女人闭经年龄(完整版)分子生物学实验复习题附答案

2021年2月2日发(作者：骨康贴)
分子生物学复习题

实验一


DNA
的制备

（
1
）为什么分子生物学实施时要担心
EB
？

溴化乙锭（
Ethidium bromide
）是
DNA
诱变剂， 溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。具有高致
癌性
(
接触致癌
)

（
2
）
DNA
加样缓冲液的用途是什么？
由于植物细胞匀浆含有多种酶类
(
尤其是氧化酶类
)
对
DNA< br>的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需
加入抗氧化剂或强还原剂
(
如巯基乙 醇
)
以降低这些酶类的活性。


（
3
）
DNA
电泳时所用的琼脂糖凝胶其浓度是如何决定的？

1
．核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系

（
2
）琼脂脂糖的浓度

不同大小的
DNA
需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。

琼脂糖浓度与
DNA
分离范围

琼脂糖浓度
/% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0
线状
DNA
大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1

（
4
）琼脂糖凝胶电泳分离
DNA
的原理是什么

DNA
分子在
pH
值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。
DNA
分子在电场中通过琼
脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。由于
DNA
分子可片段的相对分子质量不同，
移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象 不同的
DNA
分离。
DNA
片段迁移距离（迁移率）
与碱基对的对数 成反比，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，
便可测出未知片段的大 小。
但是当
DNA
分子大小超过
20kb
时，
普通琼脂糖凝 胶就很难将它们分开。
此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离
DNA
时，分子大小不宜
超过此值。


（
5
） 琼脂糖凝胶电泳时胶中
DNA
是靠什么发出荧光的？为什么？

溴化乙锭是一 种高度灵敏的荧光染色剂
,
可插入
DNA
双螺旋结构的两个碱基之间，形成一 种荧光络合
物。
在
254nm
波长紫外光照射下，
呈现橙黄色的荧光 。
用溴化乙啶检测
DNA
，
可检出
10-9g
以上的
DNA
含量。

（
6
）制备基因组
DNA
时用到 的以下试剂分别起什么作用？

CTAB
等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋 白，使核蛋白解聚，从而使
DNA
得以游离出来

氯仿有机溶剂，能使蛋白质 变性，并使抽提液分相，因核酸
(DNA
、
RNA)
水溶性很强，经离心后即 可从
抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

无水乙醇上清液中加入无水乙醇使DNA
沉淀，沉淀
DNA
溶于
TE
溶液中，即得植物总
DNA
溶液。

75%
乙醇
,
乙醇轻轻洗涤管壁


实验二


RNA
的制备

1.
制备
RNA
时通常要注意些什么？为什么？

应该要注 意
(1)
不要徒手操作
,
必须带手套
;(2)
加样时不能够 大声说话
,
防止唾液等进入
;
由于
RNA
分子的结构特点 ，容易受
RNA
酶的攻击反应而降解，加上
RNA
酶极为稳定且广泛存在，因 而在
提取过程中要严格防止
RNA
酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关 键。


2.
制备的
RNA
通常有哪些用途？制备的
DNA
通常又有哪些用途？

研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化
RNA
。

质粒
DNA
构建克隆载体
,
分离目的基因


制备好后是通过什么方法检测其有没有降解的？从胶上检测什么指标来判断
RNA
质量好坏？ 为
什么？

1.2%
琼脂糖凝胶电泳。
在紫外检测仪下观察，
完整的总
RNA
样品应呈现三条带：
28S
、
18S
、< br>和
5S rRNA
。
其中
28S rRNA
条带的亮度应该为
18SrRNA
条带的
1.5~2
倍。
反之，
说明部分28S rRNA
已经降解成
18S
rRNA
。
若无清晰条带 ，
则说明样品
RNA
已严重降解。
若加样孔内或孔附近有荧光区带，
则说明有
DNA
污染。



制备好后通过什么方法测定其含量？

RNA
通常用分光光度计测量 ，通常在
A260
的读书在
0.15-1.0
之间才是可靠的，
A2 60
为
1
相当于
RNA
的浓度为
40
微克
/ml

实验三


质粒
DNA
的制备

1.
什么是质粒？质粒有什么主要用途？

染色体外小型（
1-20 0kb
）的共价、闭合、环状的双链
DNA
分子（
cccDNA
）< br>，能自主复制并能稳定遗传
的遗传因子。常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包 括抗生素抗性、产生抗生素、限
制酶、修饰酶等


用途
:
把一个有用的目的
DNA
片段通过
重组
DNA
技术，送进受体细胞中 去进行繁殖和表达的工具
叫载体
(Vector)
。细菌质粒是重组
DNA
技术中常用的载体。


2.
分子生物学实验中用的质粒是由野生型改建而来的，它必须具备哪三个基本要素？

1
环状
DNA
分子能够自我复制，或整合到染色体上，随染色体复制。

2
有多个限制酶切点
(
便于切割
)
3
有标记基因
(
便于进行检验
)

3.
制备的质粒
DNA
在琼脂糖凝胶上通常以三种形式条带存在，它们分别是什么？
哪种条 带形式的质粒
DNA
其转化或转染效率最高？

三种结构：线形、开环、闭环超螺旋。



实验四


感受态细菌的制备及质粒
DNA
的转化

（
1
）什么是感受态细菌？感受态细菌的主要用途是什么？

感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源

DNA
分子通过时细胞的状态。

感受态细菌吸收异源

DNA
分子，使受体细胞获得新的遗传性状
.


（
2
）什么是转化？转化与转染的主要区别是什么？

转化（
transformation)
感受态细菌捕获质粒
DNA
的过程
转染（
transfection)
细菌捕获噬菌体
DNA
的过程


（
3
）有哪些主要因素决定质粒
DNA
的转化效率？

1.
细菌的生长状态和密度：
OD006=0.3~0.5

细菌出于对数期或者对数前期

2.
质粒
DNA
：

数量：质粒
DNA
不超过感受态细胞体积的
5%

大小： 分子量越大转化效率越低，超过
30Kb
的质粒
DNA
很难转化成功

构型：超螺旋的
DNA
具有较高的转化效率，重组
DNA
效率低一些 ，环状
DNA
相比线性
DNA
转化
效率高一些

3.
所用试剂纯度、质量、器皿的洁净程度

4.
防止杂菌和其他外源
DNA
的污染


（4
）质粒
DNA
的转化过程可分为哪几个阶段？每个阶段中主要发生了什么事件？

1
吸附阶段：完整的双链
DNA
分子吸附于感受态细胞表面。