注射玻尿酸多少钱实验7_植物总DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳检测

2021年2月2日发(作者：去鱼尾纹的最好方法)


植物总
DNA
的提取及琼脂糖凝胶电泳检测

（
2010
级生态班实验方案）


一、

实验目的

1.

理解用
CTAB
法提取植物组织
DNA
的原理。

2.

掌握
CTAB
法提取植物组织
DNA
的方法。

3.

了解真核基因组
DNA
的有关特性。

二、

实验原理

由于植物细胞含有细胞壁及其细胞内高含量的多糖 物质，因此一般的提取
真核细胞基因组
DNA
的方法用在植物细胞上并不十分有效。十 六烷基三乙基
溴化铵
（
cetyltriethy lammonium bromide, CTAB
）
法是常用的提取植物细胞基因
组
DNA
的方法。
CTAB
是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合
物，在高盐溶 液中（
0.7mol/L NaCl
）时，
CTAB-
核酸复合物是可溶的， 当降低
溶液盐浓度到一定程度（
0.3mol/L NaCl
）时，从溶液中沉淀，通 过离心就可将
CTAB-
核酸复合物与蛋白质、
多糖类物质分开。
CTAB-
核酸复合物再用
70
－
75%
酒精浸泡可洗脱掉
CTAB< br>。再经过氯仿
/
异戊醇
(24:1)
抽提去除蛋白质、多糖、
色素等来纯化
DNA
，最后经异丙醇或乙醇等

DNA
沉淀剂将
DNA
沉淀分离
出来。

植物
DNA的提取程序应包括以下几项：①必须破碎或消化细胞壁释放出
细胞内容物；②必须破坏细胞膜及核膜 ，使
DNA
释放到提取缓冲液中，常用
CTAB
一类的去污剂使细胞膜崩解； ③
DNA
粗提物中往往含有大量
RNA
、蛋
白质、多糖等杂质，可利 用氯仿、
RNase
等除去。一旦
DNA
释放出来，其剪
切破坏的程 度必须要降到最低。
CTAB
法提取植物
DNA
，方法比较简单，适用
于大多数植物。虽然得到的
DNA
纯度不是很高，但仍能满足限制性内切核酸
酶分析 或
PCR
扩增的要求。


三、

实验材料、试剂和仪器

1.

材料

新鲜的
植物组织（如幼叶、花器、幼根）或
-80
℃冻存的材料。

仪器、用具
:
离心机、紫外分光光度计、微量移液器、吸头、吸水纸、水
浴锅 、冰箱、研钵、液氮罐、
pH
计、高压灭菌锅、一次性手套、电泳
仪、电泳槽等。
2.

试剂

（
1
）

2 x CTAB
缓冲液
:

CTAB(W/V)













2%