人体红细胞叶酸含量测定方法

2020年10月27日发(作者：宗稷辰)
人体红细胞叶酸含量测定方法说明

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人体红细胞叶酸含量测定方法

(一)技术领域

本发明涉及一种人体红细胞叶酸含量测定方法，属于标志免疫学 范畴。

(二)背景技术

长期以来，临床检验中一般是对人血清中叶酸含量的测定，来判 断人体叶酸的缺乏与否。
近年来，经研究证明红细胞中叶酸含量是血 清中叶酸的含量的10～20倍，并且血清中叶酸
含量由于受饮食、疾 病等外来因素的影响，其浓度水平波动较大。而红细胞中叶酸含量受 外
界因素的干扰很少，更能真实地反映组织中叶酸的浓度水平。仅仅 测定血清叶酸含量就不
能满足临床医学的要求，尤其发现红细胞叶酸 水平的高低对预防人口出生缺陷有非常重要
的价值，测定红细胞叶酸 含量的工作就有一种新的意义。

过去血清叶酸含量测定一般采用放射免疫检测方法γ-计数仪进 行的。该技术(简称RIA)
是将放射性同位素标记技术与抗原抗体反 应结合起来的一种微量分析方法。1960年建立的
经典RIA是使同位素 标记的抗原和待测未标记抗原与对应的抗体作用，在抗原过量的条件
下，两种抗原与抗体竞争结合，然后通过测定抗原抗体复合物和游离 抗原的放射性来求得
待测抗原的含量。该方法测定步骤繁琐、反应时 间长、试剂稳定性差，更重要的是由于标
记物是放射性同位素，对环 境污染大，对人的健康有威胁，但在相当一个时期由于涉及方
法学的 特点，专业界只能不得已而为之。

(三)发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种灵敏度高、准确性好、没 有环境污染的人体红细
胞叶酸含量测定方法。

为了解决上述技术问题，本发明包括如下步骤：

(1)采集全血标本；(2)全血标本预处理：使红细胞完全破坏， 使红细胞叶酸成分被完全
释放出来；(3)用化学发光法测定全血 的叶酸含量，(4)通过全血中叶酸的含量和已知的红细
胞压积换 算出红细胞中叶酸含量。

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为了使叶酸完全释放，并使叶酸不被破坏，所述步骤(2)全 血标本预处理为：取容积比
为20的1～1.5％的抗坏血酸溶液和全血标 本混匀，室温放置1小时后备用。

为了操作简便，所述步骤(3)包含步骤有：a取微孔板，对微孔 用叶酸的单克隆抗抗体进
行包被；b然后在微孔内添加经预处理后的 全血标本、酶标记抗原和叶酸抗体，全血标本
的抗原和酶标记抗原与 抗体竞相结合后，形成包被二抗- 叶酸抗体-酶标记抗原复合物，添
加 化学发光底物使其发射光子，计数其光子数，与同条件下所测的已知 量的标准抗原所得
的专用标准曲线比较，计算出被检全血标本中的叶 酸含量。

本发明通过化学发光法测定全血的叶酸含量，再通全血叶酸含量 计算红细胞叶酸含量，
本方法方法操作简单、灵敏度高、检测结果稳 定，成本较低，没有环境污染(放射性污染)。
完全可以取代传统的 放射免疫检测方法。填补化学发光法测定红细胞叶酸含量的空白。

(四)具体实施方式

本具体实施例的人体红细胞叶酸含量测定方法包括如下步骤：

(1)采集全血标本；1.1病人必须空腹；1.2标本管需用聚乙 烯塑料管。血标本必须无脂
血、无溶血；1.3抗凝血标本必须以肝素 (15IUmol)抗凝；不加抗凝剂的血标本自然凝固必
须彻底；1.4全 血样本必须在8小时内进行试验，或者在分装后冷冻(-20℃)保存， 但必须
在7周内(以室温融解一次)使用。

(2)全血标本预处理：将全血标本与体积为其20倍的1～1.5％ 抗坏血酸溶液混匀，室温
放置1小时后备用；使得红细胞完全破坏， 使红细胞叶酸成分被完全释放出来；得到溶血
液。

(3)用化学发光法测定全血的叶酸含量，

试剂准备：

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检测仪器：红细胞叶酸检测仪、标本前处理系统。

测定方法：(操作环境避免强光照射)

是利用48或96孔塑料微孔板，对微孔用叶酸的单克隆抗抗体进 行包被，然后在微孔内
添加溶血液标本、用HRP标记的已知抗原和叶 酸抗体，经过抗原竞争反应结合后再添加发
光底物，在酶的催化下发 光底物生成激发态的中间产物，在回到基态时释放能量并发射光
子。

试剂加样测定程序表 单位：μl



充分振荡混匀30秒，37℃温育60分钟后，用稀释后的洗涤液洗板5次



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作出以抗体包被板上标准孔所测得的光子数据，和该标准孔所添 加的标准抗原S0—S5
已知的叶酸的含量，作出光子与叶酸含量的关 系曲线，即为同条件下所测的已知量的标准
抗原所得的专用标准曲 线。

根据样品孔所测得的光子，通过专用标曲线查询对应的叶酸含 量，即为所测样品的叶酸
含量。

全血叶酸含量＝实测溶血液样本叶酸含量ugml×稀释倍数

(4)红细胞叶酸含量＝全血叶酸含量红细胞压积％

(红细胞压积可参考血常规检查结果)

(由于血清叶酸含量很少，一般情况下都忽略不计。)

叶酸正常参考值：(各实验室应建立自己的正常参考值，下列正常值 仅供参考。)

(该正常值范围系美国DPO固相非煮沸法所荐)

血清叶酸 3～17ngml(6～39nmolL)

全血叶酸 43～295ngml(97～668nmolL)

红细胞叶酸 93～641ngml(212～1453nmolL)

正常参考值：本实验室自己建立

本方法技术参数：

1.灵敏度：2ngml

2.精密性：用本方法检测低、中、高三组样品(n＝10)。

批内变异系数：CV％<3％；批间变异系数：CV％<5％

3.专用标准曲线线性：r>0.9980

4.有效期：在2～8℃贮存，有效期6个月。

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