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法庭科学
DNA
实验室检验规范【
GA-T383-2002
】
1
范围
本标准规定了法庭科学
DNA
实验室检验应遵守的基本要求。
本标准适用于所有从事法庭科学检验的
DNA
实验室。
2
定义
本标准采用下列定义。
2.1
前期检验
prior
examination
DNA
检验前进行的预试验和确证试验。
2.2
有机溶剂法
organic
extraction
of
DNA
通过酚－氯仿混合物萃取
DNA
溶液中的蛋白质类有 机物质，而保留
DNA
于水相溶液中的提取方法。
2.3
Chelex
法
Chelex
extraction
of
DNA
利用
Chelex
能有效地去除非核酸有机物的性能而提取
DNA
的 方法。
2.4
硅珠法
silicon
bead
test
在硫氰酸胍条件下，利用二氧化硅微粒特异捕获有机质溶液中的
DNA
分子的性能提取
DNA
的方法。
2.5
CTAB
法
cetyltrimethylammonium
bromide
method
利用非离子型去污剂十六烷基三甲基溴化胺
(CTAB)< br>具有破坏植物细胞壁和细胞膜及硬组织，
并能与
DNA
形成复合物的能力，通过抽提使
DNA
与蛋白质
及多糖类物质有效分离而达到提取高纯度
DN A
的目的。
2.6
聚合酶链反应
polymerase
chain
reaction-PCR
一个酶促的特定
DNA
片段扩增过程。
3
案件受理
3.1
刑事案件的送检人员需提供公、检、法、司，以及保卫部门的盖有公章的鉴定 委托书或公函，并出示本人
的工作证。民事案件的送检人员需提供委托单位或个人的委托书，并出示本人 的身份证明。
3.2
送检人员需填 写送检登记表，详细填写送检单位、送检人姓名、送检日期、简要案情、送检检材名称及
特征、有无作过 鉴定、原鉴定单位及原鉴定结论、鉴定要求等。
3.3
接案人员在了解案情和鉴定要求后，逐一确认检材，并对检材进行编号，有条件的照相 固定，最后在送
检登记表上签名。
3.4
检验人员从接案人员手中受理检材时
,
应详细了解案情和鉴定要求< br>,
逐一核对检材后
,
在送检登记表上签名。
4
检材的提取和保存
4.1
适合
DNA
鉴定的检材包括血液（痕）、精液 （斑）、唾液（斑）、毛发、组织、骨骼等生物检材。
4.2
提取检材前注意记录检材的大小、形态等特征，必要时照相、录像固定。提取检材时必须 戴手套。提取的
检材必须分别包装，
在包装袋上注明检材名称、
来源、
数量、
采集日期等，
并有采集人及采集见证人的签名。
4.3
对于活体检材，一般用医用消毒纱布或中速滤纸采集指血或耳垂血（
2cm2
以上），自然晾干。可以用口
腔拭子提取口腔粘膜细胞，提取前须清水漱口，检材自 然晾干；或取毛发
3
根
~5
根。以上检材均用纸袋包装
后常温保存。
4.4
对于血痕，类似衣裤、地毯、 床单上的血痕，可以剪下一部分纸袋包装后常温保存；类似衣柜、墙壁、地
面、刀、斧上的血迹可以刮取 ，或用生理盐水浸湿的纱线提取，自然晾干后纸袋包装常温保存。
4.5
涉嫌性侵害的，应用棉签分别提取阴道外端、中部和后穹窿部，必要时还应 注意会阴、下腹、口腔、肛
门等部位有无精液（斑），以及现场怀疑有精斑的其他检材，如床单、被褥、 卫生纸、避孕套、内裤、衣物
等。所有检材应该分别提取、标明记号、自然晾干、纸袋包装后常温保存。
4.6
现场的可疑毛发用镊子提取，用纸折叠后置纸袋内常温保存。
4.7
含有唾液斑的检材如烟头、果核、香口胶等用镊子提取，纸袋包装后常温保存。
4.8
人流刮宫组织，取
5g
以上确认为绒 毛的组织；引产胎儿，取
5g
以上的组织；羊水，取
2ml
以上的液体。提取的检材洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。
4.9
新鲜尸体，可用医用消毒纱布或中速滤纸提取血液（
3cm2
以上） ，自然晾干，纸袋包装后常温保存。新
鲜尸体也可取肌肉组织（
50g
以上）；
腐败尸体，
尽量提取相对新鲜的组织，
包括指甲
（
2
枚 以上）
、
肋软骨
（
5cm
以上）
或者其它软骨
（< br>5g
以上）
、
深部肌肉组织（
50g
以上）、毛发（
10
根以上）；白骨化的尸体尽可能提取指甲、长骨、牙齿、毛发。
以上检材洁净容器包装、冰冻保存、冷藏送检。
4.10
根据案件情况，注意提取对照样本。
5
前期检验
5.1
血痕检验
5.1.1
预试验
—
联苯胺试验
5.1.1.1
试剂
a
）
联苯胺无水乙醇饱和液；
b
）
3%
过氧化氢溶液；
c
）
冰醋酸。
5.1.1.2
方法
取滤纸轻轻擦拭斑迹，分别加冰醋酸、联苯胺无水乙醇饱和液、
3%过氧化氢溶液，立即出现翠蓝色为阳性反
应。
5.1.2
种属试验
—
环状沉淀试验
5.1.2.1
试剂
a
）
抗人血红蛋白血清或抗人血清；
b
）
生理盐水。
5.1.2.2
方法
取少量血痕检材，滴入适量生理盐水制成浸出液。取试管加入抗人血红蛋白血清或 抗人血清，然后小心加入
上述浸出液，
60min
内两液界面间出现白色沉淀环者为阳 性。
5.1.3
种属试验
—
对流免疫电泳法
5.1.3.1
试剂
a
）
巴比妥缓冲液；
b
）
高电渗琼脂糖；
c
）
抗人血红蛋白血清或抗人血清；
d
）
双蒸馏水。
5.1.3.2
方法
取高电渗琼脂糖和巴比妥缓冲液制成琼脂溶液，取琼脂溶液平铺于载玻片上，凝固 后打两排成对的孔。取少
量血痕检材，滴入适量双蒸馏水或巴比妥缓冲液制成浸出液，加入上述琼脂板负 极侧孔内，在琼脂板正极侧
孔内加入抗人血红蛋白血清或抗人血清，电泳
30min
～
40min
。电泳完毕后在黑色背景上方，通过斜光照射，
观察两孔间形成的抗原－抗 体复合物的白色沉淀线，有白色沉淀线者为阳性。
5.1.4
种属试验
—
金标试纸检验法
试剂和方法以说明书为准。
5.2
精斑检验
5.2.1
预试验
—
酸性磷酸酶试验
5.2.1.1
试剂
a
）
碳酸钙
b-
萘酯；
b
）
1-
氯化重氮蒽醌；
c
）
缓冲液：氯化钠
、冰醋酸、醋酸钠。
5.2.1.2
方法
取适量碳酸钙
b-
萘酯和
1-
氯化重氮蒽醌溶 于缓冲液制成检测试剂，取少量可疑斑迹置白瓷板凹内，滴加上述
试剂，如检材确为精斑，在
3 0s
内即可见橘红色反应。
5.2.2
确证试验
—
精子检出法
5.2.2.1
试剂
a
）
1%
酸性复红溶液；
b
）
1%
美蓝溶液；
c
）
1%
盐酸；
d
）
生理盐水。
5.2.2.2
方法
取少量可疑斑迹用适量生理盐水浸泡后，
涂于载玻片上，
干燥后 分别用
1%
酸性复红溶液和
1%
美蓝溶液染色，
1%
盐酸和 清水洗涤，干燥后镜检。精子头部被染成红色，而尾部被染成蓝色。
5.2.3
确证试验
—
金标试纸检验法
试剂和方法以说明书为准。
5.3
唾液斑检验
5.3.1
淀粉酶试验
5.3.1.1
试剂
a
）
0.01%
淀粉溶液；
b
）
碘－碘化钾溶液；
5.2.2.2
方法
取少量可疑斑迹加适量
0.01%
淀粉溶液，
37℃温箱
30min
，
加碘－碘化钾溶液，
呈淡黄色和无色时为阳性反应，
呈蓝色则为阴性。
6
DNA
提取
6.1
有机溶剂法
6.1.1
器材和试剂
a
）
高速离心机；
b
）
水浴或干浴；
c
）
移液器
d
）
细胞溶解缓冲液（
CLB
）： 蔗糖，
MgCl2
，
Tris- HCl
，
TritonX-100
；
e
）
蛋白溶解缓冲液（
PLB
）：
NaCl
，
EDTA- Na2
；
f
）
DNA
提取缓冲液：
Tris-HCl
、< br>EDTA
、
NaCl
、
SDS
、
DTT
；< br>
g
）
TNE
缓冲液：
Tris- HCl
、
EDTA
、
NaCl
；
h
）
TE
缓冲液：
Tris- HCl
、
EDTA
；
i
）
5×
精子提取液：
Tris-HCl
、EDTA
、
NaCl
、
SDS
、
DTT
；
j
）
纯化试剂；
k
）
CentriconTM-100
；
l
）
SDS
；
m
）
DTT
；
n
）
饱和酚和氯仿；
o
）
无水乙醇和
70%
乙醇溶液；
p
）
NaCl
或
NaAc
；
q
）
蛋白酶
K
。
6.1.2
方法
6.1.2.1
血液
a
）
取适量血液加入等体积细胞溶解缓冲液，混匀至透明；
b
）
离心后去上清液，沉淀中加入蛋白溶解缓冲液匀浆；
c
）
加入
SDS
和蛋白酶
K
，
37
℃消化
4h
以上；
d
）
加入等体积的酚、酚和氯仿
(1:1
混合
)
、氯仿各提取一次后，加
1/10
体积的
NaCl< br>或
NaAc
溶液
和
2.5
倍体积的冷无水乙醇混匀，得到团状 的
DNA
沉淀；
e
）
离心去上清液，沉淀中加入
70%
乙醇混匀；
f
）
离心去上清液，晾干后加入
TE
缓冲液备用。
6.1.2.2
混合斑
a
）
剪碎带有精子的检材，加入适量
TNE
缓冲液，
37
℃保温
0.5h
～
1h
， 加入
SDS
和蛋白酶
K
，
3
7
℃保温< br>1h
～
2h
消化女性上皮细胞；
b
）
底部带孔离心管离心分离去除载体，并去除上清液，沉淀物用
TNE< br>洗涤离心数次；
c
）
沉淀物内加入
5×
精子提取液、蛋白酶
K< br>，置
37
℃消化
3h
～
4h
；
d
）
以下同
6.1. 2.1d
）、
e
）、
f
）。
6.1.2.3
组织
a
）
取少量组织
(
脑、肌肉等
)
加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆；
b
）
加入
SDS
和蛋白酶
K
，
37
℃消化
4h
～
6h
。
c
）
以下同
6.1.2.1d
）、
e
）、
f
）。
6.1.2.4
毛干
a
）
将毛干剪成
3mm
～
5mm长，无水乙醇、水、无水乙醇各冲洗一次，晾干后加入
DTT
、
SDS
、 蛋
白酶
K
、蛋白溶解缓冲液，
37
℃消化至完全溶解；
b
）
加入等体积的酚、酚∶氯仿（
1
∶
1
混合）、氯仿各抽提一次，加入
1/10
体积
的
Na Cl
或
NaAc
溶液
和
2.5
倍无水乙醇，混合后
-20
℃冷冻
1h
以上；
c
）
离心去上清液，沉淀中加入
70%
乙醇混匀；
d
）
离心去上清液，晾干后加入
TE
缓冲液备用。
6.1.2.5
骨和牙齿
a
）
以手术刀刮净骨骼和牙齿表面垢物，用温热蒸馏 水冲洗两次，紫外光照射
1h
。再用锤子将牙齿
砸成粉末和用电钻取出骨松质，并将其 用研磨器进一步磨碎；
b
）
取适量骨或牙齿粉末，加入
DNA
提取缓冲液、蛋白酶
K
，于
37
℃消化过夜；
c
）
酚和氯仿提取，
提取液置
CentriconTM
-100
中离心浓缩后，
加
1/10
体积的
NaCl
和
2.5
倍无水乙
醇
-20
℃冰箱过夜；
d
）
离心去上清液，晾干加入
TE
缓冲液溶解后纯化，纯化试剂和方法以说明书为准。
6.2
Chelex
法
6.2.1
器材和试剂
a
）
高速离心机；
b
）
水浴或干浴；
c
）
移液器；
d
）
Chelex-100
溶液；
e
）
TNE
缓冲液
f
）
蛋白酶
K
溶液；
g
）
SDS
；
h
）
DTT
溶液；
i
）
双蒸馏水。
6.2.2
方法
6.2.2.1
血液和血痕
a
）
取少量血液或血痕加入适量双蒸馏水，室温
30min
；
b
）
离心后去上清液，沉淀中 加入
Chelex-100
，
56
℃消化
30min
；
c
）
煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.2.2.2
混合斑
a
）
剪碎带有精子的检材，加入适量
TNE
缓冲液，
37
℃ 保温
0.5h
～
1h
，加入
SDS
和蛋白酶
K，
3
7
℃保温
1h
～
2h
消化女性 上皮细胞；
b
）
底部带孔离心管离心分离去除载体，并去除上清液，沉淀物用
TNE
离心洗涤数次；< br>
c
）
沉淀 物内加入
Chelex-100
溶液、蛋白酶
K
和
DTT
溶 液，置
56
℃消化
1h
～
2h
；
d
）煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.2.2.3
组织
a
）
取少量组织< br>(
脑、肌肉等
)
加入适量蛋白溶解缓冲液进行匀浆；
b
）
加入
Chelex-100
、蛋白酶
K
，
56
℃消化
2h
～
3h
；
c
）
煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.2.2.4
唾液斑
a
）
信封和邮票用灭菌的双蒸 水润湿的棉签涂抹信封封口处和邮票背面，
烟蒂直接剪取外层纸，
剪碎
后加入
Chelex-100
、蛋白酶
K
溶液，
56
℃消化
1.5 h
；
b
）
煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.2.2.5
毛发
a
）
毛根剪取毛发的毛根部分
5mm
～
10mm
，毛干则剪成
3mm
～
5mm< br>长，无水乙醇、水、无水乙醇
各冲洗一次，晾干后加入
Chelex-100
、蛋白酶
K
、
DTT
溶液，
56
℃消化至完全溶解；
b
）
煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.2.2.6
骨和牙齿
a
）
研碎的牙髓或骨髓，加入
Chelex-100
、蛋白酶
K
溶液，
56
℃消化过夜；
b
）
煮沸
8min
，离心后
4
℃冰箱内备用。
6.3
硅珠法
6.3.1
器材和试剂
a
）
高速离心机；
b
）
水浴或干浴；
c
）
移液器；
d
）
吸附液：硫氰酸胍、
Tris- HCl
、
EDTA
、
Triton
X-100
；
e
）
漂洗液：硫氰酸胍、
Tris-HCl
；
f
）
硅珠悬液：二氧化硅；
g
）
TES
缓冲液：
Tris
、
NaCl
、
EDTA
；
h
）
十二烷基肌氨酸钠；
i
）
SDS
；
j
）
DTT
；
k
）
蛋白酶
K
；
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