里面含有许许多多复杂的细微结构 :
如肝细胞核、
肝细胞质、线粒体、内质网、溶酶体、高尔基氏体、微粒体
及饮液泡等组成
二、 实验目的
1.
掌握浓盐法从动物组织中提取
DNA勺原理与技术
三、 实验原理 核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白的形式存在,其中
DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在 M的盐溶液中溶解度很
低,而RNP则可溶于低盐溶液, 因此可利用不同浓度的 NaCI 溶液将其从样
品中分别抽提出来。
将抽提得到的DNP用 SDS处理可将其分离DNA和蛋白质,
用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得
醇即可将其呈纤维状析出。
四、实验器材和材料试剂
实验器材: ①匀浆器
DNA上清,加入冷乙
②量筒 ③离心机
④离心管 ⑤试管 ⑥吸管 料: ①猪肝实验试
剂:
⑦恒温水浴锅实验材
①
L L 柠檬酸钠溶液
②
95%乙醇
④5%SDS§液
五、实验操作
③NaCI固体
⑤V(氯仿):V20: 1的混合液
1.称量
①称取一定质量的猪肝,加入
2倍肝重的L L柠檬酸
钠缓冲液并用匀浆器磨碎
2.
提取DNA
①
量取肝糜4 ml于10毫升离心管,在 4000rmin下离 心10min,沉淀
中再加入 8 ml缓冲液于4000rmin 离心5 min ;
②
弃上清,取沉淀;
③
将沉淀用10 ml柠檬酸钠缓冲液完全洗入干净的小烧
杯、加入5 ml氯仿-异戊醇混合液、1 ml SDS振荡30min ;
④
缓慢加入固体NaCI,使其最终浓度为1molL ;⑤将 溶液分装到2
个10毫升离心管中,在4000rmin离心5 min, 取上清水相;
⑥
在上述水相溶液中分别加等体积冷 95%乙醇,边加边
用玻棒慢慢朝一个方向搅动,将缠绕在玻棒上的凝胶状物用 滤纸吸去多余的
乙醇,即得 DNA粗品;
⑦
用8ml蒸馏水溶解DNA粗品于10ml离心管中。
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本文更新与2020-12-16 04:24,由作者提供,不代表本网站立场,转载请注明出处:http://www.xapfxb.com/yuer/384424.html
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