新生儿便秘症状鲜冻肉的检验程序资料

2021年2月23日发(作者：西安男科)
鲜冻肉的检验程序
编号：

一、检验产品

鲜冻猪肉、牛肉、兔肉、鹅肉、鸭肉、鸡肉

二、使用标准

GB 16869-2005
鲜、冻禽产品

GB 2707-2005
鲜
(
冻
)
畜肉卫生标准

GB 4789.1-2010
食品微生物学检验

总则

GB 4789.2-2010
食品微生物学检验

菌落总数测定

GB 4789.3-2010
食品微生物学检验

大肠菌群计数

GB 4789.17-2003
食品卫生微生物学检验

肉与肉制品检验

GB/T 5009.17-2003
食品中总汞的测定方法

GB/T 5009.44-2003
肉与肉制品卫生标准的分析方法


三、检验流程



鲜
/
冻肉类




抽取微生物检验试样

微生物检验




剩余样品检验

解冻（冻肉）




检验组织状态、色泽、

气味、淤血、硬杆毛、

异物




抽取挥发性盐基氮、
加

热肉汤、
总汞等分别检

验




报告



四、

样品的采取

1
、现场采样用品

1.1
、采样箱。

1.2
、带盖搪瓷盘。

1.3
、温度计。

1.4
、编号牌或蜡笔、纸。

2
、生肉及脏器检样：
< br>如系屠宰场宰后的畜肉，
可于开腔后，
用无菌刀采取两腿内侧肌肉
150
克
（或
劈半后采取两侧背最长肌各
150
克
)
；如系冷藏 或售卖之生肉，可用无菌刀取腿
肉或其他部位之肌肉
250
克。检样采取后，放入灭菌 容器内，立即送检；如条件
不许可时，最好不超过
3
小时，送检样时应注意冷藏，不得 加人任何防腐剂。检
样送往化检验室应立即检验或放置冰箱暂存。

3.
禽类（包括家禽和野禽）
：

鲜、
冻家禽采取整只，< br>放灭菌容器内。
带毛野禽可放清洁容器内，
立即送检。
以下处理同
2< br>。

五、菌落总数测定：
GB/T 4789.2-2010
1
、原理：

食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养 时间等）培
养后，所得每
g
（
mL
）检样中形成的微生物菌落总数。

2.
设备和材料

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1
、恒温培养箱：
36
℃±1 ℃，
30
℃±1 ℃。

2.2
、冰箱：
2
℃～
5
℃。

2.3
、恒温水浴箱：
46
℃±1 ℃。

2.4
、天平：感量为
0.1 g
。

2.5
、均质器。

2.6
、无菌吸管：
1 mL
（具
0.01 mL
刻度）、
10 mL
（具
0.1 mL
刻度）或微量移
液器及吸头。

2.7
、无菌锥形瓶：容量
250 mL
、
500 mL
。

2.8
、无菌培养皿：直径
90 mm
。

2.9
、
PH
计或
pH
比色管或精密
pH
试纸。

2.10
、放大镜或
/
和菌落计数器。

3
、培养基和试剂

3.1
、平板计数琼脂培养基：

3.1.1
、成分：

胰蛋白胨
5.0g
；酵母浸膏
2.5g
；葡萄糖
1.0g
；琼脂
15.0g
；蒸馏水
1 000 mL
；
pH 7.0±0.2。

3.1.2
制法：

将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节
pH
，分装试管或锥形瓶，
121
℃
高压灭菌
15min
。
3.2
、磷酸盐缓冲液

3.2.1
、成分：
磷酸二氢钾（
KH
2
PO
4
）
34.0g
；蒸 馏水
500mL
；
pH 7.2
。

3.2.3
、制法：

贮存液：称取
34.0g
的磷酸二氢 钾溶于
500mL
蒸馏水中，用大约
175 mL
的
1
m ol/L
氢氧化钠溶液调节
pH
，用蒸馏水稀释至
1000mL
后贮 存于冰箱。

稀释液：
取贮存液
1.25mL
，
用蒸馏水稀 释至
1000mL
，
分装于适宜容器中，
121
℃
高压灭菌
15min
。

3.3
、无菌生理盐水

3.3.1
、成分：

氯化钠
8.5g
；蒸馏水
1000mL
3.3.2
、制法“

称取
8.5
ｇ氯化钠溶于
1 000mL
蒸馏水中，
121
℃高压灭菌
15 min
。

4
、检验程序：


5
、操作步骤

5.1
、样品的稀释

5.1.1
、称取
25g
样 品置盛有
225mL
磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，
8000r/min< br>～
10000r/min
均质
1min
～
2min
， 或放入盛有
225mL
稀释液的无菌均质
袋中，用拍击式均质器拍打
1mi n
～
2min
，制成
1:10
的样品匀液。

5.1.2
、
用
1mL
无菌吸管或微量移液器吸取
1:10
样品匀液
1mL
，
沿管壁缓慢注于盛
有
9mL
稀释 液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试
管或换用
1
支无菌 吸管反复吹打使其混合均匀，制成
1:100
的样品匀液。

5.1.3
、按
5.1.2
操作程序，制备
10
倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换
用
1
次
1mL
无菌吸管或吸头。

5.1.4
、根据对样品污染 状况的估计，选择
2
个～
3
个适宜稀释度的样品匀液（液
体样品可包 括原液）
，
在进行
10
倍递增稀释时，
吸取
1mL
样品匀液于无菌平皿内，
每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取
1mL
空白稀释液加 入两个无菌平皿内作
空白对照。

5.1.5
、及时将
15mL
～
20mL
冷却至
46
℃的平板计数琼脂培养基（可放置于
46
℃
±1℃恒温水浴箱中保温）倾 注平皿，并转动平皿使其混合均匀。

5.2
、

培养
< br>5.2.1
、
待琼脂凝固后，
将平板翻转，
36
℃±1℃培养 48
h±2
h。
水产品
30
℃±1℃
培养72 h±3 h。

5.2.2
、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝 固后
的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约
4
mL
），凝固后翻转平板，按
5.2.1
条件
进行培养。

5.3
、菌落计数：

可用肉眼观察，
必要时用放大镜或菌落计数器 ，
记录稀释倍数和相应的菌落
数量。菌落计数以菌落形成单位（
colony- forming units
，
CFU
）表示。

5.3.1
、选取菌落数在
30CFU
～
300CFU
之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总
数。低于
30CFU
的平板记录具体菌落数，大于
300
CFU
的可记录为多不可计。每
个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

5. 3.2
、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落
生长的平板作为 该稀释度的菌落数；
若片状菌落不到平板的一半，
而其余一半中
菌落分布又很均匀，即 可计算半个平板后乘以
2
，代表一个平板菌落数。

5.3.3
、当 平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个
菌落计数。

6
、结果与报告

6.1
、菌落总数的计算方法。

6.1.1
、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌
落数的平 均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每
g
（
mL
）样品中菌落总数结果。

6.1.2
、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按 公式（
1
）计
算：


式中：

N
——样品中菌落数；

Σ
C
——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；

n1
——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；

n2
——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；

d
——稀释因子（第一稀释度）。

6.1.3
、若所有稀释度的平 板上菌落数均大于
300CFU
，则对稀释度最高的平板进
行计数，
其他平板 可记录为多不可计，
结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

6.1.4
、
若所有稀释度的平板菌落数均小于
30CFU
，
则应按稀释度最低的平均菌 落
数乘以稀释倍数计算。

6.1.5
、若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于
1
乘
以最低稀释倍数计算。

6.1.6
、若所有稀释度的平板菌落数 均不在
30CFU
～
300CFU
之间，其中一部分小
于
30
CFU
或大于
300CFU
时，
则以最接近
30CFU
或
300CFU
的平均菌落数乘以稀释
倍数计算。

6.2
菌落总数的报告

6.2.1
、菌落数小于
100 CFU
时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。

6.2.2
、菌落数大于或等于
100CFU
时，第
3
位 数字采用“四舍五入”原则修约后，
取前
2
位数字，后面用
0
代替位 数；也可用
10
的指数形式来表示，按“四舍五入”
原则修约后，采用两位有效数字。

6.2.3
、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。

6.2.4
、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。

6.2.5
、称重取样以
CFU/g
为单位报告，体积取样以
CFU/mL
为单 位报告。

7
、报告

稀释度

1:100
1:1000
1:10000
CFU/g
平均值

第一个样品






第二个样品





六、大肠菌群
GB

4789.3-2010
大肠菌群
MPN
计数法

1
、原理：

在一定培养条件下能发酵乳糖、
产酸产气的需氧和兼性 厌氧革兰氏阴性无芽
胞杆菌。

最可能数，
MPN
基于泊松分布的一种间接计数方法。

2
、设备和材料：

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

2.1
、恒温培养箱：
36
℃±1 ℃。

2.2
、冰箱：
2
℃～
5
℃。

2.3
、恒温水浴箱：
46
℃±1℃。

2.4
、天平：感量
0.1g
。

2.5
、均质器。

2.6
、无菌吸管：
1 mL
（具
0.01 mL
刻度）、
10 mL
（具
0.1 mL
刻度）或微量移
液器及吸头。

2.7
、无菌锥形瓶：容量
500 mL
。

2.8
、
pH
计或
pH
比色管或精密
pH
试纸。

3
、培养基和试剂

3.1
、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤

3.1.1
、成分

胰蛋白胨或胰酪胨
20.0g
；
氯化钠
5.0g
；
乳糖
5.0g
；
磷酸氢二钾
(K
2
HPO
4
)2.75
g
；
磷酸二氢钾
(K
2
HPO
4< br>)2.75g
；
月桂基硫酸钠
0.1g
；
蒸馏水
10 00mL
；
pH
6.8±0.2；

3.1.2
、制法：

将上述成分溶解于蒸馏水中，
调节
p H
，
分装到有玻璃小倒管的试管中，
每管
10mL
。
121
℃高压灭菌
15min
。

3.2
、煌绿乳糖胆盐肉汤“

3.2.1
、成分：
蛋白胨
10.0g
；乳糖
10.0g
；牛胆粉（
oxgall< br>或
oxbile
）溶液
200mL
；
0.1%
煌绿水溶液
13.3mL
；蒸馏水
800mL
；pH 7.2±0.1；

3.2.2
、制法：

将蛋白胨、乳糖溶于约< br>500mL
蒸馏水中，加入牛胆粉溶液
200mL
（将
20.0g脱
水牛胆粉溶于
200mL
蒸馏水中，调节
pH
至
7. 0
～
7.5
），用蒸馏水稀释到
975mL
，调
节
pH
，再加入
0.1%
煌绿水溶液
13.3mL
，用蒸馏水补足到< br>1000mL
，用棉花过滤后，
分装到有玻璃小倒管的试管中，每管
10mL< br>。
121
℃高压灭菌
15min
。

3.3
、磷酸盐缓冲液：

3.3.1
、成分：

磷酸二氢钾
(K
2
HPO
4
)34.0g
；蒸馏水
500mL
；
pH 7.2
。

3.3.2
、制法：

贮存液：称取
34.0g
的磷酸二氢 钾溶于
500mL
蒸馏水中，用大约
175mL
的
1
mo l/L
氢氧化钠溶液调节
pH
，用蒸馏水稀释至
1000mL
后贮存 于冰箱。

稀释液：
取贮存液
1.25mL
，
用蒸馏水稀释 至
1000mL
，
分装于适宜容器中，
121
℃
高压灭菌< br>15min
。

3.4
、无菌生理盐水
:
称取
8.5
ｇ氯化钠溶于
1 000 mL
蒸馏水中，
121
℃高压灭菌
15 min
。

3.5
、无菌
1 mol/L NaOH
：

称取
40g
氢氧化钠溶于
100 0mL
蒸馏水中，
121
℃高压灭菌
15min
。

3.6
、无菌
1 mol/L HCl
：

移取浓盐酸90mL
，用蒸馏水稀释至
1000mL
，
121
℃高压灭菌< br>15min
。

4
、检验程序：


5
、操作步骤

5.1
、样品的稀释

5.1.1
、称取
25g
样品
,
放入盛有
225mL
磷酸盐 缓冲液或生理盐水的无菌均质杯
内
,8000r/min
～
10000r/m in
均质
1min
～
2min,
或放入盛有
225mL
磷酸盐缓冲液
或生理盐水的无菌均质袋中，
用拍击式均质器拍打
1min～
2min
，
制成
1:10
的样品
匀液。
< br>5.1.2
、样品匀液的
pH
值应在
6.5
～
7.5
之间，必要时分别用
1mol/L
NaOH
或
1mol/L
HCl
调节。

5.1.3
、用
1mL
无菌吸管或微量移液器吸取
1:10
样品匀液
1mL
，沿管壁缓缓注入
9
mL
磷酸盐缓冲液或 生理盐水的无菌试管中
（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液
面），振摇试管或换用
1
支
1mL
无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成
1:100
的
样品匀液。

5.1.4
、根据对样品污染状况的估计，按上述操 作，依次制成十倍递增系列稀释
样品匀液。
每递增稀释
1
次，
换用< br>1
支
1mL
无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样
品接种完 毕，全过程不得超过
15min
。

5.2
、初发酵试验：

每个样品，
选择
3
个适宜的连续稀释度的样品匀液
（液体样品可以选 择原液）
，