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注意：
由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，
黑体字部分自己看一下。
由于
11-13
周为教学质量检查
周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察
一、微生物的接种技术
1
目的
1.1
学习掌握微生物的几种接种技术
1.2
建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节
2
基本原理
将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技 术称为接
种。接种的关键是严格进行无菌操作。常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3
实验材料
3.1
菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的
斜面培养物
3.2
培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏
1
号培养 基的斜面和平板
3.3
试剂：
5ml
无菌生理盐水试管
3.4
仪器与其他用品
酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4
操作步骤
4.1
斜面接种法
斜面接种法主要用于传代活化、
纯化培养、
鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上 挑
取分离的单个菌落，
或挑取斜面，
液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。< br>操作应在
无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1
准备工作
将菌种斜面培养基
(
简称菌种管)
与待接种的新鲜斜面培养基
(
简称接种管
)
持在左手拇
指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清
楚地看到两 个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面
。
4.1.2
接种环灭菌
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍 铬丝部分（环和丝）必须烧红，以
达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3
拔管塞和烧烤试管口
用右手的小指和手掌之间及无名指和小 指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，
以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4
接种环冷却和取菌
将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，
先接触无菌苔生长的培养基上，
待冷却后再从斜面
上刮取少许菌苔取出。
4.1.5
接种
接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。不同种 类微生物的接种方式各异，
具体如下：
（
1
）细菌和放线菌
由斜面培养基底部自下而上来回做 “
Z
”形密集划线，勿划破培养基。
（
2
）真菌
菌落为局限性生长的曲霉、青霉等采用上下涂布法接种。菌落为扩散性生长的
根霉、毛霉等采用 点植法接种。
4.1.6
塞管塞和接种环灭菌
接种完毕，将接种 环抽出，灼烧管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放
回原处，并塞紧棉塞。将接种管做好 标记后放入试管架，即可进行培养。
4.2
平板接种法
平板接种 法就是用接种环将菌种或用无菌吸管将定量菌液接种至平板培养基的方法，
主
要用于观察菌落特 征、分离纯化菌种和平板活菌计数。其接种方式有倾注接种、涂布接种、
划线接种和点植接种。
4.2.1
倾注平板法
（
1
）倾注平板
无菌条件下取适量菌液倾注于平皿中。
（
2
）
倒平板
将灭菌好的培养基倒入平皿，
并迅 速轻轻旋动平皿，
使培养基与菌液充分混匀。
（
3
）培养
培养基凝固后，将平板倒置于培养箱中培养。
4.2.2
涂布平板法
（
1
）倒平板
将灭菌好的培养基倒入平皿。
（
2
）
涂布平板
无菌条件下吸取菌液滴加于平板培养基表面中心位置，
左手持平皿并将皿盖
打开一缝，
右手持涂布棒将菌悬液自平板中央以同心圆方向轻轻向外涂布扩散，
使之分布均
匀，静 置
5-10min
，使菌液浸入培养基。
（
3
）培养
培养基凝固后，将平板倒置于培养箱中培养。
4.2.3
平板划线法
（
1
）倒平板
将灭菌好的培养基倒入平皿。
（
2
）平板划线
通过划线使样品在平板上形成单个菌落。
①连续划线法
用于稀释液
（见下图右）
②分区划线法
用于较浓的菌样
（本实验细菌、酵母菌、放线菌采用此方法，下图左）
注意：接种环勿划破培养基，划线不宜重叠，要疏密适中。
4.2.4
平板点植接种法
此法适用于观察霉菌的菌落特征
（见下 图）
。用接种环蘸少许无菌生理盐水，挑取斜面
上少量菌丝或孢子，以三个角三点的形式轻轻点 种于平板培养基上。接种时最好倒置平皿，
以免霉菌孢子飞扬。
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