睾丸胀疼车间菌种库的建立

2021年2月24日发(作者：产后缩阴)
对来自车间的营养琼脂平板进行分离纯化以求得纯种菌株

分离纯化

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（
Mixed culture
）。如果 在一
个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（
Pure
culture
）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯
培养的 过程称为分离纯化，方法有许多种。

１、倾注平板法

首先把微生物悬液通 过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在
40~50
°左右的营养琼脂培养基充分混 合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿
中，
待凝固之后，
把这平板倒置在恒箱中培养 。
单一细胞经过多次增殖后形成一
个菌落，
取单个菌落制成悬液，
重复上述步 骤数次，
便可得到纯培养物。
（图３，
a
）


图３

倾注平板法（
a
）涂布平板法（
b
）图解

1.
菌悬液
2.
熔化的培养基
3.
培养物
4.
无菌水

２、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，
取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固
的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀 地涂布在培养基表面
上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图３－５，
b
）

３、平板划线法

最简单的分离微生物的方法是平板划线法。
用无菌的接种环 取培养物少许在
平板上进行划线。
划线的方法很多，
常见的比较容易出现单个菌落的划 线方法有
斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图
4
）当接种环在培养基表 面
上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，
经培养，每一 个细胞长成一个菌落。（图
4
）

４、富集培养法

富集培 养法的方法和原理非常简单。
我们可以创造一些条件只让所需的微生
物生长，
在这些条 件下，
所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，
在生
长能力方面远远超过其他 微生物。
所创造的条件包括选择最适的碳源、
能源、
温
度、光、
pH
、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重
复移种，
最后富集的 菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。
如果要分离一些专
性寄生菌，
就必须把样品接 种到相应敏感宿主细胞群体中，
使其大量生长。
通过
多次重复移种便可以得到纯的寄生 菌。







图
4
平板划线分离法

1.
斜线法
2.
曲线法
3.
方格法
4.
放射法
5.
四格法


５、厌氧法

在实验室中，
为了分离某些厌氧菌，
可以利用装有原培 养基的试管作为培养
容器，
把这支试管放在沸水
0
浴中加热数分钟，
以便逐出培养基中的溶解氧。
然
后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表 面，使培养基与
空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用
N2
或
CO2取代培养基中的气体，
然后在火焰上把试管口密封。
有时为了更有效地分离某些厌氧菌，< br>可以把所分离
的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。

我们采用的是平板划线分离法，具体步骤如下

1
倒平板


2
划线

3
培养：将划线后的平板至于
34.5
度 下培养，初步筛选，此后镜检是否为单一微生物，若有
杂菌，继续分离纯化。

纯化后的菌株就可以进行菌种鉴定了