病毒的鸡胚接种

2021年2月27日发(作者：周秋红)

病毒的鸡胚接种



教学目标


使学生掌握病毒的鸡胚接种方法和收获方法。

材料准备

1.
器材温箱、照蛋器、蛋架、超净工作台、
1 mL
注射器、
20
～
27
号针头、
镊子、酒精灯、灭菌吸管、灭菌滴管、灭菌青霉素瓶、铅笔、透明胶纸等。

2.
种毒新城疫病毒悬液。


3.
受精卵健康鸡群的受精卵，无母源抗体，产后
10 d
之内
5 d
最佳。

4.
其他石蜡，质量分数为
2.5%
的碘酊及质 量分数为
75%
的酒精棉球。

方法步骤



（一）鸡卵的保存、孵育及检卵

1.
保存

孵育前，保存在
4.5
～20 ℃的室温内，以
10 ℃左右最佳，最多不
能超过
10 d
。

2.
孵育

先将温箱调节温度为
37.3
～37.8 ℃，湿度
45%
～
60%
。将鸡卵孵入
后，每日翻卵
2
～
3
次。

3.
检卵

孵后第
4~6
d
，用照蛋器检查发育 情况，检出未受精及死亡鸡胚。鸡
胚的生长情况分为以下几类：

（
1
）未受精
4 ~6d
后仅见模糊的卵黄黑影，无鸡胚迹象。

（
2
）生活鸡胚
4~6
d
后可见到清晰的血管小团，内有鸡胚暗影，较大的鸡胚
可见胚动。

（
3
）濒死或死亡鸡胚

鸡胚活动呆滞或不能主动运动，血管昏暗或断折沉落。

（
4
）作标记

将待接种的鸡胚取出，在照蛋器上照视，划出气室范 围，并在鸡
胚黑影，或绒毛尿囊膜发育中心等处，按接种途径要求标出记号。



（二）各种途径的鸡胚接种方法

1.
尿囊腔接种


（
1
）接种方法

孵育
9
～
1 1
日龄的鸡胚（实图
6-20
），经照视后，划出气室
及胚胎位置，
标明胚龄及日期，
气室朝上立于卵架上。
在气室中心或远离胚胎侧
气室边缘先后用碘酊 棉球及酒精棉球消毒。以钢锥在气室的中央或侧边打一小
孔，针头沿孔垂直或稍斜插入气室，进入尿囊， 向尿囊腔内注入
0.1
～
0.3 mL
新城疫病毒悬液，拔出针头
,
用融化的石蜡封孔，直立孵化（实图
6-21
）。孵化
期间，每晚照蛋，观察 胚胎存活情况。弃去接种后
24 h
内死亡的鸡胚。









实图
6-20
鸡胚的结构






实图
6-21
尿囊腔接种

（
2
）收获方法

收获时间须视病毒的种类而定。新城疫病毒在接种后
24
～
48 h
即可收获病毒。收获前将鸡胚置于
0
～4
℃冰箱中冷藏
4 h
或过夜，使血管收缩，
以免解剖时出血。
气室朝上立于卵架上，
无菌操 作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳，
形成直径为
1.5
～
2.0
cm
的开口。
用灭菌镊子夹起并撕开气室中央的绒毛尿囊膜，
然后用吸管从破口处吸取尿囊 液，每胚可得
5
～
6
mL
，贮于无菌小瓶内，无菌检
验后，冰冻保存，做种毒或试验之用。

（
3
）消毒

将用过的镊子、注射器等放入煮沸锅消毒
5 min
，取出后擦干包好，
高压灭菌待用。卵壳、鸡胚等置于消毒液中浸泡过夜，然后弃掉。无 菌室内用紫
外线灯消毒
30 min
。

2.
卵黄囊接种法

（
1
）接种方法

选用
6
～
8
日龄鸡胚，划出气室和胚胎位置，垂直放置在固定的
卵架 上，
用碘酊及酒精棉消毒气室端，
在气室的中央打一小孔，
针头沿小孔垂直
刺 入约
3 cm
，向卵黄囊内注入
0.1
～
0.5 mL
病毒 液。拔出针头
,
用融化的石蜡封
孔，直立孵化
3
～
7 d
（实图
6-22
）。孵化期间，每晚照蛋，观察胚胎存活情况。
弃去接 种后
24 h
内死亡的鸡胚。

（
2
）收获方法

将濒死或死亡鸡胚气室部用碘酊及酒精棉消毒，直立于卵架上，
无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶 部蛋壳。
用另一无菌镊子撕开绒毛尿囊膜，
夹起
鸡胚，切断卵黄带，置于无菌双碟内。 如收获鸡胚，则除去双眼、爪及嘴，置于
无菌小瓶中保存；
如收获卵黄囊，
则用镊子将 绒毛尿囊膜与卵黄囊分开，
将后者
贮于无菌小瓶中。收获的鸡胚或卵黄囊，经无菌检验后，放置
-
25
℃冰箱冷冻保
存。