革兰氏染色的机理和步骤

2021年2月7日发(作者：什么东西可以催情)
.
1.
革兰氏染色的机理和步骤

机理
：
G+< br>、
G-
主要由其
CW
化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，
抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。

G+
的
CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时
CW
脱水，孔径减
少，透性降低，不易脱色 ，呈初染得蓝紫色。

G-
的
CW
：
肽聚糖层薄，
脂质含量高。
乙醇脱色时，
类脂被乙醇溶解，
透性升高，细胞被复染显红色。

步骤：
①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀
涂布于水中。






②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。







③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。







④媒染
:
以碘液媒染
1min
，水洗，吸干水分。
(
细胞内形成结
晶紫与碘的复合物，增强相互 作用）







⑤脱色
(
关键步骤）
：
以
95%
的乙醇脱色
30s
，
应适当振荡均匀，
是乙醇脱色完全。







⑥水洗，吸干。







⑦复染：
??(
第
2
张）复染
30s
，水洗吸干。







⑧干燥镜检。

2
、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。



芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及
皮层的离子强度很高，
这就 使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核
心中水分，
其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失 水，
正是这种
.
.
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3
、引起微生物培养过程中
PH
变化的几种可能反应，并说明如何能
够维 持微培
PH
稳定。

答：
培养过程中，
由于营养物质被分解 利用，
代谢产物的形成与积累，
会导致
PH
变化。

（第
2
张中的图）

还与培养基的
C/N
比有关，
C/N
高，经培养基后
PH
显著下降，
C/N
低，经培养基 后
PH
明显上升。

PH
调节：
①加入缓冲剂
-- ------
常用
:
一氢二氢磷酸盐，
K
2
HPO
4
呈碱性
，
KH
2
PO
4
酸性，只在一定的
PH
范围内调节（
6.4--7.2
）

②大量产酸的菌株，加
CaCO
3
调节，
CaCO
3
难溶于水，不会使培养
液的
PH
过度增加，但可不断中和微生物产的酸。

③培养液中存在天然的缓冲系统，如
AA
，肽，
Pr
均属两性电解质 ，
也起缓冲的作用。

④过酸：治标
------
加
NaO H
、
Na
2
CO
3
中和，治本
-----
加适量氮源：
NaNO3
、
Pr
、
NH3
·
H2O
；增加通风量。

⑤过碱：治标
-----H2SO4
、
H Cl
中和，治本
----
加适量碳源
:G
类，脂
类
;
减小通风量。

3
、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？

抗生素法（青霉 素法）
：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间
的交联，
组织了合成完整的
CW
，野生型
B
处于正常生长繁殖，所以
对青霉素敏感，可被抑制或杀死； 营缺
B
在基本培养基上休眠状态
.
.
存活下来，从而达到浓缩营 缺型目的。制霉菌素法适用于真菌，其可
与
cm
上？（第
1
张）醇作 用，引起
cm
损伤，因为它只能杀死生长
繁殖着的真菌，所以
......
菌丝过滤法
:
基本培上，野生型霉菌，？菌的孢子能萌发并长成菌丝，
而缺型 孢子一般不萌发，或不能长成菌丝，因此培养一段时间后，用
灭菌脱脂棉或滤纸滤去菌丝，
收集 滤液，
重复数遍后可除去大部分野
生型，从而……

4
、生产蛋白酶 的枯草芽孢杆菌发生遗传变异，使得产量性状下降，
你如何解决？写出具体实验方案。

答：将一定量的枯草芽孢杆菌培养液，做一定浓度的稀释，涂布在含
有酪素蛋白质的基本培养基上，< br>37
°
C
培养一段时间后，
取出培养基，
观察单菌落形成的透 明圈大小，
取透明圈直径与菌落直径之比较大的
菌落，
挑取培养做进一步的鉴定，即可得到高产蛋白酶的枯草芽孢杆
菌。

5
、以磺胺为例，说明化学治疗机的作用机制。

答：机理
:
磺胺是叶酸组成部分对氨基苯甲酸的结构类似物，
（磺胺类
药物取代对氨基苯甲酸，干扰叶酸 的合成，抑制了转甲基反应，导致
代谢紊乱，从而抑制
B
生长）
，磺胺的抑菌 作用是因为许多细菌需要
自己合成叶酸而生长，
磺胺对人体细胞无毒性，
因为人体缺乏 从对氨
基苯甲酸合成叶酸的相关酶
-----
二氢叶酸合成酶，不能用外界提供的对氨基苯甲酸自行合成叶酸，
而必须直接利用叶酸为生长因子进行生
长。
（磺胺类
----
与正常代谢产物竞争酶的活性中心，
干扰了酶的功能，
.
.
从而干扰代谢的正常进行）
。

6
、画出生长曲线。
（第
1
张）


1
、微生物的共性？哪个最基本
?



答：①体积小，面积大（最基本）②吸收多，转化快③生长旺，繁殖
快思适应性强，易变异⑤分布广 ，种类多。

2
、比较
G+
，
G-

B
在
CW
结构，组成，对溶菌酶，青霉素的敏感性
4
方面的异同点。< br>

G+
结构

成分

对溶菌酶

青霉素

生
长
期
的
G+
对其敏感

不敏感

单层，
组分
肽聚糖（
90%
）磷
敏感

简单，厚

壁酸（
10%
）

G-
多层，
组分
内壁层：
肽聚糖

外
敏感

复杂，薄

膜：
脂多糖，
磷脂，
脂蛋白

3
、表型延迟现象？如何克服？

答：表型延迟：表型的改变落后于？（第四张）改变的现象，分为

①分离性延迟;
突变的？经
DNA
复制和细胞分裂后变成纯合状态，
表
型才能 表现出来。②生理性延迟
;
杂合状态→纯合状态，仍不能表现
出来，
（如营缺 型）通过中间培养（
CM
，培养过夜）
，可使突变？稳
定下来，克服表型延迟 。

4
、培养
B
常用的斜面培养基是什么？简述配制程序。

答：牛肉膏蛋白胨培养基

.
.
①称量
;
按配 方依次准确称量②融化
:
取少量水于烧杯中，
加
1%
的蛋白
胨，加热溶解，加
0.5%
的牛肉膏，加热溶解，加
0.5%
的
Na Cl,
热熔，
加水补充到所需体积。
③调
PH
至
7.6左右。
④加琼脂固体
2%
，
热熔。

⑤分装入试管，加 塞，包扎，高压灭菌⑥搁置斜面（斜面长度不超过
试管一半）⑦无菌检查：将灭菌的培养基放入
37
°
C
的温室中培养
24-28h
，以检查灭菌是否彻底。

5
、啤酒酵母在分批发酵中的生长曲线分哪几个时期？在菌种扩培
时，哪个时期做 种子？为什么？

答：延滞期，对数生长期，稳定期，衰退期。对数期做种子。利于缩
短延滞期。

6
、菌种衰退的根本原因？防治措施？

答：？的自发突变。
措施：
①减少传代次数②创造良好的培养条件③采用不易衰退的菌种
传代④采取良好的菌种 保藏措施


4
、菌种衰退的根本原因，防止措施。如何区分衰退和饰变？

答：根本原因 ：？的自发突变。
（②传代次数的影响，是负突变株比
例占优势，③培养条件）

防止措施见上题。

区分：衰退：指随着菌体的不断生长，负突变菌株的数量占整个菌 体
数量的比例增大，最终导致菌株的生产性能大幅下降的现象。

①原有形态性状不典型，
②生长速率下降③代谢产物生产力下降④对
.