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关于肿瘤细胞株的选择，确实是一个很麻烦的问题，各类文献中提到过的细胞株有很多，但是一般而言， 我觉得，对于
我们做裸鼠肿瘤模型，细胞株的选择应该考虑一下几个方面：
1. < br>国际公认度，虽然
SFDA
的指导原则上表示只要是建株细胞株均可以，但是一般来说， 还是应该尽量考虑国际上比
较公认的细胞株。
2.
体内生长情况，很多细 胞株，在文献中有很高的出镜率，但是实际上，基本都是从体外开始有名，所以很多人就硬生
生的往体内 套，结果就是吃力不讨好，比如楼主提到的
A549
，还有
MCF-7
，都是 很有名气的细胞株，但是在体内却不
是一个好的试验对象，成瘤率低，生长慢，均一度差。现在国内的很 多研发单位，特别是一些公司的领导们，缺乏这方
面的认识，动不动就把这些著名的细胞株挂在嘴边，硬 压着一线的研究人员去花功夫做这些细胞株，作的不好，就怀疑
大家的水平如何如何的，奶奶的，对此非 常生气！
3.
药物的敏感性，
这一点常常被大家忽视，
大部分的 裸鼠肿瘤模型都是为抗肿瘤药物的筛选以及研究服务的，
但是常常
大家只考虑了这个细胞株是不 是好做，但是没有考虑到细胞株本身对于药物的敏感性，比如
Lovo
细胞，国际公认度也还可以，体内生长情况也很棒，但是对于药物的敏感性不佳，大部分的常规化疗药物到了它这里，抑瘤率都会 下降，显
而易见，对于抗肿瘤药物的筛选来说，它不是一个好的选择。
另 外说一点，体内与体外的关系，现在做体内的人，常常被体外的人牵着鼻子走，体外做出来什么什么细胞株敏感， 体
内的人就得吭哧吭哧的去做这个，但是却死活做不好，其实，现在我和一些老前辈们的观点是，体内和 体外应该协调好
细胞株的选择问题，体外的人手上有大把的细胞株可以选择，如果，体内的人不去和他们 协调，那么将永远被牵着鼻子
走，受累还不讨好，应该大家坐下来，一起选择
20~30
种细胞株作为常规的筛选细胞株，这就足够了，细胞株选择的时
候考虑好方向（胃癌、肝癌、肺癌什么 的）
、靶点（
EGF
、
vEGF
等等）
，不能漫无边际的抓 着哪个体内就的做哪个，谁
也没有这个本事啊。
以下给出一些细胞株供大家参考：
头颈部肿瘤
没有特 别好的细胞株，
Hep2
（喉癌）
、
CNE
（鼻咽癌）凑活，比较慢 ，但是可以接受。
肺癌
不要和我提什么
A549，不好伺候，
NCI-H460
（大细胞肺癌）还不错，生长速度快，成瘤率好，但是技术 不好的话，均
一度会差一些，水平过关的话，开始试验的时候
SD
应该为平均值的1/3
，对药物很敏感，特别是紫杉醇，非常敏感。
SPC-A-1
（ 肺腺癌）
，马马虎虎过得去，速度不是很快，但是也还能接受。
胃癌
MNK-45
，日本细胞株，公认度也可以，比较好。
BGC-823
，很好的公认度，生长有些慢。
食道癌
Eca-109
，我们找不到其他的东西，只能用它，一般般，有点不好伺候。
前列腺癌
PC-3
、
DU-145
，都是不错的细胞株，用它们没错的。
结肠癌
HT-29
吧，生长还可以，
Lovo
对药物的敏感性差了点。
肝癌
这个是比较头痛的一个领域，
Bel-7402
，
SMMC7721
只能说凑活，还有国内自己建株的
QGY
生长特性不错，但 是公认
度差了点。
白血病
我自己都没有做出来过，嘿 嘿，
K562
和
HL60
都不好整。
表皮癌
A431
，这家伙，棒极了，在我手上，每次试验只需要淘汰一两只 ，剩下的
SD
小于平均值的
1/4
，我很喜欢它，主要是
EGFR< br>高表达，做这方面的药物，少不了它！
乳腺癌
不要用
MCF-7,MDA-MB-435
、
MDA-MB-468
、
Bcap-37
都不错，其中
Bcap-37
也是
EGFR
高表达。
卵巢癌
SK-ov-3
不错的。
宫颈癌
比较麻烦，
Hela
细胞株自身的生长特性就不 佳，另外安全性方面也很不好，女生勿近，我们以前做过一个
C33A
，还可
以，对药 物很敏感，生长比较慢，成瘤率也偏差，用的人也不多，但是没有办法阿。
想起来的就这些，剩下的大家补充吧。
二、
1.
裸鼠的状态
裸鼠的年龄，比如
5-7
ｗ比
9
ｗ容易成瘤，因为这时免疫系统不够强；或者如果裸鼠由于试验系统染菌而长毛或感染，则成瘤率可能会受影响
2.
细胞接种量
动物肿瘤 一般接种
2
～
600
万
/
只就
100%
成 瘤，而人癌则需要
1000
万以上才能较高的成瘤
3.
细胞状态
肿瘤细胞的活力，生长状态，是否对数生长期，有无污染也对成瘤影响很大
三、接种量
要查文献来确定接种量，在找不到任何相关资料的情况下，最高就用到
1*107/0.2ml/site,
再高也没有意义了。如果你的
细胞很小，
1*107/0.1ml
也可以操作，不至于很粘稠，那么最好是
1*107/0.1ml/ site
。查文献看他们的构建条件是什么样
的，比如培养条件，接种量，接种位置什么的，是 不是一定要用雌性鼠等等。
有的瘤株也有可能很容易成瘤，而且生长速 度很快。建议用几只动物试试不同的接种浓度，万一能够长出来，而且还
长得很快，那你就要根据情况选 择一个合适的浓度了。基本上一般认为比较合适的接种浓度有这么几个特征：
1.
接种后
10
到
15
天左右可以开始试验。
2.
开 始试验时可以用于试验的动物数不少于
60~70%
，而且
SD
不大于平均值 的
1/3
左
右。
3.
开始试验三、四周后肿瘤重量大于
1 g
，并且没有溃烂。当然，这些条件都是锦上添花的东西，如果以
1*107/site
都勉勉强强长出肿瘤，那么就不必过多的去考虑它了。
接种部位
接种 部位
:
腋窝中部外侧皮下为好。
皮下肿瘤模型中，想要成瘤率高就接种在腋下。接种时 由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位
进针，要保证与接种点的距离小于针头的长度，向头部方穿行，绝对不能刺 破皮肤或者刺破肌肉层，当针头到达接种位
点时注射，退出针头，这样操作的目的并不完全是避免漏液， 其实熟练后，不需要皮下穿行也不会漏液，主要是避免污
染，进针点还有少量污染的可能性的，
针头在皮下穿行一段后，接种点离进针点较远，最大限度减少污染的可能
。
如果是用 于正式实验，
那么一只老鼠就只能接种一个位点，
不可以接种多个位点用于保证可
用的 模型数。
因为在有些情况下，
一个老鼠身上有多于一个肿瘤的情况下，
会有相互影响的
可能，
无论这几个肿瘤相距有多远。
要是想多打几个部位做做预试验，
倒也不 是不可以，但
是我觉得，基本上没有什么必要。
皮肤不用绷得太紧，
平 展就可以了，
另外接种的时候进针点很靠下，
针头在皮下走一段再注
射，速度不要太快 。
注射前针头稍微动一动，
能动就说明在皮下，
否则可能在皮内或者肌肉
内。
一般来说都是有鼓包的但是要是你接种位置太深入腋窝，
你是看不到鼓包的。
主要靠针
头稍微动一动来判断。
是否应用免疫抑制剂
裸鼠皮下种瘤后 ，可以通过应用免疫抑制剂，比如环磷酰胺（
2mg
每只，打两天）来加速瘤
体的生长 ，
当然我知道裸鼠是
T
免疫缺陷动物，
但是人家说的
CTX
可以进一步抑制裸鼠的体
液免疫和
NK
细胞杀伤的保护作用，可以加快瘤子的生长，这 样造模的周期很短，也可以进
行人为的控制，不知道这个观点是不是有道理，实践中是不是真有人这么做 呢？
楼上说的文献中也有报道，
而且还有预先用放射照射抑制动物免疫功能再接种 的方法，
但是
一般常规应用中大多数时候不推荐这么做。
另外还有一个问题应该被考虑 到，
大家现在都在
琢磨着怎么让肿瘤出瘤的更快，
造模周期更短，
但是如果人 为的把肿瘤生长加速，
其实对实
验并不好。
因为造模周期短，很可能生长速度也会被加 快，肿瘤可能很快就溃烂了，这样就
不得不被迫中止实验，
而用药却没有用到足够的时间，药效还没有发挥出来就结束了，
这样
是很不利的。
所以一般情况下，
应该 尽量的复合这个瘤株本身的生长特性，
不应该过多地去
加以人为的干扰。
是否用手术标本荷瘤
如果是药效试验，不建议用手术标本，因为
SFDA
的临床前研究指导原则上明确指出要用建
株的肿瘤株进行试验，因为用手术标本的试验可重复性 太差，你这个标本万一没有保存好，
断掉了，
你自己都很难重复出上次的试验结果。
国 外的文献上看到的却很少有人用手术标本
构建模型进行试验。取材的部位：肿瘤生长活跃，状态良好，结 缔组织比较少的地方。运送
途径：无菌、冰浴保温，无菌培养液浸泡，时间不能超过
1
个小时。最好一个小时内就能够
接种到动物体内。接种部位：腋下。另外，手术标本还有一个风险：你不 能保证取得的标本
一定能够顺利地成瘤并且用于试验。
注意事项
A
裸鼠的周龄
,B
肿瘤细胞
:
何种肿瘤
,
接种 细胞的数量
(
用对数生长期的
,
活力高的
)
记数要准
确
,C
接种方式
:
注意不要漏液
,
否则会损失细胞数量< br>D
饲养环境
:
要求是
SPF
条件
具体操作
1.
能不能成瘤，首先要考虑你的肿瘤细胞系能否成瘤，其次关 键是你的肿瘤细胞数，一般肿
瘤细胞存活力还是蛮高的，所以你重点要考虑细胞数的问题，但最高不要超 过
1*107
。
2.
接种时间，最好在
1
小时 之内完成。但在我实际操作过程中，裸鼠的数量又多，
1
小时之
内根本做不完的，所以 你可以预先将细胞放在冰盒里暂为保存。效果还是不错的。
3.
成瘤时间，每个肿 瘤细胞不太一样，细胞数合适，一般一周左右应该能出来了；另外，如
果你是打皮下，
你要考虑 是否有打到深层组织，
比如肌肉，
那即使成瘤了，
也不大好摸出来。
腹腔注射
1
、腹腔注射进针的位置在腹中线与小鼠两后肢上沿连交叉以下的位置。
2
、腹腔注射很少会打到肠管，因为肠子在碰到硬物时会缩起来，当然前提是你的进针不是
特别 深，如果你的整个针头都扎入了腹腔，那么肠子是无处可躲了。
3
、腹腔注射进针 后，你可以将针头左右摆动一下，如果是正确的，这时会有一种很自由无
障碍的感觉，进针角度撑握在小 于
45
度，针头进入长度不超过
3
厘米左右。
用大、小 白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹
部刺入皮下，使针头向 前推
0.5
～
1.0cm
，再以
45
度角穿过腹肌，固定 针头，缓缓注入药液
（图
2-5
）
，为避免伤及内脏，可使动物处于头低位， 使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，
进针部位为下腹部的腹白线离开
1cm
处
肿瘤倍增时间
肿瘤动物实验模型肿瘤的倍增时间（
doubling time
）
，应该是在瘤体积
100
－
800
之间计算，< br>但是一组动物有
10
只，
每周测量
2
次瘤体积，
如果 我想计算从
200
倍增到
400
的时间的话，
10
只动物不 会在我测量体积的时候正好到
200
或
400
，
那么，
在计 算的时候，
具体应该怎么
做？
Geddes
等
[29]
将结节倍增时间的计算公式表示为：
DT =
（
ln 2
△
t
）
/ln
（
V2/V1
）
，
V1
、
V2
分
别是前后两次测量的 体积，△
t
是两次测量的时间间隔
你的问题有歧义，我觉得可以有几下几种理解：
1.
测量的时候，对于某 个老鼠来说，第一次可能测出来的体积是
189.26
（不是正好
200
）< br>，
第二次是
415.31
（不是正好
400
）
，对于 其他的动物都有这样的问题，
2.
对于十只老鼠来说，
测量的时候，< br>可能
1
号老鼠是
189.26
，
2
号是
31 2.57
，
3
号是
110.89......
，
这也是一种 理解，我的意见是：测量一段比较长的时间，每只老鼠可以独立计算倍增时间，
然后计算平均值，
SD
等，用统计学处理的手段。
个体差异
同一批种几十只老鼠，有的就长不出来，有的长得很大，使评价药效很困难。排除接种
悬液未摇 匀的可能后，
还有什么原因可能造成这一点？可能是是个体差异了。
其中，
老鼠年龄是一个很大的因素。本人就遇到过
2
个月的老鼠接种肿瘤以后，有的长有的不长的情况。
如果控制好试验条件，动物也比较均一的话，一般肿瘤生长都会很好的控制在一定范围的
肿瘤模型新药申报
zym145286
做的肿瘤模型实验是用于新药申报 用
,
现在有一些问题还不能校准
,
我做的是人癌
模型
,实验动物为裸鼠
. 1.
新药报批中
,
有明确的要求说肿瘤来源必须是 体内传代
3
次以上吗
?
2.
实验结束后
,
对 于取出肿瘤块的质量有没有明确的规定呢
?
还是跟其他种鼠一样
,
要求平均< br>瘤重不小于
1g
或者不大于
20%
的瘤快质量不小于
400m g,
3.
实验评价指标相对肿瘤增殖率
T/C(%),
指的是瘤体积比还是瘤质量比
?
4.
实验申报材料是否需要附属实验动物裸鼠的照片
?
若需要附属的话,
照片没有没有什么要
求怎么照的，是鼠活的时候的照片还是实验结束后处死鼠后在摆好位 置照
?
5.
申报材料中附图要求是肿瘤的生长曲线还是不同时间测量的
T/C
值对时间所做的曲线
?
还
是两个都要有呢
?
6.
实验分组分
5
组
,
空白溶剂对照组
,
药物高中低三 个剂量组
,
阳性药物有效浓度对照组
.
这样
可以吗
?
要是不可以
,
还需要怎么分呢
?
7.
实验材料中是否需要包含该实验动物血液相关指标的数值呢
?
比如:
白细胞数量
,
骨髓的影
响等等
8.
一 次实验有效后
,
是不是也需要重复实验三次
?
那三次的数据都需要包含在数据 中
吗
?? swordzjsh
具体问题回答如下：
1.
没有问题，新老原则均明确要求体内三代以上，并且不能超过
15~20
代（人肿瘤）
。
2.
新原则已经没有瘤重的指标，
只考察瘤体积，
也没有 对试验结束后的肿瘤大小有明确要求，
但是老的指导原则有这方面的要求。
3.
新的原则是指瘤体积，
老的指瘤重，
实际上在数据处理的时候一般瘤体积和瘤重的数据 都
会加入，分别计算相应的
T/C
。
4.
需要，常见的有两种：
一种是
处死后摆放并拍摄整鼠照片
，
还有一种是
剥取肿瘤后拍摄肿
瘤的照片
，还是那句话，最好都有，至少资料中放一个，另外一份备好，答辩 的时候可以随
时展示。另外，以前不允许数码拍摄，要求光学照相机，以防电脑编辑，不知道现在还有没
有类似的要求。
5.
有的人要看肿瘤生长曲线，
有的人要看T/C
的曲线，
不过一般放生长曲线的多一些，
记住，
生长曲线现在要求
RTV
，相对肿瘤体积。以前报批的时候就可以放
RTV
曲线了，现在更是< br>RTV
的天下。
6.
一般来说，
正式试验基本上就是这么设计了，< br>但是你最好有这些剂量、
疗程、
给药途径等的设计依据，
比如权威文献、
你们的预试验等材料备问。当然，
如果你的药物有
些特别的地方，那么要根据他的具体特点设 计试验。
7.
这个是锦上添花的指标，
对于药效试验来说，
没 有明确要求，
但是一定要有体重和死亡的
数据。
8.
老原则要 求重复两次，一共三次试验，新原则前几稿要求重复一次，一共三次试验，但是
最新一稿我没有看到对于 重复试验的要求，
但是作为药理研究的基本常识，
重复试验是一定
需要的，
作 为正式试验的重复试验应该把数据和结果分析都列入报告中，
重复试验之间是同
等重要的。 zym145286:
针对您的回答
,
我仍有几点不解
1.
实验结束后瘤的质量标准问题
,
您说新原则没有指标
,
那么老 原则
(
就是现在还遵循的原则
)
具体是多少呢
,
能不能说明 一下啊
? 2. T/C
标准按照体积计算的时候
,
按照的是哪个时间点的< br>体积呢
,
还是说整个测量过程的体积都要算
?
3.
还有一 个比较基本的问题
,
不要笑话我了，
呵呵
,
那个
RTV是怎样算出来的
?
是用药组数据减
去空白组数据吗
?
还是其他算 法
? 4.
正式实验中
,
每组的动物数量是多少
?6
只,
还是
10-12
只
? 5.
对给药时间有没有什么具体要求呢
,
就是说有没有上限
,
比如不可以超过一个月啊什么
的
? swordzjsh
1.
老原则的标准就是你写出来的那个。
2.
整个测量过程的体积都要算，可以用
T/C
对时间点作图的那种。实际上，不知道你有 没有
老的指导原则，
上面有一个表，
那个表里面汇总了一些试验的基本信息，
那个表里面要填增
殖率，一般是选效果最好的那一天的数据填上去。
3. RTV = Vt / V0
。
其中
V0
为分笼给药时
(
即
d0)
测量所得肿瘤体积，
Vt
为每一次测量时的肿瘤
体积。
RTV
是针对每一只小鼠计算的。
4.
对于裸鼠来说，
5
到
10
只，要根据你的药物的性质来定，如果< br>SD
较大，建议多设几只，
容易做出统计差异。
如果
SD
较小 ，
不少于
6
只，
因为要求试验过程中动物死亡率不超过
20%
，
6
只动物死了一只还可以接受，要是
5
只动物死了一只就是
20 %
了。
5.
没有具体的要求，
一般在
3
到< br>5
周，常见为三周，并且保证肿瘤长到足够的大小。如果有
特别的原因可以变化试验周期 ，但是一般都是加长而不会缩短。
实
验分组与标记
baobaogao197759:
我的实验是观察药物对
lewis
肺癌的生长的影响。
1
、实验分 为五组（模
型组、阳性对照组（
CTX
）药物大、中、小剂量组）
。我不清楚 需不需要设置阴性对照组（就
是不造模组，
）
2
、
C57
小 鼠怎样标记，有剪趾、穿耳孔的方法。但是具体的操作没有说明，
能否介绍一下。
swordzjsh
1.
不需要设
normal
组，因为肿瘤的生长和评 价非常明显，不会有干扰的可能。
2.
我一般是
剪耳号
，一只小鼠两只耳朵，
每只耳朵可以剪上侧和下侧两个位点，
你可以自己
指定组合， 比如我们是这样的：左上为一号，左下为二号，右上为三号，右下为四号，左侧
上下为五号，右侧上下为 六号，左上右上为七号，左下右下为八号
.
细胞悬浮液体
roger150 ,
在做肿瘤模型用细胞接种时
,
细胞悬浮在什么液体里面
.
有没用
matrigel
同细胞混匀
后再接种的
? < br>Swordzjsh:
一般来说，可以悬浮在相应的
无血清培养基、
PBS、
saline
中，接种效果以上三种
次第降低。
用
matri gel
是一种促进肿瘤形成生长的手段，
如果本身肿瘤生长不是特别困难不
建议用它，
但是一些比如
A549
之类的细胞株，
接种后五六十天还只有
600 ~700mm3
的肿瘤，
就可以考虑使用
matrigel
。使用
m atrigel
的时候要注意低温操作，因为室温下
mareigel
就有
可 能固化。一般是在冰浴中操作。
白血病肿瘤
,
皮下注射
or
静脉注射？
abaiabai
我的理解是，
静脉注射反应的是疾病全身播散的作用，
皮下注射便于观察瘤块大小，< br>衡量用
药效果，应该结合自己试验的目的选择注射方法
我最近刚刚实验比较 了一下静脉注射和皮下接种白血病细胞株，
从理论上说静脉接种似乎皮
下接种更接近白血病的生 物行为特点，
但是根据我的实验和以前的文献，
静脉接种小鼠的平
均生存期很短，我的 不超过
10
天，我还试验性的进行了化疗，结果几乎全死了，而皮下接
种者结果稳定。
所以选皮下还是静脉，
应该根据自己的试验目的来定，
长期的实验好像不太
适 合用静脉注射的方法。
swordzjsh
皮下或者静脉注射都可以，看你的细胞株了，也有用腹腔注射的。
小鼠的捉拿
从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起，放在笼盖（或表面粗糙的物体）上， 轻轻向后拉鼠尾，在
小鼠向前挣脱时，
用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，
无名指 、
小指和手掌心夹住背部
皮肤和尾部，
并调整好动物在手中的姿势。
这类捉拿 方法多用于灌胃以及肌肉、
腹腔和皮下
注射等。如若进行心脏采血、解剖、外科手术等实验时， 就必须要固定小鼠。使小鼠呈仰卧
位（必要时先进行麻醉）
，用橡皮筋将小鼠固定在小鼠实验板 上。如若不麻醉，则将小鼠放
人保定架里，固定好保定架的封口。
小鼠性情较温顺 ，
一般不会咬人，
比较容易抓取固定。
通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠
笼 盖或其它粗糙表面上，
在小鼠向前挣扎爬行时，
用左手拇指和食指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心、
无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，
即可将小鼠完全固定。
在一些特
殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定
,
如尾静 脉注射架或粗
的玻璃试管。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作
,
如进行解剖实 验则必须先行无痛
处死后再进行。
实验动物的编号
编号的方法很多，根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。
(
一
)
挂牌法：
将号码烙压在圆形或方形金属牌上
(
最好用铝或不锈钢的
,
它可长期使用不生锈
),
或将号码按实验 分组编号烙在栓动物颈部的皮带上，将此颈圈固定在动物颈部。该法适
用于狗等大型动物。
(
二
)
(
二
)
打号法：用刺数钳(
又称耳号钳
)
将号码打在动物耳朵上。打号前用蘸有酒精的棉球
擦净耳 朵，用耳号钳刺上号码，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。
该法适用于耳朵比较大的 兔、狗等动物。
(
三
)
针刺法：
用七号或八号针头蘸取 少量碳素墨水，
在耳部、
前后肢以及尾部等处刺入皮下，
在受刺部位留有一黑色标记。 该法适用于大小鼠、
豚鼠等。在实验动物数量少的情况下，也
可用于兔、狗等动物。
(
四
)
化学药品涂染动物被毛法：经常应用的涂染化学药品有
涂染 红
色：
0.5
％中性红或品红溶液。
涂染黄色：
3-5
％苦 味酸溶液。
涂染黑色：
煤焦油的酒精溶液。
根据实验分组编号 的需要，
可用一种化学药品涂染实验动物动物背部被毛就可以。
如果实验
动物数量较多 ，
则可以选择两种染料。
该方法对于实验周期短的实验动物较合适，
时间长了
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