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荧光和化学发光免疫分析方法
免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法,即利用抗原与抗体的特异性
反应,
< br>应用制备好的抗原或抗体作为试剂,以检测标本中的相应抗体或抗原。由
于免疫的特异性结合,免 疫分析方法具有很好的选择性,荧光免疫分析和化学发光
免疫分析是其中典型的两种。本文将对这两种免 疫分析方法进行详细的介绍。
一、免疫
免疫是指机 体免疫系统识别自身与异己物质,并通过免疫应答排除抗原性异
物,以维持机体生理平衡的功能。免疫是 人体的一种生理功能,人体依靠这种功能
识别“自己”和“非己”成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原 物质,或人体本身
所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等,以维持人体的健康。
特异性免疫系统,是一个专一性的免疫机制,针对一种抗原所生成的免疫淋
巴细胞(浆细胞)分泌的抗体 ,只能对同一种抗原发挥免疫功能。而对变异或其他
抗原毫无作用。
1
、抗原
1.1
抗原的定义
抗原:是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答
(
免疫原性
) < br>,并
能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质
(
免疫反应性
)
。
抗原一般为大分子物质,其分子量在
10kD
以上。
1.2
抗原的分类
完全抗原:同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原,如细菌、病毒、异种动
物血清等。
半抗原:仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性,而无免疫原
性的物质 。如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质,它们本身不具免疫原
性,但当与蛋白质大分子结合后形 成复合物,便获得了免疫原性,
1.3
抗原的性质
决定簇是指抗原分子表面的基团,它直接决定免疫学反映的特异性。
抗原 通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合,从而激活淋巴细
胞,引起免疫应答,抗原也藉此与相 应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。
因此,抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构,也是免疫反应具有特异性的
物质基础。
2
、抗体
2.1
抗体的定义
抗体:是机体受抗原刺激后,由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异
性结合的 球蛋白。
2.2
抗体的结构
抗体是机体受 抗原刺激后,由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗
原发生特异性结合的球蛋白,因其具有免疫 活性故又称作免疫球蛋白。
人免疫球蛋白有五类,分别为
IgG
、
IgA
、
IgM
、
IgD
和
IgE
。< br>
3
、抗原抗体的结合
体外抗原抗体反应又称血清学反应
第一阶段为抗原和抗体的特异性结合,需时短,几秒至几分钟,无可见现象
出现。
第二阶段,可见反应阶段,表现为凝集、沉淀、细胞溶解等,时间较长,历
时数分钟 、数小时以致数天
4
、抗原抗体结合的特点
(
1
)抗原抗体结合具有高度特异性,即一种抗原分子只能与由它刺激所产生
的抗体 结合而发生反应。抗原与抗体两者为非共价键结合,为可逆反应
(< br>2
)抗原与抗体的结合,在一定浓度范围内,只有当两者分子比例合适时,
才出现可见反 应;以沉淀反应为例,分子比例合适,沉淀物产生既快又多,体积
大。分子比例不合适,沉淀物产生少, 体积小,或不产生沉淀物。
(
3
)特异性抗原和抗体有相对应的 极性基,抗原和抗体的特异性结合,也就
是这些极性基的相互吸附。抗原和抗体结合后就由亲水性变为疏 水性,此时易受电
解质影响。如有适当浓度的电解质存在,就会使它们失去一部分负电荷而相互凝
聚,于是出现明显的凝聚或沉淀现象。若无电解质存在,则不发生可见反应。
(
4
)合适的
pH
是抗原抗体反应必要的条件之一。
pH
过高 或过低可直接影响
抗原和抗体的理化性质。
二、免疫分析
1
、定义
免疫分析法利用抗原抗体特异性结合反应检 测各种物质(药物、激素、蛋白
质、微生物等)的分析方法。
2
、分类
非标记免疫分析技术:免疫扩散、免疫电泳
标记的免疫分析技术:酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法(荧光
免疫技术 、胶体金免疫技术、发光免疫技术和铁蛋白免疫技术等)
3
、免疫标记技术
3.1
基本原理:采用荧光素、同位素或酶等示踪物质
标记抗体(或抗原)进
行抗原
-
抗体反应,通过对免疫复合物中的标记物的测定,达到对免疫反应进行监
测的目的。
3.2
主要类型:放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、化学发光免疫
技术
三、荧光免疫分析
(Fluorescence immunoassay, FIA)
1
、定义
免 疫荧光技术
(FIA)
是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性
相结合 。
FIA
以荧光素作为标记物,与已知的抗体
(
或抗原
)
结 合,但不影响其免疫
学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂,用于检测和鉴定未知的抗原。
在荧光显微镜下,可以直接观察呈现特异荧光的抗原抗体复合物及其存在部
位。
2
、分类
传统的荧光免疫分析受到散射光、样品的背 景荧光和荧光淬灭等因素的干
扰,分析灵敏度较低。在这个背景下,两种现代荧光免疫分析方法迅速发展 。荧光
偏振免疫分析法就是其中之一。它以其快速、精确和特异的优势很快便为人们广泛
接受。 时间分辨荧光免疫分析是另一种现代荧光免疫分析技术。
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本文更新与2021-02-24 04:29,由作者提供,不代表本网站立场,转载请注明出处:http://www.xapfxb.com/yuer/457178.html
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