什么是肺痨2020年高二生物选修一专题五《血红蛋白的提取和分离》知识点总结测试无答案

2021年2月2日发(作者：痔疮膏能治痘痘吗)
2020
年高二生物选修一专题五《血红蛋白的提取和分离》知识点总结测试无答案

专题五

血红蛋白的提取和分离

【知识框架】

1.
分离不同种类蛋白质可以利用蛋白质各种特性的差异，
如分子的
___ _______
、
所带电荷的
_________
、
_______ __
、
__________
和对其他分子的
_________
等 。
凝胶色谱法也称做

，
是根据

分离蛋白质的有
效方法；电泳是指带电粒子在
_______
的作用下发生< br>________
的过程，许多重要
的生物大分子，
如＿＿＿＿＿、
＿ ＿＿＿等都具有＿＿＿＿＿＿＿＿，
在＿＿＿
＿＿＿下，
这些基团会带上＿＿＿＿＿＿ ＿，
在电场的作用下，
这些带电分子会
向着与其所带电荷＿＿＿＿＿的电极移动。电泳 利用了待分离样品中各种分子

的差异以及
___
、

的不同，使带电粒子产生不同的
___________，
从
而
实
现
样
品
中
各
种分
子
的
分
离
。
常
用
的
电泳
法
有
_________________
电泳和
_____ ______________
电泳。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶
电泳中的迁移率取决于 ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿以及＿＿＿＿＿＿＿等因素。
在测
蛋白质分子量（纯度鉴定）时通常使用
____
电泳。

2.
当相对分子质量不同的蛋白质通过琼脂凝胶层析时，相对分子质量

的蛋
白质容易进入凝胶内部，
路程较

，
移动速度

；
而相对分子质量大的蛋白
质无法进入凝胶内部，
路程较

，
移动速度

，
导致相对分子质量小的

流
出，相对分子质量大的

流出，相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3.
蛋白质的提取和分离一般分为四步：

、
粗分离、

和

。

（
1
）样品（哺乳动物的血液）处理和粗分离

样
品
处
理
和
粗
分
离
的
过
程
为
：









→










→

→

。①红细胞的洗涤：目的：去除＿＿＿＿＿；方法：＿＿＿＿
＿＿＿＿离心。

采集血样前，盛血容器中需预先加入
_______________
作为
____ ________
，
以防止

______
。
采
血
后
应
及
时
分
离
____________
和
_________
，
分
离
方
法
采
用< br>______________
（
500r/min
离心
10min< br>）
，
分离后，
去除
____
层透明的黄色血浆，
将< br>____
层
______
色红细胞倒入烧杯，加入
____
倍 体积的
___________
，缓慢搅拌
10min
，
低速短时间 离心，
如此重复洗涤三次以上，
直至
____________________，
表明红细胞已洗涤干净。
洗涤红细胞时，
洗涤次数过少，
无法将
__________
全部
除去，
如果血液样品离心后分层不明显，
可能原 因是＿＿＿＿＿；
离心速度过
____
和时间过
_____
，会使< br>白细胞
和
淋巴细胞
一同沉淀，得不到＿＿＿的红细胞，影
1

/
5
2020
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响后续提取的血红蛋白的＿＿＿＿。

②血红蛋白的释放：
将已洗涤干净的红 细胞倒入烧杯，
加＿＿＿＿到原血液的
体积，使红细胞
________
，再 加
40%
体积的＿＿＿＿，使
________
溶解，置于
____ __
搅拌器上充分搅拌
10
分钟（加速细胞破裂）
,
红细胞破裂释放出血红蛋
白。

③分离血红蛋白溶液：
将搅拌好的混 合液转移到离心管内，
以
2000r/min
的速
度进行高速离心
1 0 min
，离心管中的溶液从上往下分为
4
层
:
第
1
层（最上层）
：＿＿＿＿＿＿的
______
层

第
2
层（中上层）
：＿＿＿＿＿＿＿的沉淀层，＿＿色薄层固体

第
3
层（中下层）
：＿＿＿＿＿的水溶液层，＿＿＿＿的液体

第
4
层（最下层）
：其它杂质的＿＿＿＿＿沉淀层

将试管 中的液体用＿＿＿＿过滤、
除去＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，
于＿＿＿＿＿中
静置片刻后， 分离出下层的＿＿＿＿＿＿＿＿。

④粗分离：即＿＿＿＿。将装有血红蛋白溶液的透析袋放入
pH
为
7.0
的
____________
中
，< br>透
析
12h
，
透
析
的
原
理
是


















___
___________________________
，

透析的目的是
____________ ___
。

（
2
）血红蛋白的纯化——凝胶色谱法
(
层析
)
①制作色谱柱：柱体是长
40cm
、内径
1.6cm
的玻璃管，柱顶部插入安 装了
________
的橡皮塞，柱底部插入安装了
_______
（带头部 ）的橡皮塞（橡皮塞上
部切成锅底状凹穴）
，在橡皮塞中安装移液管时，移液管上部
_ ______
（必需
/
不
能）
超过橡皮塞凹穴底面，
凹穴上 覆盖
尼龙网
，
再用
尼龙纱
将橡皮塞上部包好插
入柱体的下端 ，
移液管头部作为出口部位，
连接
细尼龙管
，
用
螺旋夹控制尼龙管
的打开与关闭。

②装填凝胶色谱柱：商品凝胶使用前直接放在＿＿＿ ＿＿中膨胀，并用＿＿
＿＿＿将加入洗脱液的
_________
加热至接近沸腾，这 种方法既加速凝胶膨胀，
又除去凝胶中可能带有的
________
和排除凝胶颗粒内 的
_______
。因为干的凝胶
和用缓冲液（洗脱液）平衡好的凝胶的体积差别_______
（不大
/
很大）
，所以装
柱
前
需
要
根
据
色
谱
柱
的
内
体
积
计
算
＿
＿
＿
＿
＿
＿
＿
。
交
联
葡
聚
糖
凝
胶
（
Sepha dexG-75
）的“
G
”表示凝胶的
_________
、

_________
及
__________
，
“
75
”
表示凝胶的得水值，
即每克凝胶膨胀时吸水
_____g
。
凝胶装填色谱柱时，色谱柱下端连接的尼龙管应
_______
（打开
/
关 闭）
，将配制
好的凝胶悬浮液
_________
（一次性
/
分多次）
缓慢倒入色谱柱内，
期间
_____
（可
2

/
5