大鼠类风湿性关节炎药效学实验的检测指标及方法

2021年2月28日发(作者：顶到子宫是什么感觉)
大鼠类风湿性关节炎药效学指标及检测方法

孙玉亮

池建淮

万毅

余炜

孙世红

侯杰

（安徽中医学院，安徽

合肥
230038
）

安徽省教育厅自然科学自筹重点项目《艾灸各组分对类风湿性关节炎 大鼠治疗作用及可能机制研究》项目
编号：
100408
的发表文章

摘

要：
类风湿性关节炎（
rheumatoid
ar thritis
，
RA
）是一种以关节滑膜炎、破坏性关节病变为主要特征的慢性、进 行性、
侵袭性自身免疫性疾病，
致畸、
致残率极高且大多数患者反复发作。
目 前，
改善临床症状的抗风湿药是治疗
RA
的主要手段，
但由于传统抗风湿药的 不良反应较大，而生物制剂价格昂贵，因而患者长期服用依从性差，不利于疾病控制。因此研制开发
有效 、
不良反应小的抗风湿药物势在必行。
研究并建立合理有效的
RA
动物模型是 研制开发有效治疗药物和制订有效治疗措
施的关键，而正确的检测也能准确地反映出药物的疗效。因此以
Wistar
大鼠为试验动物，对其进行免疫，从关节炎指数评
定、血清学、病理学和 影像学检测等方面进行综合评价，从而测评抗风湿药物药效。

关键词：
类风湿性关节 炎；一般状态观察；关节肿胀程度；免疫学检测；病理学检测；影像学检测

中图分类号：
R965.2





文献标志码：
A





文章编号：
1674 - 6376 (2012) 02 - 0
–
0
Testing indexes and methods in pharmacodynamics experiment

of rheumatoid arthritis with rats
SUN Yu-liang,CHI Jian- huai,Wan Yi,Y
u Wei, SUN Shi-hong,Hou Jie
Anhui University of Traditional Chinese Medicine, Hefei
230038,
China
Abstract:
Rheumatoid arthritis
(RA) is a chronic, progressive, and
aggressive autoimmune disease, the main characters of
which
include
joint synovial inflammation
and destructive arthropathy. RA
is
teratogenic and most of the patients are
with high morbidity
repeated
attacks
in
the
duration of
symptoms.
At
present,
medicine
to
improve
the
clinical
symptoms of
rheumatism
is
the
main
treatment
for
RA.
But
because
of
the
side
effects
of
traditional
medicine
and
the
cost
of
biological
agents,
patients
have
poor
compliance in long-term use and there are difficulties in disease control. Therefore it is imperative to develop effective antirheumatic
agents, with
small side effects. To
study and establish an effective rheumatoid arthritis animal model is the key to develop effective
drugs and make effective treatment measures. Appropriate testing also could reflect the therapeutic efficacy of drugs accurately. So
Wistar rats on the immune were used as test animals, and arthritis index evaluation, serologic, pathologic, and iconographic detection
were carried out so as to evaluate the potency of antirheumatic agents.
Key words:
rheumatoid arthritis (RA); general state observation; joint swelling degree; immunological characteristics; pathology
testing; Imaging detection

类风湿性关节炎（
rheumatoid arthritis
，
RA
）是
一种以关节滑膜炎为特征，以慢性多发性关节炎为
主要临床表现的全身免疫性疾病，能导 致晚期关节
畸形、功能活动障碍，最终导致不同程度的残疾，
甚至影响心、肾、脊椎功能，是主 要的致残性疾病
之一，严重影响人类健康
[1-2]
。因此，研制有效、不
良 反应小的药物刻不容缓。而正确的检测指标及方
法对评定药物的疗效有着举足轻重的作用。

1


一般状态观察



正常大鼠精神 状态良好，能正常觅食、饮水，
体质量稳定，被毛光泽，行为活跃。而免疫后的大
鼠精神萎靡、 倦怠，进食减少，体质量减轻，毛发
失去光泽，
活跃度降低。
因此，
在进行药 物治疗后，
可以通过对大鼠状态的观察，对药物的作用效果进
行初步判断。

2


关节肿胀程度的评价

免疫后的大鼠因病情的不同变 化，会出现足跖
部的肿胀。根据有关关节炎实验动物研究的文献报
道
[3]
， 多数采用关节炎指数评定或用游标卡尺测量









































收稿日期：
2012-01-11
足跖部肿胀度作为评价关节炎肿胀程度的依据。前

作者简介：
孙玉亮，硕士研究生。
Tel:

E-mail: sunyuliang2004@

者的评价标准为
5
级评分法：
0
分，无关节炎；
1
分，个别足趾发红、肿胀；
2
分，大部分足趾及足
底肿胀；
3
分，
踝关节及以下肿胀；
4
分，
肿胀累 及
踝关节以上且不能负重。后者用游标卡尺测量实验
动物足跖部肿胀度，分别测量
3< br>次，取平均值。因
此，可以通过对大鼠进行关节肿胀程度的评定，来
判断大鼠的预后状况 ，进而进行药效评定。

3


免疫学检测

随机选取大鼠，
ip
给予
10%
水合氯醛
（
3 mL/kg
）
麻醉，断颈处死，迅速腹股沟动脉取血，于
3
000
r/min
离心
15
min
后，取上清液，采用酶联免疫吸
附（
ELISA
）法检测抗体
[4]
。

3.1


自身抗体

RA
患者血清中可出现多种自身抗体。除传统
的类风湿因子外，近年来又发现了对
RA
诊断及研
究均有意义的多种自身抗体
[5]
，包括抗核周因子、
抗角蛋白抗体及抗
RA33/36
抗体等。
对这些抗体的
检测可以更好地反映大鼠的预后情况及药物的疗
效。

3.1.1


类风湿因子
（
RF
）


1912
年发现
RA
患者血
清中含有
RF
，
这对该病的诊断和发病机制的研究具
有重要意义，但
RF
并不是一项足以 令人满意的诊
断指标，因为
RF
在
RA
患者中的检出率不高，特异性较低，
在早期往往呈阴性，
RF
阳性也可见于慢
性感染、其他结缔组 织疾病和正常的老年人。近年
来随着各种新的检测方法相继出现，检出率不断提
高。
R F
可分为
IgM
、
IgA
、
IgG
及
Ig E 4
种类型，
其
中
IgM
、
IgA
易于检测，对
RA
诊断有较好的参考
价值
[6]
。

3.1.2


抗核周因子（
APF
）


RA
患者中
APF
阳性
率为
48.6%
～
86.0%
，
血清滴度亦远高于其他结缔组
织病。该抗体诊断
RA
的 特异性为
72.7%
～
90%
。
文献中该抗体阳性率的差异可能与底 物制作技术、
保存条件及阳性标准的设定有关。
APF
的阳性率可
高于
RF
。
大约
l/3
的
RF
阴性的
RA
患 者可检出
APF
。
因此，
APF
测定在一定的程度上可弥补
RF
的不足。
研究证明，
APF
可出现于
RA
的早期阶段，
而
HLA-
DR4/DRI
阳性的
RA
患者有较高的APF
阳性率。

3.1.3


抗角蛋白抗体
（
AKA
）


在
RA
患者中，
AKA


的阳性率为
6 0%
～
73%
。
其特异性达
87%
～
95%
[7]
。
AKA
可见于早期
RA
患者，发病
1
年 内，
38%
的患
者该抗体为阳性。多数研究认为，同时检查
AKA
与
APF
可提高对
RA
的诊断水平。
近几年国内已有
不少单位 开展了这项工作。

3.1.4


抗
SA
抗体


抗
SA
抗体阳性率达68.4%
[8]
。
SA
抗体对
RA
诊断的特异性为< br>78%
～
97%
。
在发病
1
年内的早期
RA
患者，
抗
SA
抗体的阳性率达
29%
。
在血清RF
阴性的
RA
患者中，
抗
SA
抗体阳性率为
27%
。

3.1.5


抗Ⅱ型胶原抗体
（
anti collagen type
Ⅱ）


Ⅱ
型胶原是关节软骨的主要成分，
63%
的
RA
患者的
天然Ⅱ型胶原抗体以
IgG
型抗体为主
[9]
。Ⅱ型胶原抗体对于
RA
的诊断特异性可达
97%
，且在早期类
风湿患者中 的阳性率高于晚期
RA
患者，而且有助
于
RA
的早期诊断。

3.2


急性时相反应物指标

3.2.1


C-
反应蛋白


C-
反应蛋白是一种能很好反 映
RA
病情的指标。
C-
反应蛋白与病情活动指数、晨
僵时间、握力 、关节疼痛及肿胀指数、血沉和血红
蛋白水平密切相关。病情缓解时
C-
反应蛋白下降 、
反之则上升。

3.2.2


血沉


是一种操作简便、重复性好的急性时
相反应指标。
一般说来，
血沉与
RA
的活动性有关。
病情加重则血沉增快，而病情缓解时血沉可恢复至
正常。应当指出 ，血沉只是反映病情的指标之一，
并受到多种因素的影响。
而且，
约有
5%< br>的
RA
患者
在病情活动时血沉并不增快。

因此，判断
RA
活动程度应以临床症状和体征
为主，血沉及
C-
反应蛋白等作为参考指 标
[10]
。

3.3


细胞免疫功能的检测

3.3.1


淋巴细胞亚群


近些年研究结果表明，
RA
除了体液免疫 异常外，还有明显的细胞免疫异常，
细胞免疫的调节异常是本病的关键，也已成为
RA
发病机制研究的重点。
CD3
+
即为总
T
淋巴细胞，
可分为两个主要亚群：
CD4
+
和
CD8
+
细胞。
CD4
+
为辅
助
/
诱导细胞（
Th/Ti
），具有辅助
T
细胞转变为效应
细胞，
B
细胞生成抗体和巨噬细胞 活化等功能，起
辅助、诱导细胞及体液免疫的作用；
CD8
+
为抑制
/