过氧化氢酶

2021年3月2日发(作者：吴江平)


实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定


姓

名：


凌豪



指导教师：





汪财生

实验室：

6503







组员
：①



吴李伟







②




凌豪










成绩：





































第三部分：实验记录与分析

一、酶活力测定

（一）原始数据

1.
样品原始质量：

豆芽菜
5g
2.
标定数据：

（
1
）< br>KMnO
4
质量数及配制：
KMnO
4
质量数
3.1 605g
溶解配制成
1000ml
（
2
）
Na
2
C
2
O
4
质量数：取草酸钠
0.11g
（
3
）标定数据：
17.3 17.4 16.8
平均
17.2
（
4
）
KMnO
4
实际浓度

0.0191mol/L
3.
样品滴定

酶反应组

0.25ml 0.3ml
对照组


0.7ml 0.6ml
（二）结果计算

1
．换算系数（
1mL KMnO
4
溶液相当于多少
mg H
2
O
2
）

(0.011*1)/0.0191=4.1mg





2.
样品酶活计算（每克鲜重样品
1min
内分解
H2
O
2
的毫克数表示：
0.3mg H
2
O
2
/g
?
min
）




二、动力学常数的测定

（一）原始数据
(KMnO4=0.0191mol/L

H2O2=0.11)

编号

1
消
耗
的
2.1
2
3.5
3
3.8
4
5.7
5
11.45
KMnO
4
（
mL
）

（二）求出各管反应前的底 物浓度
[S]
0
和反应速度
V
0



编号

1
2
0.013
3
0.018
4
0.027
5
0.055
[S]
0
（
mol/L
）

0.011
V
0

（
mmol/min
）

0.0056
0.0092
0.0110
0.0172
0.0360
（三）以
1/V0
对
1/[S]
0
作图（用
excel
作图）












（四）求出
Km
（
mol/L
）和
Vmax（
mmol/min
）

Km= 3.8

Vmax=2.4

第四部分：课后研讨题

1.
总结本实验操作过程的注意事项。

答：
1.
酶的提取和存放一般需在
0-4
℃进行。





2.
每个三角瓶内的酶促反应时间要精确控制在
5min
。





3.
各反应瓶的滴定终点微红色应为同一标准。





4.
使用前，应检查滴定管是否渗漏，滴定过程中应该保证逐滴加
入。









2.
影响过氧化氢酶活力测定的因素有哪些
?
答：适宜的温度

酸碱度的影响

底物浓度


3.
过氧化氢酶与哪些生化过程有关
?
答：
过氧化氢酶存在于红细 胞及某些组织内的过氧化体中，
它的主要
作用就是催化
H2O2
分解为
H2O
与
O2
，
使得
H2O2
不至于与
O2在铁螯
合物作用下反应生成非常有害的
-OH
4.
在反应速度的测定中，加入硫酸有哪些作用？

酸化溶液



停止反应


5.
米氏方程中的
Km
有何实际应用？

答：

是酶的特征性常数

2. Km
可用来判断酶的最适底物


可用来确定酶活性测定时所需的底物浓度


可用于判断反应级数


6.
在什么条件下，酶的
Km
可以作为鉴定酶的一种手段，为什么？

答：当酶促反应处于ν＝
1/2 Vmax
时，可从米一曼氏方程式得到
Km
＝〔
S
〕
。由此可知，
Km
值是酶促反应速度为最大速度一 半时的底物




浓度。它的单位与底物浓度一样，是摩尔／升（
mol/L
）
。
K m
值对某
一特定酶来说是个常数。可以利用酶的
Km
值比较来源于同一器官不
同组织，
或同一组织不同发育期的具有同样作用的酶，
来判断这些酶
是完全相 同的酶，或是催化同一反应的一类酶。
Km
值越大，酶与底
物亲和力越小；
Km
值越小，酶与底物亲和力越大。一个酶如有几种
底物就有几个
Km
值。其 中
Km
值最小
,
Vmax/Km
值最大者是对酶亲和
力最 大的底物，一般称为天然底物或最适底物。
Km
值随不同底物而
异的现象，可以帮助判 断酶的专一性，有助于研究酶的活性部位。



7.
测定酶活力为什么要在进程曲线的初速度时间范围内进行？

答：
要进行酶活力测定，
首先要确定酶反应时间，
酶的反应时间并不
是任意规定的，应该在初速度时间范围内选择。
可以通过进程曲线的
制作而求出酶的初速度时间范围。进程曲线是在酶反应的最适条件下
采用每隔一定时间测产物生成量的方法，
以酶反应时间为 横坐标，
产
物生成量为纵坐标绘制而成。
从进程曲线可知，
在曲线起始一段时 间
内为直线，其斜率代表初速度。随反应时间延长，曲线趋于平坦，斜
率变小，
说明酶 的反应速度下降。
反应速度随反应时间的延长而降低
这一现象可能是由于底物浓度的降低和产物 浓度的增高致使逆反应
加强等原因所致。
因此，
要真实反映出酶活力大小，
就 应在初速度时
间内测定。
求出酶反应初速度的时间范围是酶动力学性质的一系列研
究中 的组成部分和必要前提。