失眠的最佳治疗方法实验二 绿豆芽的蛋白质含量测定

2021年2月23日发(作者：口腔溃疡的治疗方法)

龙志敏
2 09
制药一班


实验二

绿豆芽的蛋白质含量测定

(
考马斯亮蓝
G-250
比色法
)

一、实验目的

1
、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理，掌握其测定方法。

2
、熟练掌握分光光度计的使用技术。

二、实验原理

考马斯亮蓝
G-250
是一种染料，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，< br>该结合物在
595nm
波长下有最大光吸收。在一定的蛋白质浓度范围内
(0< br>～
1000μg/mL)
，其吸
光度与蛋白质含量成正比，故可用于可溶性蛋白 质的定量测定。

三、仪器、试剂和材料

1
、仪器设备

分析天平、
10mL
塑料离心管、
5mL
移液管、研钵、量筒、
50mL
离心管、
10mL
容量瓶、
离心机、
722
型分光光度计

2
、试剂
< br>（
1
）标准蛋白质原液：称取
100mg
牛血清白蛋白，溶于蒸馏水并 定容至
100mL
，即为
1mg/mL
的标准蛋白质原液。
（
2
）考马斯亮蓝
G-250
试剂：称取
100mg
考 马斯亮蓝
G-250
，溶于
50mL 95%
乙醇中，加入

85%
（
m/v
）的磷酸
100mL
，最后用蒸馏水定容到
1000mL
。此溶液在常温下可放置一个月。

3
、材料：

绿豆芽

四、操作步骤

（一）绿豆芽蛋白质样品的制备

1
、
准确称取新鲜绿豆芽下胚轴
2g
，
放入研钵中，
加入
2mL
蒸馏水研成匀浆，
转移至
50mL
离
心管中，再用
6mL
蒸馏水充分洗涤研钵，洗涤 液收集于同一量筒中，定容至
10ml,
混匀；

2
、冰浴中放置
10-20 min
以充分提取；

3< br>、从量筒中取
1ml
至离心管，
12000rpm
离心
5mi n
，将上清液倒入
10mL
量筒，以蒸馏水定容
至
10mL
，即得绿豆芽蛋白质样品溶液。

（二）标准曲线制作