美白祛斑整容医院葡萄糖淀粉酶的活力测定

2021年2月23日发(作者：明星产后如何减肥)

葡萄糖淀粉酶的活力测定


【摘要】
糖化酶有催化淀粉水解的作用，
能从淀粉分子非还原性末端开始，
分
解
α< br>-1,4-
葡萄糖苷键生成葡萄糖。
葡萄糖分子中含有醛基，
能被次碘酸钠氧化 ，
过量的次碘酸钠酸化后析出碘，
再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，
计算酶活力。
1g
固体酶粉（或
1ml
液体酶）
，于
40
℃、
pH
值为
4.6
的条件下，
1h
分解可溶性淀
粉产生
1mg
葡萄糖，即为
1
个酶活力单位，以
u/g
（
u/m l
）表示。

【关键词】

葡萄糖

淀粉酶

活力测定

酶活力

【引 言】
酶作为生物体内催化剂，
测定其活力是非常有必要的。
不同种类的酶
的活 力测定方法不同。按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分为
α
-
淀粉酶和
β
-
淀粉酶等。根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分
钟每克鲜 重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数，
来对这两种酶进行有效的测定。
两
种酶作用淀粉的 方式不同。
α
-
淀粉酶可随机地作用于淀粉中的
α
-1,4-
糖苷键，
生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此
又称 为液化酶。
β
-
淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分
子 麦芽糖，
又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使
3,5-
二硝基 水杨
酸还原，生成棕红色的
3-
氨基
-5-
硝基水杨酸。淀粉酶活力 的大小与产生的还原
糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，
用比色法 测定淀粉酶作
用于淀粉后生成的还原糖的量，
以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量< br>表示酶活力。

【正文】

一．
实验原理：
葡萄糖淀 粉酶（糖化酶）在一定的条件下能水解生成葡萄糖，
葡萄糖的醛基被弱氧化剂次碘酸钠氧化。
过 量的碘用硫代硫酸钠滴定。
从碘的减
少量计算葡萄糖的量，从而计算酶活力。

二．试剂与材料：

1.2%
可溶性淀粉液：称取可溶性淀粉
2g< br>，以少许蒸馏水调匀，侵入
80ml
的
沸水中，继续煮至透明状，冷却后，加水 定容至
100ml
4.6
，
0.1mol/L
醋酸缓冲液：
0.1mol/L
苏酸溶液与
0.1mol/L
醋酸钠溶
液等体积混合。< br>
3.0.1mol/L
碘液：称取
36g
碘化钾，溶于
10 0ml
蒸馏水中，加入
14g
碘，
逐渐溶解，加
3
滴盐酸， 定容至
1000ml
4.0.1mol/L
氢氧化钠溶液：称取
4g NAOH
，用水溶解，定容至
1000ml
5.1mol/L
硫酸溶液。< br>量取
56ml
浓硫酸，
倒入适量水中，
用水稀释至
1000m l
6.0.05mol/L
硫代硫酸钠溶液：称取
25g
硫代硫酸钠，0.2g
碳酸钠，溶于
1000ml
煮沸冷却后的水中，存于棕色瓶。放置一周后 ，用
0.1mol/L
重络酸钾滴
定。

7.0.5%
淀粉 指示剂：
称取
0.5g
可溶性淀粉用少量水调匀。
倒入
80ml沸水中，
继续煮至透明，冷却后，定溶
100ml
三．实验步骤：

1.
吸取
2%
可溶性淀粉液
10ml
，加入
PH4.6
醋酸缓冲液
5ml
，混匀后于
40
℃
水浴中预 热
10min
2.
加入酶液
1ml
，于
40
℃， 反应
10min
。反应结束时，沸水中煮
10min
，以
终止酶反应 。

3.
吸取上述反应液
5ml
于碘量瓶中，加入
0.1m ol/L
碘液
5ml
及
0.1mol/L
NAOH
溶液< br>5ml
，混匀，于室温下暗处放置
15min
，加入
2mol/L硫酸酸化。

4.
以
0.5%
可溶性淀粉液作为指示剂，用0.05mol/L
硫代硫酸钠滴定至蓝色
消失为终点。
记录
0.05m ol/L
硫代硫酸钠消耗的毫升数
（
A
）
，
以及空白试验消 耗
的硫代硫酸钠毫升数（
B
）
。

四．结果计算：

在上述条件下，
每小时催化淀粉水解生成
1mg
葡萄糖的酶量定义为一个酶力
单位。


酶活力
=
（B-A
）×
c
×
90.05
×
16/5
×60/10
式中，
B=
空白试验消耗的硫代硫酸钠的毫升数（
ML
）

A=
测定时消耗硫代硫酸钠的毫升数（
ML
）

c=
硫代硫酸钠的摩尔数（
MOL
）

90.05
为葡萄糖的毫克当量

酶活力
=
=

硫代硫酸钠溶液的标定。

准确称取
0.1g
重络酸钾，放入
500ml
碘量瓶中，加
20ml
水溶解，加
1.8g
碘化钾，
15ml2mol/L
盐酸溶 液，混匀，盖好，暗处反应
10min
，加约
200ml
水稀