安康考试管理中心-台湾试管囊胚成功率
输血技术操作规程
2020
年
1
目
录
1
、试管法鉴定
ABO
血型标准操作规程
2
、试管法鉴定
RhD
血型标准操作规程
3
、试管法鉴定
Rh
其他血型抗原鉴定标准操作规程
4< br>、微柱凝胶卡式法鉴定
ABO
正反血型及
RhD
血型标准操作规程
5
、盐水法交叉配血试验标准操作规程
6
、微柱凝胶抗人球蛋白检测卡交叉配血标准操作规程
7
、盐水介质不规则抗体筛查标准操作规程
8
、微柱凝集抗人球蛋白法不规则抗体筛查标准操作规程
9
、直接
Coombs
’实验微柱凝胶卡法标准操作规程
10
、新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
11
、孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
2
输血科
SOP
文件
试管法鉴定
ABO
血型标准操作规程
文件编号:
-01-01
生效日期:
2020-12-01
责任部门:输血科
一、目的
页
码:第
2
页,共
4
页
为规范输血科
AB O
血型鉴定的技术操作,为临床提供准确可靠的结果,确保临床输血安全有效。
二
、适用范围
该实验适用于体检、输血前及新生儿溶血病等
ABO
血型鉴定。
三、方法及原理
1
、方法:试管凝集法
2
、原 理:根据红细胞上有无
A
抗原或(和)
B
抗原,以及血清中有无抗
A
或(和)抗
B
抗体,可以将
红细胞血型分为
A
型、
B
型、
AB
型及
O
型
4
种。可利用商品化
lgM
抗
-A
、抗
-B
血型定型试剂鉴定红细
胞表面
ABO
抗原即正定型,利用已知
ABO
血型的试剂红细胞鉴定同一标本血清(或血浆 )中的抗
-A
和
(或)抗
-B
抗体即反定型。正反定型结果一致方可 确定受检标本
ABO
血型,若正、反定型结果不一致,
需增加辅助实验以确定
ABO
血型。
四、仪器、试剂与耗材
1
、仪器:台式低速离心机、血型血清学专用离心机、显微镜、试管架。
2
、试剂:抗
-A
(市售)
、抗
B
(市售)血型定型试剂(单 克隆抗体)
、生理盐水、
2%~5%A1
型、
B
型、
O型试剂红细胞。
3
、耗材:玻璃试管、塑料试管
12*75
、 规格
2ml
塑料吸管、记号笔、玻片等。
五、标本采集及处理
3
1
、按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤,采集患者或受血者的血液。
2
、推荐使用
EDTA
抗凝静脉血,将标示清晰的患者姓名、性别、年龄、住院号 、病室
/
门急诊、床号
等信息的标签贴在标本管上,由医护人员或专门人员将患者标本 送交输血科,标本采集量≥
3ml
。
3
、严重溶血、脂血、污染等标本不适用与本项检测。
六、操作步骤
ABO
血型正、反定型实验
(
1
)将待检标本
4000
转离心
2
~
3
分钟,分离血 浆。
(
2
)取洁净塑料试管
4
支,分别标记抗
- A
、抗
-B
、
Ac
、
Bc
。
(
3
)在标记抗
-A
、抗
-B
试管中加入
1
滴抗
-A
、抗
-B
血型定型试剂,在标记
Ac
、
B c
试管中用塑料吸管
加入两滴待检血浆(血清)
。
(
4< br>)再向标记抗
-A
,抗
-B
试管中用塑料吸管各加入
1
滴
2%~5%
待检红细胞悬液(红细胞悬液推荐使用
生理盐水与待检标本压积红细胞 配制,必要时用生理盐水洗涤红细胞最少
1
次后再配制)
。向标记
Ac
、
Bc
试管中分别加入
1
滴
2%~5%A1
、
B
、试剂红细胞悬液。
(
5
)轻轻混合试管内容物后,静置
2
~
3
分钟,经血型血清学离心机以
1000g
,离心
15
秒,或遵照离
心机说明书要求离心。
(
6
)将试管从离心 机中取出,拿成锐角细胞扣一面对准自己,缓慢倾斜,使液体反复冲刷红细胞扣,
当红细胞不再附着在试 管壁上时,
继续缓慢地倾斜和振摇,
仔细观察试管内是否形成均匀的红细胞悬液
或凝集 块。
(
7
)怀疑为弱凝集的应转移致显微镜下观察结果,记录观察到的凝集 强度或溶血程度。通过
ABO
正、
反定型实验结果相互验证,最终确定待检标本血型。
七、室内质控
1
、自制质控品基本原则
(< br>1
)
A1
型红细胞与抗
A
、抗
D
试剂发生凝 集反应,反应强度≥
3+
,与抗
B
不发生凝集反应;
B
型红 细
胞与抗
B
、抗
D
试剂发生凝集反应,反应强度≥
3+,与抗
A
不发生凝集反应;
O
型红细胞与抗
D
试剂发< br>生凝集反应,反应强度≥
3+
,与抗
A
、抗
B
不发生 凝集反应
(
2
)
A1
型血浆应与
B
型红 细胞发生凝集反应,与
A
型、
O
型红细胞不发生凝集反应;
B
型血浆应含有
抗
A
抗体,该血浆与
A1
型红细胞发生凝集反应,与
B
型、
O
型红细胞不发生凝集反应。推荐使用商品
化质控品。
2
、频次要求,
推荐每批次实验进行室内质控,
;至少在每天实验开始前 、
实验中途更换试剂批号后应重
做质控实验。
3
、操作要求,质控品应受检标本采用完全相同实验操作步骤。
4
、失控判定:阳性凝集强度<
3+
;阴性质控出现阳性结果;阳性质控的结果与预期结果比较出 现超过
2+
凝集强度的差异,以上三种均视为出控。对失控结果,应及时处理及分析原因,并认 真填写《失控登
记表》与《失控处理记录》
,质控结果失控,受检标本检测结果不可用,查找原 因、纠正影响因素后,
需重新检测。
5
、可以选择商品化质控品,也可以利用实验室标本资源按标准化操作自制质控品。
八、结果判定与解释
1
、结果判定标准
(
1
)阳性(
+
)结果:红细胞形成凝集或发生溶血。
< br>(
2
)阴性(
--
)结果:红细胞无溶血,肉眼及镜下均未见凝集。< br>
4
ABO
定型试管法红细胞凝集强度判定如下表
凝集强度
描述
4+
红细胞凝聚成一大块,血清透明清晰
3+
红细胞凝集成数大块,血清尚清晰
2+
红细胞凝块分散成多个小块如沙状,周围可见游离红细胞,背景清晰
1+
肉眼可见大颗粒,周围有较多游离红细胞,背景混浊
±
镜下可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多游离红细胞,背景混浊
Mf
混合外观凝集(
MF,mixed field
)
,镜下可见少数红细胞凝集,而绝大多数红细胞仍
呈分散分布
pH
表示部分溶血,有一些红细胞残留
H
表示完全溶血,无红细胞残留
-
镜下未见凝集,红细胞均匀分布
2
、结果解释
可参照以 下表格进行
ABO
血型判定,正反定型实验结果一致,方可确定
ABO
血型。
ABO
正反定型结果
标准血清
+
被检者红细胞
抗
A
+
-
-
+
抗
B
-
+
-
+
抗
A+B
+
+
-
+
血检者
血型
A
B
O
AB
标准红细胞
+
被检者血清
A
细胞
-
+
+
-
B
细胞
+
-
+
-
O
细胞
-
-
-
-
注:出现以下情况需查找原因,再确定血型
(
1
)
ABO
正定凝集强度≤
2+
(
2
)
ABO
反定凝集强度≤
2+
(
3
)反定型
Ac
和
Bc
价差≥
2+
(
4
)正反定型完全不相符提示
九、注意事项
1
、推荐使用有国家食品药品监督管理总局
( CFDA )
正式批准文号的 商品化试剂红细胞;如实验室自
制试剂红细胞,应选择
3
人份以上健康献血者同型新鲜 红细胞混合,用生理盐水充分洗涤至少
3
次,
以除去血清中的抗体、蛋白成份及可溶性 抗原,并经血型定型试剂正定型鉴定无误后方可使用。
1
、试剂使用前,应仔细阅读 说明书并检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效,试剂血清
用量、被检红细胞悬液的浓度和用 量要遵照说明书。
2
、注意血浆纤维蛋白块对凝集反应结果判读的影响。
3
、试验过程通常先加血清,后加红细胞,注意离心力、温度、红细胞浓度及抗原抗体的比例对 实验
结果的影响。
5
、试剂用毕后应按要求的温度放冰箱保存,以免细菌污染。
6
、试管、滴管和玻片必须清洁干燥,防止溶血。
7
、按理
IgM
抗
-A
和抗
-B
与相应红细胞的反应温度以
4℃为最强,但为了防止冷凝集现象的干扰,
5
一般仍在室温(20
~
24
℃)内进行试验,
37
℃可使反应减弱。
8
、离心时间不宜过长或过短,速度不宜过快或过慢,以防止假阳性或假阴性结果。
9
、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
10
、判断结果后应仔细核对、记录,避免笔误。
十、参考文献
1
、试剂说明书
2
、
《输血技术操作规程》
(输血科部分)学术顾问
刘景汉,主编
汪德清
输血科
SOP
文件
试管法鉴定
RhD
血型标准操作规程
文件编号:
-01-01
生效日期:
22020-12-01
责任部门:输血科
一、目的
为规范输血科
RhD
血型鉴定的技术操作,为临床提供准 确可靠的结果,确保临床输血安全有效。
二、适用范围
该实验适用于体检 、输血前及新生儿溶血病等
RhD
血型鉴定。对于献血者、孕妇和母亲是
Rh
阴性
的新生儿,
RhD
抗原初筛阴性时,还需要进一步做
RhD
阴性 确认实验。
三、方法及原理
1
、方法:试管凝集法
< br>2
、原理:本品系用
RhD(IgM)
血型人源化单克隆抗体杂交瘤细胞培养上 清液配制而成,采用凝集实验原
理,根据是否出现凝集可判断红细胞膜上是否存在
D
抗 原。用于检测人
Rh
血型系统中的
D
抗原,但不
能检出
D< br>ⅵ。
四、仪器、试剂与耗材
1
、仪器:台式低速离心机、血型血清学专用离心机、显微镜、试管架。
2
、试剂:抗
-D
血型定型试剂(单克隆
lgM
抗
-D
)
、生理盐水。
3
、耗材:玻璃试管、塑料试管
12*75、规格
2ml
塑料吸管、记号笔、玻片等。
五、标本采集及处理
1
、按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤,采集患者或受血者的血液。
页
码:第
2
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4
页
6
2
、推荐使用
EDTA
抗凝静脉血,将标示清晰的患者姓名、性别、年龄、住 院号、病室
/
门急诊、床号等
信息的标签贴在标本管上,由医护人员或专门人员将患者 标本送交输血科,标本采集量≥
3ml
。
3
、标本质量符合要求, 抗凝充分,无凝块、无血液稀释、细菌污染、离心后无溶血及重度乳糜。
六、操作步骤
1
、将待检标本
4000
转离心
2
~
3
分钟,分离血浆
2
、取塑料试管
2
支,做好标记,分别加入
1
滴抗
-D
血型定型试剂、对照试剂(如生理盐水)
。
3
、再加
1
滴
2%~5%
待检红细胞 悬液(红细胞悬液推荐使用生理盐水与待检标本压积红细胞配制,必要
时用生理盐水洗涤红细胞最少1
次后再配制)
,混匀,静置
2~3
分钟,
以
1000 g
离心
15
秒(或遵照离心
机说明书要求离心。
)
3
、将试管从离心机中取出,拿成锐角细胞扣一面对准自己,缓慢倾斜,使液体反复冲刷红细胞扣,当
红细胞不再附着在试管壁上时,
继续缓慢地倾斜和振摇,
仔细观察试管内是否形成均匀 的红细胞悬液或
凝集块。
4
、肉眼观察并记录结果。
七、室内质控
同本科室
ABO
血型鉴定标准操作规程进行
八、结果判读与解释
1
、结果判定标准:同本科室
ABO
血型鉴定实验试管法。
2
、结果解释:
(1)
实验管凝集,对照管不凝集,表示受检红细 胞上有
D
抗原,判定结果
RhD
阳性。
(2)
实 验管及对照管不凝集,即表示受检红细胞上没有
D
抗原,判定结果
RhD
阴性 。
(3)
如对照管是凝集,结果无效。需查找原因,重新检测,必要时增加辅助实验。
九、注意事项
1
、试剂使用前平衡至室温。
2
、试剂溶液出现浑浊,则不能继续使用。
3
、溶血标本可能干扰结果。
4
、纤维蛋白凝块会影响结果判读为假阳性。
5
、直抗阳性新生儿 的
RhD
血型因为抗体的遮断现象导致阴性结果,需要进行放散后进行
Rh
血 型鉴定。
十、参考文献
1
、试剂盒说明书
2
、
《输血技术操作规程》
(输血科部分)学术顾问
刘景汉,主编
汪德清
7
输血科
SOP
文件
辰溪县人民医院医院
试管法鉴定
Rh
其他血型抗原鉴定标准操作规程
责任部门:输血科
一、目的
文件编号:
cxry- sxk
-01-01
生效日期:
2020-12-01
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码:第
2
页,共
4
页
为规范输血科
Rh
其他血型抗原鉴定的技术操作,为临床提供准确可靠的结果,确保临床输血安全
有效。
二、适用范围
(
1
)该实验适用于体检、输血前及新生儿溶血病等
Rh
其他血型分型鉴定。
(
2
)输血前进行
Rh
分型,可使患者得到与
Rh
血型相匹配的红细胞,能够尽可能避免因反复输血导致Rh
血型抗体的产生。
(
3
)
Rh
系统是一 个极为复杂的血型系统,其重要性仅此于
ABO
系统,
Rh
系统内有
45
种不同的抗原,
除了最重要的
D
抗原以外,
Rh
系统其 他主要抗原有
C
、
c
、
E
、
e
抗原,通过 输血或妊娠可产生免疫性抗
体,当遇有相应抗原的红细胞,可致溶血反应或新生儿溶血病,
三、方法及原理
1
、方法:试管凝集法
2
、原 理:
Rh
系统其他重要抗原有
4
个(
C
、
c
、
E
、
e
抗原)
,用
4
种抗体血型定型试剂< br>lgM
(抗
C
、抗
c
、
抗
E
、抗< br>e
)抗体来检测红细胞抗原。
四、仪器、试剂与耗材
1
、仪器:台式低速离心机、血型血清学专用离心机、显微镜、试管架。
2
、试剂:
lgM
血型定型试剂(单克隆抗体)抗
C
、抗
c< br>、抗
E
、抗
e
、生理盐水。
3
、耗材:玻 璃试管、塑料试管
12*75
、规格
2ml
塑料吸管、记号笔、玻片等。
五、标本采集及处理
1
、按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤,采集患者或受血者的血液。
2
、推荐使用
EDTA
抗凝静脉血,将标示清晰的患者姓名、性别、年龄、住院号 、病室
/
门急诊、床号
等信息的标签贴在标本管上,由医护人员或专门人员将患者标本 送交输血科,标本采集量≥
3ml
。
3
、标本质量符合要求,抗凝 充分,无凝块、无血液稀释、细菌污染、离心后无溶血及重度乳糜。
六、操作步骤
1
、将待检标本
4000
转离心
2
~
3
分 钟,分离血浆
2
、取塑料试管
4
支,做好标记,分别加入
1
滴抗
C
、抗
c
、抗
E
、抗
e
血 型定型试剂、对照试剂(如生
理盐水)
。
8
3
、再用塑料试管加
1
滴
2%
~
5%
待检红细胞 悬液分别于标记管中(红细胞悬液推荐使用生理盐水与待检
标本压积红细胞配制,
必要时用生理 盐水洗涤红细胞最少
1
次后再配制)
,
混匀,
静置
10分钟,
以
1000g
离心
15
秒(或遵照离心机说明书要求离心 。
)
3
、将试管从离心机中取出,拿成锐角细胞扣一面对准自己,缓慢倾斜 ,使液体反复冲刷红细胞扣,当
红细胞不再附着在试管壁上时,
继续缓慢地倾斜和振摇,
仔细观察试管内是否形成均匀的红细胞悬液或
凝集块。
4
、肉眼观察并记录结果。
七、室内质控
不适用
八、结果判读与解释
1
、结果判定标准:同本科室
ABO
血型鉴定实验试管法。
2
、结果解释:
(1)
实验管凝集,对照管不凝集,表示受检红细胞上有对应抗原存在。
(2)
实验管及对照管不凝集,即表示受检红细胞上没有对应抗原存在。
(3)
如对照管是凝集,结果无效。需查找原因,重新检测,必要时增加辅助实验。
九、注意事项
1
、试剂使用前平衡至室温。
2
、试剂溶液出现浑浊,则不能继续使用。
3
、溶血标本可能干扰结果。
4
、纤维蛋白凝块会影响结果判读为假阳性。
5
、若出现弱凝集, 须于
37
℃放置
5
分钟,然后再离心观察结果。
6
、很强的冷凝集素或蛋白失调可能造成串钱状的假阳性结果。因此建议病人自身的血清或血浆进行对
照 。如果对照实验是阳性结果,建议用温盐水多次洗涤后在进行抗原检测。
十、参考文献
1
、试剂盒说明书
2
、
《输血技术操作规程》
(输血科部分)学术顾问
刘景汉,主编
汪德清
3
、人民卫生出版社《输血相容性检测及疑难病例分析》主编
桂嵘
张志昇
王勇军
9
输血科
SOP
文件
微柱法鉴定
ABO
血型及
RhD
血型标准操作规程
文件编号:
-sxk
-01-01
生效日期:
2020-12-01
责任部门:输血科
一、目的
同
ABO
血型鉴定及
RhD
血型鉴定(试管法)
二、适用范围
页
码:第
2
页,共
4
页
同
ABO
血型鉴定及
RhD
血型鉴定(试管法)
三、方法及原理
1
、方法:微柱凝集法
2
、原 理:
ABO/RhD
血型定型检测试剂卡,采用凝胶作为微柱凝胶卡的填充物,将生物化学的凝 胶分子
筛过滤技术、离心技术和血型血清学的抗体特异性结合在一起,其中抗
-A
凝胶 管中灌注了含
lgM
抗
-A
抗体的凝胶,抗
-B
凝胶管中灌 注了含
lgM
抗
-B
抗体的凝胶,
抗
-D
凝胶管中灌注了含
IgM-D
抗体的凝
胶
,
分别用于检测红细胞上
A
、
B
抗原及
RhD
抗原。
A
细胞、B
细胞及
Ctr
管中灌注了不含血型抗体的凝
胶,用于检测血浆中的抗体 。当抗原抗体反应时,
凝集的红细胞因体积大于分子筛孔径,在离心力的作
用下不能通过分子筛 凝胶而留在凝胶上层或游离在凝胶中,
呈现阳性反应;
而抗原抗体没有反应时,
未凝集的红细胞在离心力的作用下可通过凝胶而沉积在微柱凝胶管的底部,呈现阴性反应。
四、仪器、试剂与耗材
1
、仪器:台式低速离心机、微柱凝集卡专用离心机 、微柱凝集卡专用孵育器、移液器、试管架、
2
、试剂:
ABO
血 型鉴定正反定型微柱凝胶卡、生理盐水、
0.8%~1%A1
型、
B
型、O
型试剂红细胞
3
、耗材:塑料试管、塑料吸管、移液器吸头、记号笔等。
五、标本要求
1
、建议使用抗凝的血样,
尤其是
EDTA
抗凝管采集的血样,
需要量≥
2ml
。
(
EDTA
抗凝采血管为紫帽
管)
。
2
、标本标示清晰、完整、规范,原则上是收到标本应及时进行检测。
3< br>、标本质量符合要求,抗凝充分,无凝块、无血液稀释、细菌污染、离心后无溶血及重度乳糜。
4
、按要求配制红细胞悬液备用,试剂说明要求浓度
0.5%~0.8%
,本 实验室允许浓度
1%
左右。
六、操作步骤
严格按照ABO
、
Rh
血型鉴定微柱凝集卡使用说明书的要求操作。
1
、将待检标本
3000
转离心
3
分钟,分离血浆,取压积红细胞按要 求配制成
0.8%~1%
红细胞悬液备用。
2
、按实验要求取出< br>ABO
、
RhD
血型定型检测试剂卡,注意检查外观,专用离心机离心
5
分钟,
900rpm2
分钟,
1500rpm3
分钟,确保凝胶管 的凝胶上层存在液面,凝胶不会干枯。将符合要求的卡进行标记,
按照试验需要轻轻撕开封口膜。
10
3
、将待检者
0.8%~1%
红细 胞悬液用塑料吸管加
1
滴分别滴入第一至第
3
微管中,每管约
50u l
。
4
、将分离好的待检者血清用塑料吸管加
1
滴分别滴 入第四至第六微管中,每管约
50ul
。
5
、将反定型
0 .8%~1%A1
型、
B
型、
O
型试剂红细胞悬液分别加入第四至第 六微管中。
6
、即刻用专用离心机离心
5
分钟,即
900 rpm2
分钟,
1500rpm3
分钟,取出肉眼判定结果。
七、室内质控
同
ABO
血型鉴定及
RhD
血型鉴定(试管法)
八、结果判读与解释
1
、结果判读标准见表
微柱凝胶卡判读标准
反应图
反
应
强
度
4+
3+
多数
RBC
凝聚
红
细
胞
分布
绝
大部分红
细
胞
在凝胶顶
部
在凝胶表层,
少
数
RBC
凝集颗
胶表层
2+
部分
R BC
沉积
于凝胶底部,
部
分
RBC
凝集颗
粒
悬浮于凝
胶
中
1+
多数
RBC
沉 积
于凝胶底部,
可
见少数
RBC
凝
集
颗粒悬浮于
凝胶中
双群(混合凝集)
阴性
部分红细胞位
于凝胶顶部;
另
一部分红细胞
沉积于凝胶底
部
所
有红
细胞
通
过凝胶,
沉积在
凝胶底部
表面,
呈线条形
粒
悬浮于近
凝
注:
1< br>、弱阳性(±)
:表示绝大多数
RBC
沉积于凝胶底部,极少数
RBC
凝集颗粒悬浮于近凝胶底部。
2
、部分溶血(
pH
):凝胶管中液体呈清澈透明红色,凝胶中有残留
RBC.
3
、完全溶血(
H
)
:凝胶管中液体呈清澈透明红色,凝胶中无残留
RBC.
3
、结果解释
4
、红细胞全部沉淀在微柱底部,判读阴性,无凝集。
5
、红细胞凝集颗粒出现在微柱介质中判读为阳性,有凝集,溶血视为阳性反应。
< br>6
、综合正反定型结果,
按照判读标准进行
ABO
、
RhD< br>血型判定。
如对照孔为阳性则表明实验结果不可
信,应查找原因。
7
、与抗
-D
凝集≥
2+
,没有混合外观,表示
D
抗 原存在。报告为
RhD
阳性。
8
、与抗
-D
凝集 <
2+
,没有混合外观,转入试管法复查:≥
2+
表示
D
抗 原存在,报告为
RhD
阳性;与
抗
-D
的反应≤
1+
,则不能报告为
RhD
阳性,需要额外的实验来检测与抗
-D
的弱反应。< br>
9
、若正定型结果<
3+
,需要试管法复查,参照试管法结果进一步 分析,可能为亚型或抗原减弱。
10
、若反定型结果<
2+
或O
型反定型价差超过
2+
,需要用试管法复查,参照试管法结果进一步分析,可能为亚型或抗体减弱。
11
、若正反定型不符,需要试管法复查,参照试管法结果进一步分析。
九、注意事项
1
、
血液样本建议是抗凝的样本,尤其是
EDTA
抗凝的样本,以避免红细胞凝集块加入凝胶引起假阳
性反应。
2
、
按照临床输血技术规范要求采集血样
。
3
、凝胶卡在使用前需仔细检查,若凝胶卡封口开裂、孔中凝胶干涸、凝胶中有气泡时,不可使 用。
4
、撕开凝胶卡封口膜时,不宜用力过猛,以免造成凝胶微孔间的交叉污染。
5
、被检的红细胞悬液的浓度为
0.8
~
1%
,浓度过高或过低会 影响检测结果。
11
6
、溶血、脂血、细菌污染等情况的样本可影响检测结果。
7
、如 怀疑有纤维蛋白或血浆蛋白干扰,被检红细胞在配制成
0.8-1%
浓度前须洗涤
3- 5
次,保证充分去
除血浆成分,且没有纤维蛋白不溶物,否则会阻击红细胞在微柱凝胶中的沉降 ,呈现假阳性反应。
8
、
在
Ctr
孔(自身阴 性对照)孔结果为阳性时,试验结果无效。可能原因是由于被检红细胞已经致敏
IgM
抗体导致 自发凝集,此时可以用
DTT
或
2-ME
将已经致敏到红细胞上的
I gM
抗体破坏后再行
Rh
分型试验。
9
、人源血液样本存在潜在的传染性,凝胶卡使用后按医疗生物垃圾废弃物处理。
10
、
抗
-D
凝胶不能鉴定弱
D
、部分
D
(如
D
Ⅵ)抗原。对于患者,如果抗
D
凝胶管中患者的红 细胞反
应为阴性,则确定为
RhD
阴性。
11
、
若出现混合视野反应,
需要了解被检者近期
3
个月内是否有输血史,
或被检者 是否为骨髓移植患者。
12
、由于
6
月龄以下的婴儿其血浆
/
血清中不似成人一样存在可预见的抗
A/
抗
B
抗体,因此只做正 定型
不做反定型。
13
、建议离心后立即判读结果,不要将微柱凝胶卡水平放置。
14
、如在微柱孔中出现溶血现象,提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致溶血,
故对< br>此标本要认真分析,并向上级主管技术人员报告并讨论。
15
、加样时不应触 碰到凝胶,先加红细胞再加血浆或血清,并保留“反应池”与“分离池”之间的“气
室”
,加样 完成后轻轻震动微柱凝胶卡混匀,以便抗原抗体充分反应。
十、参考文献
1
、
《输血技术操作规程》
(输血科部分)学术顾问
刘景汉
主编
汪德清
2
、试剂盒说明书
3
、人民卫生出版社《输血相容性检测及疑难病例分析》主编
桂嵘
张志昇
王勇军
12
输血科
SOP
文件
盐水法交叉配血实验标准操作规程
文件编号:
-sxk
-01-01
生效日期:
2020-12-01
责任部门:输血科
一、目的
页
码:第
2
页,共
4
页
检测受血者、献血者血液之 间是否存在不配合的抗原、抗体成分,
为临床提供准确可靠的结果,
同
时规范输血科交 叉配血试验的技术操作。
二、适用范围
该实验适用于输血前盐水法交叉配血实验的的常规检测,
三、方法及原理
1
、方法:试管凝集法
2
、原理:盐水介质交叉配血实验,是根据
lgM
抗体在盐水介质中可与红细胞上对应抗原结合产生肉眼
可见凝集的特点,将献血 者红细胞与受血者血清(或血浆)反应,为“主侧反应”
,检测对供着红细胞
起反应的
lgM
抗体;献血者血清与受血者红细胞反应,为“次侧反应”
,检测对受血者红细胞起反应的
lgM
抗体。
四、仪器、试剂与耗材
1
、仪器:台式低速离心机、血型血清学专用离心机、显微镜、试管架。
2
、试剂:生理盐水。
3
、耗材:玻璃试管、塑料试管
1 2*75
、规格
2ml
塑料吸管、记号笔、玻片等。
五、标本采集及处理
1
、按照临床输血技术规范中的血液样本采集步骤,采集患者或受血者的血液。
2
、推荐使用
EDTA
抗凝静脉血,将标示清晰的患者姓名、性别、年龄、住院号 、病室
/
门急诊、床号
等信息的标签贴在标本管上,由医护人员或专门人员将患者标本 连同输血申请单送交输血科。标本采集
量≥
3ml
。
3
、受血者、献血者标本质量符合要求,无血液稀、无严重溶血、脂血、细菌污染等。
4
、受血者配血实验的血标本必须是输血前
3
天之内的。
六、操作步骤:
1
、取洁净小试管
1
支放置试管架上,试 管架上无其他任何试管和其他受血者标本。
2
、根据受血者的血型,拿输血申请单和 放血盒到储血冰箱按照时间先后顺序取一袋与受血者血型相同
的血液,
从供者血袋上取一个供血 者条码贴在试管上的
3/4
处,
再取一个小样辫,
用剪刀剪掉小样辫的
一端放进试管里,再轻轻剪开另一端,让小样辫的血液流进试管里。冲洗剪刀,并用卫生纸擦干。
13
3
、将供血者血样和受血者标本
4000r离心
2
~
3
分钟
4
、取
2
支洁净试管,标记主次和次侧。
5
、再 取
2
支试管分别装供者与受者压积红细胞,用生理盐水(必要时,生理盐水洗涤
1~
3
次)配制
成
3%
~
5%
红细胞悬液。
6
、按标记主侧用塑料吸管加入受血者血清(或血浆
)2
滴和供血者红 细胞悬液
1
滴;次侧加入供血者血
清
2
滴和受血者红细胞悬液
1
滴,混匀,静置
2
~
3
分钟,经血型血清学离心机以
1 000g
,离心
15
秒,
或遵照离心机说明书要求离心。
7
、轻轻侧动试管,观察结果。
8
、观察结果:先观察试管上层液 有无溶血,再将试管拿成锐角细胞扣一面对准自己,缓慢倾斜,使液
体反复冲刷红细胞扣,
当红 细胞不再附着在试管壁上时,
继续缓慢地倾斜和振摇,
仔细观察试管内是否
形成均匀的 红细胞悬液或凝集块(必要时用显微镜观察)
。冬季室温较低,注意冷凝集素引起的凝集反
应。
9
、复查供受者
ABO
血型,方法同
ABO
血型 鉴定试管法。
七、室内质控
1
、基本原则,每次质控实验应至少 选择一个受血者质控品(含有
lgM
抗体,抗体强度在
2+
左右)
, 一
个抗原阳性献血者质控品和一个抗原阴性献血者质控品。
2
、频次要求, 推荐每批次实验进行室内质控。至少在每天实验开始前、实验中途更换试剂批号后应重
做质控实验。
3
、操作要求,质控品应受检标本采用完全相同实验操作步骤。
4< br>、失控判定:阳性凝集强度<
3+
;阴性质控出现阳性结果;阳性质控的结果与预期结果 比较出现超过
2+
凝集强度的差异,以上三种均视为出控。对失控结果,应及时处理及分析原因 ,并认真填写《失控登
记表》与《失控处理记录》
,质控结果失控,受检标本检测结果不可用, 查找原因、纠正影响因素后,
需重新检测。
5
、可以选择商品化质控品,也可以利用实验室标本资源按标准化操作自制质控品。
八、结果判定与解释
1
、结果判定标准,同
ABO
血型鉴定实验试管法。
2
、结果解释
(
1
)主侧和次侧均无凝集和(或)溶血,表示盐水介质法交叉配血相合。
(
2
)
主、
次侧任何一侧或两侧同时出现凝集或溶血,则表明配血不 相合,需要进一步查找不相合原因。
九、注意事项
1
、盐水介质 交叉配血实验室临床最基本的相容性实验,能检测
IGM
类血型抗体,包括一些不具有临床意义的抗体,如冷凝集素抗
-I
及抗
-IH
等,一般不能检测出
IgG
类血型抗体。
2
、
除完全排除献血者
受 血者血清
IgG
类意外抗体存在的情况下,
不能单独使用盐水介质进行交叉配血
实验,以防止
IgG
类意外抗体漏检。
3
、
盐水介质交叉配血实验出现不相合时,
应重新对献血者
受血者
ABO
血型进行鉴定,
以排除
ABO
血型
鉴定错误
4
、注意实验过程中温度离心力离心时间红细胞浓度抗原抗体比例试管摇动力度等因 素对实验结果的影
响,注意力及离心及时观察结果。
5
、注意药物治疗对交 叉配血结果的影响,如患者接受右旋糖酐、聚维酮(
pvp
)等治疗,应对红细胞进
行 洗涤,如接受肝素治疗,应用鱼精蛋白中和,如怀疑存在血清中补体对试验结果的干扰,
可预先进行14
补体灭活。
6
、怀疑存在自身抗体红细胞缗钱状等干扰时,应加做自身对照实验加以鉴别。
< br>7.
为防止冷凝集素引起的凝集反应,应严格控制实验室温度在
20
~
24
摄氏度范围内,以免影响结果判
断。
十、参考文献
1
、全国临床检验操作规程》第四版
2
、
《临床输血技术规范》
2000
版
3
、
《输血技术操作规程》
(输血科部分)学术顾问
刘景汉
主编
汪德清
4
、人民卫生出版社《输血相容性检测及疑难病例分析》主编
桂嵘
张志昇
王勇军
15
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