(完整版)细菌培养技术

2021年2月27日发(作者：云浮市人民医院)
第二节

细菌培养
检测技术




节概述



细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。
大多数细菌均可用人工方法培养，
只有将细菌

培养出来才能对它进行研究和鉴定




知识点导航






一
.
培养基的种类



培养基（
culture medium
）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养
基
< br>能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、
选

择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。



（一）基础培养基




只含有细菌生长所需的最基本营 养成分，
应用最广泛，
为制备多种培养基的基础，
常见的有
肉

汤培养基、琼脂培养基。



（二）营养培养基




在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物， 可供营养要求较高的
细

菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。



（三）选择培养基



利用不同种类细菌对化学物质的 敏感性不同而制成，
使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长
的

培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，
有利于目的菌的检出和识
别< br>
。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。



（四）鉴别培养基




培养基中加有某些特 定成分，如糖、醇类和指示剂等，
用于检查细菌的各种生化反应，
以资
鉴

别和鉴定细菌。



（五）厌氧菌用培养基




专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，
故需在培养基中加入半胱氨酸、< br>硫乙醇酸钠等还原剂，

降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。



（六）特殊培养基



为某些需要在特殊条件下才能生 长的
细菌培养
之用。
如高渗盐增菌培养基、
高渗糖增菌培养

基、改良

Kagan
氏培养基等。



二
.
培养基的制备



制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整

pH
、过滤、分装、灭菌及检
定和

保存。



三
.
细菌检验室的注意事项及无菌技术


< br>细菌培养
必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，
即无菌操作。
细菌检 验室的注意
事

项如下：



1
．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。



2
．用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。



3
．从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭 前，均要在火焰上
通过

2
～
3
次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。



4
．如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用< br>3
％来苏
或
5
％

石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡
30
分种。




5
．工作完毕后，用紫外光灯照射
30
分钟，或用
3％来苏擦拭台面，并清洗双手。




四、接种环和接种针使用



接种环和接种针由三部分组成，即环 （针）部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种
针

通常选用电热
（镍 ）
丝，
环的直径随使用目的而不同，
一般多为
2
～
4mm< br>，
环和针的长度为
40
～

50mm
。



接种环
（针）
使用前后均应进行灭菌处理，
将接种环< br>（针）
末端直立火焰中，
烧红镍丝部分，

再使接种环
（针）
金属柄旋转通过火焰
3
次灭菌，
冷却后用以取菌或待试标本。
使用接 种环
（针）
完

毕后立即将染菌的镍丝部分于还原焰（内焰）中加热，烤干环 （针）端附着的细菌或标本，以免
环

（针）上残余的细菌或标本因突受高热，爆烈四 溅，而污染环境和导致传染危险。然后再移于氧
化

焰（外焰）中烧红灭菌，最后将金 属柄部分往复在火焰中通过
3
次。用完后的接种环（针）
，应
立即

搁置于架上，切勿随手弃置，以免灼焦台面或其他物件。




五、接种操作区



为避免在接种过程中污染环境以及空气中的细 菌污染培养物，
接种均应在接种罩或无菌室内
进

行，此外细菌学实验室所必需的设备还包括无菌工作台、生物安全柜和生物安全实验室。



（一）接种罩

接种罩的式样很多，可用木框和玻璃制成，亦有用有机玻璃制成。接种罩在
用

前先以
3
％石炭酸或来苏轻拭，内需装有紫外线杀菌灯，用前可先行照射，以保证罩内无尘埃 和
细

菌。操作结束后，应立即清理内部，并作罩内消毒处理。



（二）无菌工作台

又称超净工作台（
super clean bench
）
，目前多采用垂直层流的气流形

式。
通过变速离心风 机将负压箱内经过预滤器过滤的空气压入静压箱，
再经高效过滤器进行二级
过

滤，
从出风面吹出的洁净气流，
以一定的和均匀的断面风速通过工作区时，
将尘埃颗 粒和微生物
颗

粒带走，
从而形成无尘无菌的工作环境。
使用时应提 前
50
分钟打开紫外线杀菌灯，
30
分钟后关
闭并