如何治鸡皮肤质谱 内标等知识

2021年2月23日发(作者：瘦脸针注射)
质谱定量的原则

内标的选择

LC-MS 2009-11-01 19:44:11
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<3>
质谱定量的原则
04
——
系列讲座


内标



在做
MS
定量时应该使用内标。选择一 个合适的内标，将能减少因为样
品提取、
HPLC
进样和离子化的多样性造成的差异。 在复杂基质的分析
中，在
SRM
积分图上，在标准曲线的低端，常会见到：两个不同的 浓
度水平，会给出近乎一致的响应。只有当使用一种内标时，这两个点才
能被区分。一些研究者 试图在实验中不用内标去做标准曲线，但成功率
不高。我们在标准曲线上每个浓度水平都重复进样
3
次。没有内标的情
况下，重现性％
RSD
常常会高于
20%；而当使用内标时，
%RSD
能降
低到近
2%
。


我要如何选择一个内标
?


最好的内标是待定量的化合 物的同位素内标。同位素标记的内标将和待
测物有相似的回收率、
ESI
离子化响应， 和相似的色谱保留时间。如果
你运行的不是临床药代动力学定量，可能很难判断上述说法，因为特殊的合成一个同位素标记的内标，是非常昂贵和耗时的。


通常，如果你和一个医 学的化学家工作，他们会有一个化合物相似物
库，可以被用作内标。这些类似物，在化合物合成中被测试 ，和该化合
物性质相似可以被用户定量内标，而且更重要的是，这些类似物和该化
合物的母离子 质量有微小的差异。


尽量不要使用去甲基化
（－
14
）
或者是氧化的
（＋
16
）
的类似物作内标，
因为待测化合物 的母离子常会发生同样的代谢。


常见的做内标的类似物是氯代的化合物。氯代的化 合物类似物会和待测
化合物有相似的色谱保留时间，这是内标的一个重要特性。我们已经发
现内 标物的一个最重要的特性是它和待测化合物共流出。


我该如何使用内标？


首先
，
内标添加需在样品测试方法的开始阶段
，
典型的< br>，
应在血浆
crash
或固相萃取之前。内标应用同一浓度水平添加（包括标样 ）。内标应给
出可靠的质谱响应。应该注意的是：内标的量应添加得合适，应高于定
量限，但不 能过高，因为过高的内标响应会抑制被分析物的离子化。
“
我
应该添加多少量的内标？
”
这是一个重要的问题。通过做一些试分析：
早、中、晚的时间点，也许一个或两个标 准点，你应该知道你的样品中
化合物的大概量。这些信息非常有价值，可以帮助建立一个合适的标准曲线，并知道应添加多少量的内标。举例来说：如果待定量的样品浓度
范围是
100 fg
～

25 pg
，检测限是
100 fg
，你应该添加
5
～
10 pg
的内
标。一个好的经验法 则是：内标物的量大概是标准工作曲线浓度最高点
的
1/3
。这将给出一个比较不错的 响应，并且不会抑制和干扰待测样品
的离子化。见图
1