长春整形分子生物学实验理论考试

2021年2月2日发(作者：强碱性食品)
2012-2013
学年第二学期分子生物实验考试题库

1
、
PCR
原理是什么

答：
PCR
技术 是一种在体外快速扩增特定基因或
DNA
序列的方法。它的特异性
是由两个人工合成的 引物序列决定。引物就是与待扩增
DNA
片段两侧互补的寡
核苷酸。
双链DNA
是在临近沸点的温度下加热时便会分离成两条单链
DNA
分子
（变 性）
，两引物分别与两条
DNA
的两侧序列特异复性，在适宜条件下，
DNA
聚合酶以单链
DNA
为模板，利用反应混合物中的
4
种脱氧核苷三磷 酸，在引物
的引导下，按
5'→3'
方向复制互补
DNA
，即引物的 延伸。在适宜的条件下，这种
热变性
→
复性
→
延伸的过程不断循环重 复，前一个循环的产物
DNA
可作为后一
个循环的模板
DNA
参与< br>DNA
合成，使产物
DNA
的量按
2^n
方式扩增。

2
、
PCR
一般体系应加入哪些试剂

答：
10* PCR
缓冲液（含
Mg+
）
、模板
DNA
、四种
d NTP
、一对引物、耐热
Taq
聚
合酶。

3
、
PCR
防止其它
DNA
污染，应注意哪些问题

答：标本放置时密封要严避免溢于容器外，容器要清洁避免造成相互间交叉污
染；
移液 器使用要规范避免污标本间污染
;
无菌工作台操作，
避免气体中有杂菌。

4
、影响
PCR
产物产量的因素主要有哪些

答：引物、酶 的种类及浓度、
dNTP
的质量（优劣）与浓度、模板核酸的量与纯
化程度、
Mg2+
浓度、温度与时间、循环次数。

5
、引物设计应注意哪些问题

答：①引物长度不宜过长
20bp< br>左右较佳；②引物扩增片段的长度以
200-500
为
宜；③引物碱基的中G+C
的含量应在
40-60%
为宜，
G+C
太少则扩增效果不 佳，
G+C
过多则易出现非特异条带；④避免引物内部出现二级结构，避免两天引物
间 互补，特别是
3'
端的互补否则会形成二聚体结构；⑤引物
3'
端的碱基，特 别
是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致
PCR
失败。

6
、简述克隆某一原核生物基因片段一般操作步骤

答：克 隆某一原核生物基因片段是可用
PCR
技术对基因进行大量扩增，首先准
备好实验材料 大体为：需扩增的模板
DNA
、
DNA
聚合酶、
dNTP
混 合液、
PCR
缓
冲液、引物等、其过程大体分为
3
个步骤：第一步： 变形：通过加热使
DNA
模
板双螺旋链解离为单链，第二步：退火：当温度突然降低时 。由于模板
DNA
结
构复杂难再互补，而引物建构简单且数量巨多易于模板
D NA
互补杂交从而使引
物结合到模板上
DNA
上，第三部：延生：在
DNA
聚合酶和四种底物及镁离子存
在条件下
DNA
连开始延伸。以上
3
个步骤为一个循环，数小时后即可得到大量
扩增的目的片段。

7
、什么是质粒质粒的基本性质有哪些

答：
a
质粒是染色 体外能够进行自主复制的遗传单位，
包括真核生物的细胞器和
细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖 核酸
(DNA)
分子。现在习惯上用来专指细菌、
酵母菌和放线菌等生物中染色体以外 的
DNA
分子。在基因工程中质粒常被用做
基因的载体。
b
具有复制 起点。
携带易于筛选的选择标记。具有多种限制性内切
酶的切割位点。具有较小的相对分子质量 和较高的拷贝数。

8
、质粒抽提实验中溶液
I
、
II、
III
各有什么作用

答：溶液
I:
由葡萄糖
,EDTA,Tris Cl
组成
.
葡萄糖的作用是增加溶液的粘度
,
减少抽提
过程中的机械剪切作用
,
防止破坏质粒
DNA;EDTA
的作用是络和掉
Mg2+
等二价金< br>属离子
,
防止
DNA
酶对质粒分子的降解作用
;Tris Cl
能使溶菌液维持溶菌作用的最
适
PH
范围。

溶液II:
由
SDS
与
NaOH
组成
.SDS
的作 用是解聚核蛋白并与蛋白质
分子结合使之变性
;NaOH(pH>12)
的作用是破坏 氢键
,
使
DNA
分子变性。

溶液
III:
由
KAc
与
HAc
组成
,
是
pH
值为的 高盐溶液
.
能中和溶液
II
的碱性
,
使染色体
DN A
复性而发生缠绕并使质粒
DNA
复性
.K+
离子会与
SD S
形成溶解度很低的盐并
与蛋白质形成沉淀而除去
.
溶液中的染色体
DNA
也会与蛋白质
-SDS
形成相互缠绕
的大分子物质
,
很容易与小分子的质粒
DNA
分离
,
此外
,
高盐溶液也有利 于各种沉
淀的形成。

9
、碱裂解法抽提质粒
DNA
的基本原理是什么

答：碱裂 解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒
DNA
之间在拓扑学上的差异而
达到分离目的。
PH
介于
~
时，线性
DNA
变性，双链打开，而质粒
DNA
虽变性，
但两条互补链彼此缠绕，当
PH
恢复到中性时，质粒
DNA
可迅速准确的完成复
性，而线性
DNA
复性较困难，缠绕成网状，通 过离心可沉淀除去。

10
、在碱裂解法提取质粒
DNA
操作中应注意哪些问题

答：
（
1
）正确使用移液器。
（
2
）溶液
ll必须新鲜配制。
（
3
）加入酚
-
氯仿后必须
充分混匀。
（
4
）混匀的过程不能太过剧烈。
（
5
）每次弃上清液时都 应用移液器
吸去管壁上黏附的水珠。
（
6
）吸取酚
-
氯仿溶 液时要将
Tip
头插入液体分层的下
侧。
【可根据第一次试验自己写的注意事 项进行补充】

11
、在碱裂解法提取质粒
DNA
时，

酚
/
氯仿的作用是什么

答：酚是强烈的蛋白质变性剂，能有效使蛋 白质变性而除去，氯仿有强烈的脂
溶性，去除脂类杂质，本身酚：氯仿：异戊醇
=25
：
24
：
1
的主要作用是抽提蛋
白质

12
、碱裂解法提取的质粒
DNA
分子一般有几种构象电泳时移动速率有何差异

答：超螺旋
DNA
＞线性
DNA
＞开环
DNA
< br>13
、提取植物基因组
DNA
的基本原理是什么在操作过程中应该注意什么
答：
①
基本原理
:
利用液氮对植物组织进行研磨，从而破碎细 胞。细胞提取液中
含有的
SDS
溶解膜蛋白而破坏细胞膜，
使蛋白质变性而沉 淀下来。
EDTA
抑制
DNA
酶的活性。
再用酚、
氯仿抽提 的方法去除蛋白，
得到的
DNA
溶液经异丙醇沉淀。
②
注意事项:
⑴
材料要新鲜娇嫩，叶片研磨地越细越好；
⑵
操作应为无菌操作；⑶
操作应温和，不宜剧烈晃动；
⑷
注意移液器的正确使用。

14
、在植物基因组提取过程中，
DNA
降解的可能原因

答：原因
:
⑴
从植物中提取
DNA
时没对细胞内的
DNA
酶进行灭活；
⑵
操作过程
中被细菌污染了；
⑶
口水等含酶物 质飞入样品中；
⑷
温度、
PH
等变化过于剧烈。

15
、在植物基因组提取过程中，提高

DNA
产量的措施

答：应当选取幼嫩的叶片，因为幼嫩叶片中的
DNA
含 量高些；组织抽提前要保
存在液氮中，以免
DNA
被破坏；纯化时注意抑制核酸酶污染 ，使用
EDTA
等防
止
DNA
降解；整个实验过程应该温和操作，不 能剧烈振荡，混合过程要轻缓，
减少抽提，减少
DNA
片段被认为降解，因为过度振荡 会使
DNA
断裂成小片段。

16
、在使用苯酚进行
DNA
提取时应该注意什么

答：酚 一定要进行碱平衡，苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜、眼睛会
对人体造成损伤，应当注意防护； 它是出去蛋白质的，要充分振荡使蛋白质变
性，但不能太剧烈而打断
DNA
；离心后应 该避免再次吸入有机相的苯酚
—
氯仿，
尽量只取上清，不应该让苯酚最后仍有残留，需 抽提干净。

17
、在提取植物基因组
DNA
过程中，使用苯酚与氯 仿的作用是什么

答：用苯酚和氯仿抽取，去除多余的蛋白，保证提取的基因组较纯净。

18
、在植物基因组提取过程中，该如何检测和保证基因组
DNA
的质量

答：检 测：琼脂糖凝胶电泳；保证
DNA
活性
:
用
EDTA
抑制< br>DNA
酶活性，从而保
证
DNA
不被破坏。

19
、什么是限制性内切酶

答：限制性内切酶是一类能够识别双链
DNA
分子中的某种特定核苷酸序列，并
由此切割
DNA
双链结构的核酸内切 酶，有三种类型，
Ⅰ
类，
Ⅱ
类，
Ⅲ
类，他们
都有甲 基化修饰功能和限制酶功能，
Ⅱ
类常用于分子克隆

20
、常见的< br>Ⅱ
型限制性内切酶切割双链
DNA
后会产生





末端或





末端。

答：粘性，平

21
、下列有关限制性内切酶的描述，错误的是：
（
C
）

A
．一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列

B
．限制性内切酶的活性受温度的影响

C
．限制性内切酶能识别和切割
RNA

D
．限制性内切酶可以从原核中提取

22
、现有一长度为
l 000 bp
的
DNA
分子，
用限制性核酸内切酶
EcoR
I
酶切后得到的
DNA
分子仍是
l 000 bp
，
用
Kpn
I
单独酶切得到
400 bp
和
600 bp 2
种长度的
DNA
分
子．
用
EcoR
I
，
Kpn
l
同时酶切后得到
200 bp
和
600 bp 2
种长度的
DNA
分子。
请画
出该
DNA
可能的酶切图谱。