上海九院试管和仁济比生化检测方法汇总样本

2021年2月1日发(作者：试管移植后肚子偶尔痉挛)
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一、

血清谷丙转氨酶
( SGPT)
赖氏改良法

器材
:
试管及试管架、

移液器或吸量管、

恒温水浴锅、
721
型分光光度计、

温度计、

动物血清

试剂
:

( 1) 0.1mol/L pH7.4
磷酸盐缓冲液
:

①
0.1mol/L
磷酸氢二钠溶液
:
称取
Na2HPO 414.22g
或
Na2HPO4·2H2O17.8g
溶



解于蒸馏水中
,
并稀释至
1 000ml,4
℃保存。

②
0.1mol/L
磷酸二氢钾溶液
:
称
KH2PO413.61g
溶解
dH2O
中
,
稀释至
1000ml,

4
℃保存。

③ 将
0.1mol/L
磷酸氢二钠溶液
420ml
和
0.1mol/L
磷酸二氢钾溶液
80ml
混
和即



为
0.1mol/L pH7.4
的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴
, 4
℃保存。

( 2)
标准丙酮酸
(
含丙酮酸
2.0
μ
mol/mL) :


取标准丙酮酸钠
10mg,
用上述缓冲液准确定容为
50mL
。此液须当日用当
日配。

( 3) SGPT
底物液
(
含α
-
酮戊二酸
2< br>μ
mol/ml
及
DL-
丙氨酸
200
μ
m ol/ml) :

取α
-
酮戊二酸
29.2mg, DL-
丙氨酸
7g ,
用试剂
1
溶成
100ml,
在稀释到刻
度前
,
以
1mol /L NaOH
调
pH 7.4(
因为转氨酶在
pH7.3
以下或
7.6
以上
的环境中酶活性下降
)
,
加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用
4
天。

( 4) GOT
底物液
(DL
–天冬氨酸
200mmol/L ,
α
-
酮戊二酸
2mmol/L):
称取α
-
酮戊二酸
29.2mg
和
DL-
门冬氨酸
2.66g
置于一 小烧杯中
,
加入
1mol/L
氢
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氧化钠
20.5ml
使溶解
,< br>并校正
pH
至
7.4,
然后将溶液移入
100ml
容 量瓶
内
,
用
0.1mol/L
磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内 保存。

( 5) 2.4-
二硝基苯肼溶液
:

取分析纯
2,4-
二硝基苯肼
19.8mg,
用
1mol/L HCl
溶于
100ml,
置棕色瓶
中保存。

( 6) 0.4mol/L NaOH
溶液
:

称取
16g
固体
NaOH,
用蒸馏水溶解
,
冷却至室温
,
定容至
1000mL,
备
用。


操作步骤
:

1
、
标准曲线绘制
:
取试管
18
支按下表操作。

对

照

0
0.50
0.1
0
0
1
2
3
4
5
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
28
57
97
150
200
24
61
114
190
—

试

管

号

丙酮酸标准液
( 1
毫升
2
微克分子
)
SGPT
或
SGOT
底物

0.1M
磷酸盐缓冲液
PH7.4
相当于谷丙转氨酶单位

相当于谷草转氨酶单位

每个样做
3
个平行
,
置
37
水浴
30
分钟
,
各管加
2, 4-
二硝基苯肼液
0.5mL,
混匀
,
再在
37
℃水浴中放置
20mL,
各管加
0.4mol/L
氢氧化钠溶液
5mL,
混匀
, 10
分钟后
,
从水浴箱中取出
,
以蒸馏水调”零”点
,
用
520nm
波长比色
,
读取各管之吸光值
,
各管之吸光值均减去空白的吸光值
,
然后以
吸光值为纵坐标
,
各管相应的转氨酶单位为横坐标。绘制成标准曲线。为了
方便
,
可列出各光度相当于转氨酶单位表。

2
、

酶活性测定
:
取试管两支
,
注明测定管及对照管。

试剂

样品测定
(
每个样
3
个平行
)
血

清
( mL)
0.1
SGPT
或
SGOT
底物
( mL)
0.5
对

照
(
每个样
3
个平行
)
0.1
—

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置
37
℃水浴
30
分钟
( SGOT
为
37
℃
, 60
分钟后再加枸橼酸苯胺
1
滴
)
2.4-
二硝基苯肼
( mL)
0.5
0.5
置
37
℃水浴
20
分钟

SGPT
或
SGOT
底物
( mL)
—

0.5
NaOH
溶液
( mL)
5.0
5.0
对照及样品各做
3
个平行
,
充分摇匀
,
静置
10
分钟后
,
用
520nm
波长比
色
,
以蒸馏水调节零点
,
读取吸光值
,
用样品减去对照吸光值
,
求得样品的
谷丙转氨酶活力。




?

谷丙转氨酶活性单位
:

37
℃
, pH7.4,
每小时每毫升血清催化生成
1
μ
mol
丙酮酸为
1
个
单位。例
:
0.1ml
血清每小时 催化生成
0.1
μ
mol
丙酮酸
,
即相当于
GPT
100U
/ 100ml
血清。

?

注意
:

1.
在测定
SGPT
时
,
应事先将底物、

血清在
37
℃水浴中



保温
,
然后在血清管中加入底物
,
准确记时。